血清HE4鑒別診斷宮頸良惡性腫瘤的臨床價值

方芳 達世儉 湛達河 劉超愿 劉佳麗

臨床上，宮頸癌是女性生殖系統最常見惡性腫瘤之一，全世界范圍內發病率呈不斷上升趨勢[1]。人附睪分泌蛋白4(human epididymis secretory protein 4，HE4)是一種新型的婦科腫瘤標志物，主要分布于生殖系統上皮，如附睪、精曲小管、輸精管上皮、輸卵管上皮及子宮內膜等，HE4對卵巢癌、宮頸癌及子宮內膜癌等婦科惡性腫瘤的早期診斷和監測具有重要價值[2]。本研究通過對比宮頸癌、子宮良性腫瘤患者及正常健康女性血清HE4表達水平差異，探討血清HE4表達水平鑒別診斷宮頸良惡性腫瘤的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料自2008年1月至2011年5月，對我院住院手術的患者，根據術后石蠟切片病理報告，將患者分為宮頸癌組30例、宮頸良性腫瘤組30例，并選擇同期行體檢的健康女性30例作為對照組。

1.2 標本采集及處理宮頸癌、宮頸良性腫瘤組患者于手術前，對照組婦女于體檢時，均空腹抽取肘靜脈血3～5 ml，室溫下靜置30 min，3000 r/min離心15 min，取上層血清分裝于聚丙烯EP管內，儲存于-80℃。

1.3 血清HE4的檢測方法實驗前2 d將待測血清標本從-80℃冰中取出，放置于4℃冰箱中緩融。檢測時室溫保持在20℃～25℃，檢測前將試劑和血清標本平衡至室溫，并將試劑和標本充分混勻。具體方法如下:清洗微孔板條1次，將HE4標準品、質控品及待測標本各25分別加入微孔中，每孔中加

入100 μl生物素標記的HE4抗體，置微孔板振蕩器上室溫孵育1 h。棄掉孔內液體，充分清洗3次。每孔中加入100 μl示蹤工作液，置微孔板振蕩器上室溫孵育1 h。棄掉孔內液體，充分清洗6次。每孔中加入100 μl辣根過氧化物酶-四甲基聯苯胺(HRP-TMB)底物液，加液應盡可能快速，置微孔板振蕩器上室溫、避光孵育30 min。加入100 μl止液，混勻，立即在酶標儀上于405 nm處測定吸光度值。采用二項式擬合曲線法繪制標準曲線，質控品復孔檢測結果的平均值在試劑瓶標示值范圍內認為血清HE4檢測結果有效，行重復實驗驗證結果的可靠性。血清HE4正常閾值為為0～150 pmol/L[3]。

1.4 統計學方法采用SPSS 17.0軟件進行統計學處理，計量資料采用秩和檢驗，計數資料采用χ2檢驗。血清HE4水平以中位值表示，以病理診斷為金標準。制作受試者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲線，ROC曲線最左上方的點即約登指數(Yonden index)最大的點的測定值，計算曲線下面積(area under the curve，AUC)、敏感度和特異度，以反映診斷的準確性。

2 結果

2.1 血清HE4水平差異比較宮頸良性腫瘤組和正常健康對照組血清HE4中位值均在正常范圍內，兩組差異無統計學意義(P＞0.05);宮頸癌組患者血清HE4中位值明顯高于正常值，與宮頸良性腫瘤組和正常健康對照組比較，差異均有統計學意義(P＜0.05)。宮頸癌組患者血清HE4陽性率為80.0%，顯著高于子宮良性腫瘤組和正常健康對照組陽性率(均P＜0.05)。見表1。

表1 各組血清HE4中位值和陽性率(%)

2.2 血清HE4水平對宮頸癌的診斷效能ROC曲線分析結果表明，以宮頸良性腫瘤組+正常健康對照組為參照人群，血清HE4表達水平在114.8 pmol/L時診斷宮頸癌的Youden指數最大為0.657，AUC為0.827，其敏感度和特異度分別為73.1%和83.4%。見圖1。

圖1 血清HE4診斷宮頸癌的ROC曲線

3 討論

血清HE4是一種小分子分泌型糖蛋白，是近年發現的一個腫瘤標志物，對卵巢癌、宮頸癌、子宮內膜癌的早期診斷和監測具有重要價值[4]。HE4基因最早在人附睪上皮細胞中被發現，它定位于染色體20q12～q13.1上，全長約11.78 kb，編碼124個氨基酸的HE4蛋白前體，其編碼的蛋白質被認為是附睪特有的、與精子成熟有關的蛋白質[5]。國外學者采用PCR反應、Norihem印跡雜交、免疫組化、基因芯片和組織芯片等方法對HE4蛋白進行了組織定位，發現其主要分布于生殖系統上皮，如附睪、曲細精管、輸精管上皮、輸卵管上皮和子宮內膜上皮等[5];此外，在其他一些組織的導管和腺上皮也有表達，其中支氣管和腮腺表達較高，乳腺導管、甲狀腺、腎遠曲小管、前列腺、結腸黏膜部分陽性[6]。

本研究通過評價了宮頸癌患者、宮頸良性腫瘤患者和正常女性的血清HE4中位表達水平和陽性率差異，并采用ROC曲線探討了血清HE4診斷宮頸癌的效能。研究結果表明，宮頸癌組患者血清HE4中位值明顯高于宮頸良性腫瘤組和正常健康對照組，其血清HE4陽性率高達80.0%，亦顯著高于子宮良性腫瘤組和正常健康對照組陽性率。此外，本研究以宮頸良性腫瘤組+正常健康對照組作為參照人群，應用ROC曲線評價了血清HE4診斷宮頸癌的效能，結果表明血清HE4表達水平在114.8 pmol/L時診斷宮頸癌的Youden指數最大可達0.657，AUC為0.827，其敏感度和特異度分別為高達73.1%和83.4%。

綜述所述，我們可以得到以下初步結論:血清HE4表達水平是鑒別診斷宮頸良惡性腫瘤的有效工具，其敏感度和特異度相對較高，可有助于臨床早期診斷宮頸癌。由于本研究入組病例較少、血清HE4檢測方法局限性、數據描述等方面存在的欠缺，以上結論尚需更多大樣本臨床研究加以證實。

[1]Purdie DM，Green AC.Epidemiology of endometrial cancer.Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol，2001，15(3):341-354.

[2]楊彩虹，張雪玉.人附睪蛋白4在婦科惡性腫瘤中的研究進展.醫學綜述，2010，16(20):3081-3083.

[3]Drapkin R，von Horsten HH，Lin Y，et al.Human epididymis protein 4(HE4)is a secreted glycoprotein that is overexpressed by serous and endometrioid ovarian carcinomas.Cancer Res，2005，65(6):2162-2169.

[4]Galgano MT，Hampton GM，Frierson HF Jr.Comprehensive analysis of HE4 expression in normal and malignant human tissues.Mod Pathol，2006，19(6):847-853.

[5]Montagnana M，Lippi G，Ruzzenente O，et al.The utility of serum human epididymis protein 4(HE4)in patients with a pelvic mass.J Clin Lab Anal，2009，23(5):331-335.

[6]Abdel-Azeez HA，Labib HA，Sharaf SM，et al.HE4 and mesothelin:novel biomarkers of ovarian carcinoma in patients with pelvic masses.Asian Pac J Cancer Prev，2010，11(1):111-116.