木糖發酵產乙醇絲狀真菌的鑒定及發酵特性

范金霞，楊 謙，姚 琳，陳 剛

(哈爾濱工業大學生命科學與工程系，150001哈爾濱，yangq@hit.edu.cn)

燃料乙醇因其污染小、具有環境友好型的特點，成為新型燃料資源有望取代日益減少的化石能源(如石油和煤炭)［1］.傳統乙醇發酵原料為玉米、淀粉等糧食作物，糧食短缺的今天這一生產方式受到很大的限制.木質纖維素物質(如農作物廢棄物、木屑、薯渣等)是世界上最為豐富的生物質資源［2］，由纖維素、半纖維素和木質素組成，其水解產物主要是葡萄糖和木糖.釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)能發酵葡萄糖但不能發酵木糖產生乙醇.80年代以來，眾多的學者進行了木糖菌種的篩選以及菌種遺傳工程改造研究，木糖發酵微生物主要集中在畢氏酵母(Pichia)，假絲酵母(Candida)和管囊酵母(Pachyso1en)3個屬［3］，構建基因重組菌常用的宿主菌種有釀酒酵母(S.cerevisiae)、運動發酵單胞菌(Zymomonas mobilis)和大腸桿菌(E. coli)［4-6］，對絲狀真菌的木糖發酵研究的很少.本試驗從自然界中篩選到一株絲狀真菌發酵木糖產乙醇的菌株，對其進行了形態學和分子生物學鑒定，同時對其發酵特性進行了研究.

1 試驗

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗菌種

cs-28由本試驗室分離，現已送至中國典型微生物研究所保存.E.coli Top10為本實驗室保存.樹干畢赤酵母(Pichia stipitis)來自中科院微生物研究所.

1.1.2 試劑

Taq DNA聚合酶、dNTP、pMD-18T載體、DNAMarker(DL2000)購自寶生物工程(大連)有限公司;膠回收試劑盒購自上海華舜生物公司，引物合成和測序由上海生工生物技術有限公司完成;木糖購自美國Sigma公司;其他試劑均為國產分析純試劑.

1.1.3 培養基

初篩培養基(PXA):馬鈴薯……