胃癌組織中MMP-9、CD44v6和VEGF的表達變化及意義

于海英，劉 暢，高鳳蘭，孫中華

(1漯河醫學高等專科學校，河南漯河462002;2吉林大學第一臨床醫院)

胃癌的預后差，病死率高，探討胃癌的生物學特性是目前研究熱點［1］。腫瘤新生血管形成和細胞外基質降解是其浸潤和轉移的重要環節。黏附分子CD44拼接變異體v6(CD44v6)主要見于具有轉移能力的腫瘤細胞，且參與淋巴細胞活化、增殖及再循環［2］。2010年2～10月，我們采用免疫組化方法檢測80例胃癌組織中基質金屬蛋白酶9(MMP-9)、CD44v6和血管內皮生長因子(VEGF)，探討其在胃癌發生發展的作用?，F報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 本組80例胃癌標本均來源于我校附屬醫院2007年1月～2010年5月手術治療的胃癌患者。80例患者中，男48例，女32例;年齡34～76(56.1±11.2)歲。均經病理證實且隨訪資料完整，術前均未行放化療以及其他抗腫瘤治療。TNM分期:Ⅰ期10例、Ⅱ期29例、Ⅲ期23例、Ⅳ期18例;有淋巴結轉移52例，無淋巴結轉移28例。每例標本均取癌組織及其對應的正常癌旁組織，均用10%甲醛固定，石蠟包埋。

1.2 主要試劑及MMP-9、CD44v6、VEGF檢測方法 鼠抗人MMP-9和CD44v6單克隆抗體、兔抗人VEGF多克隆抗體、免疫組化SP試劑盒、DAB顯色劑和中性樹膠等(均購自福州邁新公司)。所有標本均采用免疫組化SP法染色，操作及結果判定參照試劑盒說明書。用已知MMP-9、CD44v6和VEGF陽性表達的乳腺癌組織切片為陽性對照，PBS替代一抗為陰性對照。細胞膜或胞質內出現棕黃色顆粒為MMP-9、CD44v6、VEGF染色陽性。每一切片在高倍鏡下(×200)隨機計算8～10個視野，按陽性細胞數占腫瘤細胞總數的百分比判定結果:MMP-9和CD44v6:陽性細胞＜10%為陰性(－)、≥10%為陽性(+);VEGF:陽性細胞 ＜10%為 －、10% ～49%為弱陽性、≥50%為強陽性，后兩者為+。

1.3 統計學方法 采用SPSS12.0統計軟件。率的比較用χ2檢驗，相關性分析用Spearman相關檢驗法。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

胃癌組織中MMP-9、CD44v6和VEGF的陽性表達率分別為 70.0%(56/80)、76.2%(61/80)和83.7%(67/80)，分別高于癌旁組織中的3.8%(3/80)，5.0%(4/80)和8.7%(7/80)，P 均 ＜0.01。有淋巴結轉移患者的胃癌組織中MMP-9、CD44v6和VEGF陽性表達率分別為 80.7%(42/52)、88.4%(46/52)和96.1%(50/52)，均高于無淋巴結轉移者的50.0%(14/28)、53.6%(15/28)和 60.7%(17/28)，P均 ＜0.05;Ⅲ ～ Ⅳ期胃癌組織中 MMP-9、CD44v6和VEGF的陽性表達率分別為82.0%(32/39)、84.6%(33/39)和 92.3%(36/39)，分別高于Ⅰ ～ Ⅱ 期的58.5%(24/41)、68.3%(28/41)和75.6%(31/41)，P 均 ＜0.05。

MMP-9、CD44v6表達陽性的胃癌組織中，VEGF表達也呈陽性，MMP-9、CD44v6與VEGF的表達呈正相關(r=0.331、0.421，P 均 ＜0.05)。

3 討論

惡性腫瘤細胞具有向局部浸潤和遠端轉移的能力是威脅患者生命的主要原因。腫瘤的侵襲轉移表現為腫瘤細胞突破基底膜，侵入毛細血管和淋巴管，轉移至臨近和遠處組織器官［3］。MMPs是一類與腫瘤的侵襲和轉移關系十分密切的蛋白水解酶，MMP-9是其中重要成員，其作用底物為基底膜和細胞外基質的的膠原蛋白。腫瘤細胞在侵襲和轉移過程中突破各種屏障的能力較強，同時癌細胞可自身分泌或誘導其他細胞分泌大量的MMPs，破壞基底膜的完整性，導致轉移。

本研究結果顯示，胃癌組織中MMP-9表達顯著高于癌旁組織，且有淋巴結轉移患者的胃癌組織中MMP-9表達顯著高于無淋巴結轉移者(P＜0.01)，Ⅲ～Ⅳ期者顯著高于Ⅰ～Ⅱ期者(P＜0.05)。說明MMP-9在胃癌細胞生長侵襲及轉移中起著重要作用，其表達水平與臨床分期和淋巴結轉移有關。

CD44v6的表達可改變腫瘤細胞表面黏附分子的構成及功能，使腫瘤細胞獲得轉移能力，使腫瘤細胞與遠隔的淋巴結和血管內的配體結合，有效地形成轉移瘤并更加穩定地寄宿和生長［4］。近年來研究表明，CD44v6的異常表達與多種人體惡性腫瘤的發生發展和侵襲轉移及預后密切相關［5］。VEGF是迄今為止發現的特異性最高、作用最強的血管生長因子［6］。VEGF的生物學功能包括增強血管內皮細胞有絲分裂，促進血管內皮細胞增殖、刺激新血管生成并增加血管通透性，同時還促進腫瘤淋巴管生長，維持血管正常狀態和結構的完整性，進而引起腫瘤細胞生長和轉移。本研究結果顯示胃癌組織中CD44v6和VEGF表達顯著高于癌旁組織，且有淋巴結轉移患者的胃癌組織中CD44v6和VEGF表達均顯著高于無淋巴結轉移者，Ⅲ～Ⅳ期者顯著高于Ⅰ～Ⅱ期(P均＜0.05)。說明CD44v6和VEGF在胃癌細胞生長侵襲及轉移中起著重要作用，其表達水平與胃癌臨床分期和淋巴結轉移有關。另外我們發現，胃癌組織中MMP-9、CD44v6表達與VEGF表達呈顯著正相關關系(r=0.331、0.421，P ＜0.05)，提示 MMP-9、CD44v6與VEGF關系密切，三者在胃癌的發生發展過程中可能起重要的協同作用。

［1］任偉，禹立霞，錢曉萍.胃癌患者血清VEGF、MMP-2的表達及其與浸潤和轉移的關系［J］.腫瘤學雜志，2008，14(10):824-825.

［2］Joo M，Lee HK，Kang YK.Expression of E-cadherin，beta-catenin，CD44s and CD44v6 in gastric adenocarcinoma:relationship with lymphnode metastasis［J］.Anticancer Res，2003，23(2B):1581-1588.

［3］曾益新.腫瘤學［M］.北京:人民衛生出版社，2003:244-258.

［4］谷化平，尚培，倪燦榮.CD44v6和E-cadherinherin表達與結腸癌浸潤轉移關系［J］.臨床與實驗病理學雜志，2003，19(3):270-271.

［5］Kurozumi K，Nishida T，Nakao K，et al.Expression of CD44 variant 6 and lymphatic invasion importance to lymph node metastasis in gastric cancer［J］.World J Surg，1998，22(8):853-857.

［6］朱新峰，林堅.血管內皮生長因子與腫瘤關系研究進展［J］.廣西醫科大學學報，2006，23(2):333-335.