哈爾濱產(chǎn)乙醇桿菌屬AFLP反應(yīng)體系的建立與優(yōu)化

鄭國香，陳忠林，鄭文玲，關(guān)正軍，吳憶寧，任南琪

(1.哈爾濱工業(yè)大學(xué)市政環(huán)境工程學(xué)院，150090哈爾濱，rnq@hit.edu.cn;2.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)工程學(xué)院，150030哈爾濱)

擴增片段長度多態(tài)性(Amplified Fragment Length Polymorphism，AFLP)是結(jié)合 RFLP和RAPD優(yōu)點的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一項技術(shù).基于其可靠性和PCR技術(shù)的高效性，且具有快速、靈敏、穩(wěn)定、所需DNA量少、多態(tài)性檢出率高、重復(fù)性好、可以在不知道基因組序列特點的情況下進(jìn)行研究等特點，被認(rèn)為是一種十分理想的、有效的、先進(jìn)的分子標(biāo)記方法，現(xiàn)已廣泛用于遺傳圖譜構(gòu)建［1－2］、遺傳多樣性研究［3－5］、基因定位及品質(zhì)鑒定［6－7］等方面.利用AFLP分子標(biāo)記的方法探討產(chǎn)氫突變菌株和野生菌株的基因組DNA之間的遺傳多態(tài)性差異，將為更深入地研究產(chǎn)氫突變菌株的突變機理提供重要的信息基礎(chǔ).針對哈爾濱產(chǎn)乙醇菌桿菌屬的分子標(biāo)記研究還未見有報道，本研究以發(fā)酵產(chǎn)氫細(xì)菌作為研究對象，建立和優(yōu)化適合于哈爾濱產(chǎn)乙醇桿菌屬基因組AFLP分析的技術(shù)體系，為進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)氫細(xì)菌的遺傳代謝機理的深入研究提供重要的技術(shù)支撐和信息基礎(chǔ).

1 實驗

1.1 實驗菌株和培養(yǎng)條件

本實驗所用的出發(fā)菌株分離于CSTR生物制氫反應(yīng)器的活性污泥，為乙醇型厭氧發(fā)酵產(chǎn)氫細(xì)菌，哈爾濱產(chǎn)乙醇桿菌Ethanoligenens harbinense ZGX4，以其為出發(fā)菌株經(jīng)過誘變篩選獲得突變株Ethanoligenen harbinenseYR－3，以上菌株由哈爾濱工業(yè)大學(xué)市政環(huán)境生物技術(shù)中心提供.

1.2 微生物的保存、激活及厭氧培養(yǎng)條件

［8］方法進(jìn)行.

1.3 DNA的提取

將1 mL已經(jīng)預(yù)先活化的菌液接入10 mL的RZL－2培養(yǎng)基中，37°C進(jìn)行厭氧……