高效液相色譜法分析馬鈴薯中α-茄堿

1 引 言

α-茄堿是變綠發(fā)芽后的馬鈴薯中含量最高的一種生物堿，具有抗腫瘤、抑菌、強(qiáng)心、鎮(zhèn)痛等多種功效。目前對馬鈴薯中α-茄堿的高效液相色譜檢測法（HPLC）報道較少，并存在重現(xiàn)性較差、目標(biāo)峰難分開等問題。王守蘭等利用HPLC測定馬鈴薯中α-茄堿含量，但未能將α-茄堿與α-卡茄堿分開；楊煜等 利用HPLC對馬鈴薯α-茄堿進(jìn)行檢測，由于保留時間過短，導(dǎo)致溶劑峰與α-茄堿色譜峰分離度不佳。另外，文獻(xiàn)\\利用HPLC檢測了龍葵、番茄和茄子中的α-茄堿，但由于生物堿種類和存在狀態(tài)有差異，也很難應(yīng)用于馬鈴薯α-茄堿的檢測分析。

本實驗通過系統(tǒng)優(yōu)化篩選HPLC分析條件，建立了快速、準(zhǔn)確分析馬鈴薯中α-茄堿的HPLC方法，為馬鈴薯中α-茄堿提取物的工業(yè)化生產(chǎn)和開發(fā)利用提供了科學(xué)依據(jù)。

2 實驗部分

2.1 儀器與試劑 LC10 AT-VP Plus 高效液相色譜系統(tǒng)（日本島津公司），Wondasil C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 m）；Lab Tech 可見-紫外分光光度計（北京萊伯泰科儀器有限公司）；α-茄堿標(biāo)準(zhǔn)品（Sigma公司）；乙腈和甲醇等均為色譜純；其它試劑均為分析純。馬鈴薯購自長沙市某農(nóng)貿(mào)市場。

2.2 樣品制備

參考文獻(xiàn)\\的方法：稱取3.0 g馬鈴薯粉，以100 mL乙醇-乙酸混合液（10∶3，V/V）回流提取4 h，過濾濃縮至浸膏狀；加入30 mL 1% H2SO4溶解，過濾。調(diào)節(jié)濾液至pH 10.5，4 ℃靜置過夜，以4000 r/min離心30 min，棄上清液，沉淀用甲醇溶解并定容至5 mL，以0.45 m膜過濾備用。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

準(zhǔn)確稱取α-茄堿標(biāo)準(zhǔn)品2 mg，用甲醇溶解并定容至5 mL，搖勻，即得0.4α-茄堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

3 結(jié)果與討論

3.1 檢測波長選擇

在190～400 nm波段對α-茄堿標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行紫外掃描，確定最大吸收峰波長為210 nm。

3.2 色譜條件優(yōu)化 （1） 單因素實驗 當(dāng)檢測波長為210 nm，柱溫為35℃，流速為1 mL/min，流動相為乙腈-0.4% H3PO4（23∶77， V/V）時，馬鈴薯中α-茄堿和α-卡茄堿得到分離，分離度為1.2（圖1），明顯優(yōu)于文獻(xiàn)\\。（2） 正交實驗 色譜條件對檢測馬鈴薯中α-茄堿的影響大小依次為：流速＞溫度＞濃度＞流動相配比，其中流速影響顯著。正交實驗確定的最佳色譜條件為：流速0.8 mL/min，溫度30 ℃，流動相為0.4% H3PO4-30%乙腈（76∶24， V/V）。在此條件下能夠較好地檢測馬鈴薯中α-茄堿和α-卡茄堿。

3.3 驗證性實驗 （1） 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 準(zhǔn)確移取1α-茄堿標(biāo)準(zhǔn)液0.16， 0.32， 0.48， 0.64和0.80 mL 定容至1.0 mL，在最優(yōu)色譜條件下進(jìn)樣10

L，以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度（g/L）為橫坐標(biāo)（x），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），得回歸方程為： Y＝109657x＋11322，R2 ＝0.9997，表明α-茄堿在0.16～0.80 g/L范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。（2） 色譜峰確認(rèn) 在最優(yōu)色譜條件下，分別檢測α-茄堿標(biāo)準(zhǔn)液和樣品液（圖2），標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間與樣品圖中峰1的保留時間一致，故樣品圖中峰1為α-茄堿，峰2為α-卡茄堿。

3.4 精密度、穩(wěn)定性及重復(fù)性分析 取樣品液在最優(yōu)色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，RSD為0.66%，表明本方法精密度較高。取樣品液分別在0，1，2，3，4，12和24 h進(jìn)樣，RSD為2.4%，表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。以同一批馬鈴薯為原料，制備樣品液5份。在最優(yōu)色譜條件下進(jìn)樣，重復(fù)5次，RSD為4.73%，表明本方法的重復(fù)性較好。

3.5 回收率分析 稱取6份已測定了α-茄堿含量的馬鈴薯樣品1.5 g，加入適量α-茄堿標(biāo)準(zhǔn)溶液，按2.2節(jié)制備樣品溶液，在最優(yōu)色譜條件下進(jìn)樣，重復(fù)6次，回收率在95%～105%范圍內(nèi)，平均回收率為96.3%，RSD為1.3%，表明方法準(zhǔn)確可靠。

References

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2 LI Zhi-Wen， ZHOU Bao-Li， LIU Xiang， DING Yu-Wen， CHANG Lin-Lin， BAI Li-Ping （李志文， 周寶利， 劉 翔， 丁昱文， 常琳琳， 白麗平）. Journal Of Shenyang Agricultural University（沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報）， 2008， 39（4）: 479～482

3 WANG Shou-Lan， ZHU Jia （王守蘭， 朱 佳）. Food Science（食品科學(xué)）， 1999， 20（6）: 60～61

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Detection of α-Solanine in Potato by High Performance

Liquid Chromatography

XIAO Wen-Jun1，2， LI Qin1， XIONG Xin-Yao1， ZHOU Kai-Jing2， ZHANG Sheng1，2， CHENG Ling2， REN Guo-Pu*3

1（National Research Center of Engineering Technology for Utilization of Botanical Functional Ingredients，

Hunan Agricultural University， Changsha 410128）

2（Botanic Resource Engineering Department of Horticure and Landscape College，

Hunan Agricultural University， Changsha， 410128）

3（Food Science and Engineering College of Central South Forestry University， Changsha 410004）

Abstract A method was established for the determination of α-solanine in potato by high performance liquid chromatography. The α-solanine was extracted from potato by refluxing extraction. The effects of different mobile phase composition， concentration， concentration ratio， flow speed， column temperature and other factors on α-solanine separation were studied. When the mobile phase was a mixture of acetonitrile and 0.4% phosphoric acid aqueous solution， flow speed was 0.8 mL/min， temperature was 30 ℃， detection wavelength was set at 210 nm， α-solanine could be separated well. The calibration of α-solanine was in good linearity in the range of 0.16－0.80 g/L. The average recovery was 96.3% with relative standard deviation of 1.3% （n＝6）.

Keywords Potato; α-Solanine; High performance liquid chromatography

（Received 4 January 2011; accepted 6 April 2011）