杜仲雄花茶對D-半乳糖衰老模型小鼠SOD、GSH-Px活性和MDA水平的影響

杜紅巖， 婁麗杰， 傅建敏， 杜蘭英， 陳百泉， 李 欽

(1.中國林業(yè)科學(xué)研究院經(jīng)濟林研究開發(fā)中心，河南 鄭州 450003;2.河南大學(xué)中藥研究所，河南 開封 475004)

杜仲Eucommia ulmoidesOliv.是我國特產(chǎn)的名貴中藥材。我國杜仲資源約占世界杜仲資源總量的99%以上［1］。杜仲自古以皮入藥，至今已有2000多年的歷史，杜仲皮具有補肝腎，強筋骨，安胎，抗衰老的功效，但對于杜仲雄花的藥用卻報道很少。杜仲為雌雄異株樹種，其中雄株占40% ～60%［2］。近年來研究發(fā)現(xiàn)，杜仲雄花與葉，皮含有相類似的有效成分，富含總黃酮，桃葉珊瑚苷，綠原酸等，其中黃酮類化合物的含量高于皮和葉［3］。杜仲雄花茶形狀與普通茶葉十分相似，不需要和其它茶種配合，具有湯色黃綠透亮，滋味濃而爽口，香氣獨特而持久，回味甜的特點，它充分利用了杜仲雄花資源，開拓了杜仲綜合利用的新途徑，已獲得國家發(fā)明專利［4］。為探討杜仲雄花茶的保健作用，本實驗就杜仲雄花茶對D－半乳糖所致衰老小鼠的抗衰老、抗氧化作用進行了初步研究。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 ♂性昆明種小白鼠50只，體重(26±2)g，由河南省實驗動物中心提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號:SCXK(豫)2005－0001，購進適應(yīng) 3 d。

1.2 藥材及儀器 杜仲雄花茶(由靈寶市天地科技生態(tài)有限責(zé)任公司提供，批號20090407;專利號為ZL98117579.1);超氧化物岐化酶(SOD)試劑盒，谷胱苷肽過氧化物酶(GSHPx)試劑盒，丙二醛(MDA)試劑盒(均由南京建成生物工程研究所提供，批號均為20080918);D－半乳糖(國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號20061025);JY10001電子天平(上海精密科技儀器有限公司);HHS－11－2電熱恒溫水浴鍋(上海博迅醫(yī)療器械廠);PL2002型電子精密天平(上海特勒－托利多儀器公司);UV－754紫外－可見分光光度計(上海精密科技儀器有限公司)。

2 實驗方法

2.1 藥材的處理 取杜仲雄花茶(由靈寶市天地科技生態(tài)有限責(zé)任公司提供，批號:20090407)200g，加一定量的清水浸泡30 min，加水沒過藥面1 cm，煎煮3次，時間分別為60，40，20 min，合并3次濾液蒸發(fā)濃縮至200 mL(1 mL含生藥1 g)，裝瓶備用［5］。

2.2 動物分組給藥及組織樣品的制備 小鼠60只，隨機分為6組，每組10只，分別為空白對照(等體積生理鹽水)組，模型(等體積生理鹽水)組，維生素E(25 mg/kg)組及杜仲雄花茶高、中、低劑量組。每天上午空白對照組和D－半乳糖模型組灌胃生理鹽水20 mL/kg，實驗組分別灌胃杜仲雄花茶水煎液，下午空白對照組皮下注射生理鹽水5 mL/kg，其它5組均皮下注射1%D－半乳糖5 mL/kg。

連續(xù)給藥42 d，最后一次給藥后，禁食不禁水12 h，眼眶取血，分離血清。并迅速取肝臟，并將其置于4°C生理鹽水中，洗凈表面殘留血液，用濾紙吸干，稱濕重，然后加入預(yù)冷的生理鹽水，高速勻漿，制備成10%的組織勻漿備用。

2.3 數(shù)據(jù)處理 所有數(shù)據(jù)用計算機SPSS 10.0軟件進行處理，均以(±s)表示。組間差異采用t檢驗。

3 實驗結(jié)果

3.1 杜仲雄花茶對小鼠血清SOD、GSH－Px活性和MDA含量的影響 杜仲雄花茶水煎液能增加小鼠血清SOD和GSH－Px的活性，減少MDA的產(chǎn)生，并呈一定的量效關(guān)系。結(jié)果見表1。

3.2 杜仲雄花茶對小鼠肝臟SOD、GSH－Px活性和MDA含量的影響 杜仲雄花茶水煎液能增加小鼠肝臟SOD和GSH－Px的活性，減少MDA的產(chǎn)生，并呈一定的量效關(guān)系。結(jié)果見表2。

表1 杜仲雄花茶對小鼠血清中SOD，GSH-Px活力和MDA含量的影響

表2 杜仲雄花茶對小鼠肝臟中SOD，GSH-Px活力和MDA含量的影響

4 結(jié)論與討論

自由基的產(chǎn)生和機體對自由基的清除功能的動態(tài)平衡同機體的衰老有著密切的關(guān)系，而酶類是機體清除自由基的一種主要物質(zhì)，主要有超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱苷肽過氧化物酶(GSH－Px)等［6］。隨著年齡的增長，機體清除自由基的能力下降，產(chǎn)生自由基和清除自由基的平衡被破壞，自由基堆積，產(chǎn)生大量代謝產(chǎn)物MDA，對機體產(chǎn)生損害，進而加速機體衰老［7］。因此SOD，GSH－Px含量的高低可以間接反映機體清除自由基的能力，MDA含量的高低可以間接反映細(xì)胞的衰老程度。

給小鼠連續(xù)注射D－半乳糖，可引起小鼠的糖代謝紊亂，進而使多種組織細(xì)胞發(fā)生衰老時的退行性變化，而這些變化與自然衰老時出現(xiàn)的自由基代謝紊亂及抗氧化功能降低的特征都極為相似。衰老的自由基學(xué)說認(rèn)為，機體在生理情況下不斷產(chǎn)生自由基的同時，也被體內(nèi)SOD、GSH－Px、CAT等抗氧化系統(tǒng)所清除，隨著機體的衰老，清除自由基的能力減弱，自由基的產(chǎn)生與清除失去平衡［6］。本實驗證實杜仲雄花茶水煎液可以增加由D－半乳糖引起的衰老小鼠的SOD，GSHPx的活性，減少MDA的產(chǎn)生。從而增強對氧自由基的清除作用，減少體內(nèi)氧自由基的產(chǎn)生，改善D－半乳糖引起的氧化應(yīng)激損傷，防止細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載從而起到抗氧化，抗衰老的作用。杜仲入藥雖已有2000多年的歷史，但是對杜仲雄花的試驗研究卻很少，對抗氧化抗衰老的研究也鮮有報道，進一步研究有待繼續(xù)。

［1］杜紅巖.杜仲優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)栽培［M］.北京:中國林業(yè)出版社，1996.

［2］王丙武，王雅清，莫 華，等.杜仲雌雄株細(xì)胞學(xué)、頂芽及葉含膠量的比較［J］. 植物學(xué)報，1999，41(1):11－15.

［3］張康健，董娟娥，馬柏林，等.杜仲次生代謝物部位差異性的研究［J］.林業(yè)科學(xué)，2002，38(6):12－16.

［4］杜紅巖，李芳東，杜蘭英.杜仲雄花茶及其加工方法:中國，ZL 98117579.1［P］.2001－10－24.

［5］程郁昕，寧康健，呂錦芳，等.杜仲葉對小鼠中樞鎮(zhèn)靜作用的實驗研究［J］.中國中醫(yī)藥科技，2007，14(2):98－99.

［6］陳 瑾，李榮亨.衰老的自由基機制［J］.中國老年學(xué)雜志，2004，24(7):677－679.

［7］Das N，Levine R L，Orr W C，et al.Selectivity of protein oxidative damage during aging in Drosophila melanogaster［J］.Biochem J，2001，360:209－216.