兩種檢測(cè)膽紅素的指標(biāo)評(píng)價(jià)黃疸療效的比較

韓升波

干化學(xué)和濕化學(xué)是臨床常用的兩種檢測(cè)生物化學(xué)參數(shù)的機(jī)器，在這里我們主要探討強(qiáng)生VITROS 350和OLIMPUS AU640兩種機(jī)器關(guān)于膽紅素的檢測(cè)對(duì)于臨床評(píng)價(jià)病理性黃疸的過(guò)程及療效的作用大小。

1 機(jī)器與方法

1.1 機(jī)器與試劑強(qiáng)生VITROS 350，試劑為強(qiáng)生干化學(xué)膽紅素干片，檢測(cè)總膽紅素方法為重氮法，檢測(cè)結(jié)合和非結(jié)合膽紅素用的是膽紅素組分-分光光度法(以HPLC方法參考方法)，質(zhì)控為強(qiáng)生專用質(zhì)控。OLIMPUS AU640，試劑為日本合光純藥工業(yè)株式會(huì)社生產(chǎn)的膽紅素試劑，總膽紅素和直接膽紅素都是用重氮法檢測(cè)，間接膽紅素為計(jì)算所得，質(zhì)控用的是伯樂(lè)質(zhì)控。

1.2 標(biāo)本來(lái)源收集病房不同疾病高膽紅素患者90例(阻塞性黃疸患者30例、溶血性黃疸患者30例，肝病性黃疸30例)，治療前和治療后各檢測(cè)一次。都選取早晨空腹靜脈抽血3～5 ml，15 min之內(nèi)離心分取血清。標(biāo)本無(wú)脂血和溶血，-80°C冰凍保存集中測(cè)定。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定過(guò)程及參數(shù)設(shè)置均按照說(shuō)明書執(zhí)行，嚴(yán)格按照SOP文件操作。全部數(shù)據(jù)用統(tǒng)計(jì)軟件分析，做治療后和治療前兩種機(jī)器檢測(cè)數(shù)據(jù)對(duì)比。

2 實(shí)驗(yàn)過(guò)程及結(jié)果

2.1 兩臺(tái)機(jī)器線性范圍評(píng)價(jià)分別用定值的低濃度血清Ⅰ和高濃度血清Ⅱ，相互稀釋(比如3Ⅰ+1Ⅱ，2Ⅰ+2Ⅱ，1Ⅰ+3Ⅱ)成五個(gè)不同濃度梯度，以TBIL為例測(cè)試五個(gè)值，以理論值為X軸，以測(cè)試值為Y軸，統(tǒng)計(jì)分析得VITROS 350機(jī)器，r2=0.9994斜率為0.9885;OLIMPUS AU640機(jī)器，r2=0.9956斜率為1.0101;評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)為相關(guān)系數(shù)r2＞0.95，斜率在0.97-1.03范圍內(nèi)。兩臺(tái)機(jī)器r2和斜率都在要求內(nèi)。

2.2 方法學(xué)對(duì)比用兩臺(tái)機(jī)器相同條件下分別檢測(cè)180例(治療前90例和治療后90例)標(biāo)本。用OLIMPUS AU640檢測(cè)的是總膽紅素(TBIL)、間接膽紅素(IBIL)、直接膽紅素(DBIL);用VITROS 350檢測(cè)的時(shí)總膽紅素、BU、BC;BU對(duì)應(yīng)間接膽紅素，BC對(duì)應(yīng)直接膽紅素。選取40個(gè)標(biāo)本，10個(gè)高值、20個(gè)中間值、10個(gè)低值，以VITROS 350檢測(cè)的值為X軸，以O(shè)LIMPUS AU640檢測(cè)的值為Y軸進(jìn)行方法學(xué)對(duì)比分析得到:總膽紅素為r2=0.9854＞0.95、偏移值小于CLIA'88允許誤差的1/2;間接膽紅素和BU之間r2=0.8543＜0.95、偏移值大于CLIA'88允許誤差的1/2，同一標(biāo)本兩者有差異;直接膽紅素和BC之間r2=0.7532＜0.95、偏移值大于CLIA'88允許誤差的1/2，同一標(biāo)本兩者差異較大。

2.3 阻塞性黃疸患者治療后TBIL、IBIL、DBIL都比治療前下降，BU、BC也下降，但100%BC比DBIL下降更加顯著。溶血性黃疸患者治療后TBIL、IBIL、DBIL比治療前下降，但90%BU、70%BC下降都比IBIL、DBIL下降更加明顯;肝病性黃疸患者治療后TBIL、IBIL、DBIL比治療前下降，但52%BU、60%BC下降也略比IBIL、DBIL下降明顯。

3 討論

在OLIMPUS AU640檢測(cè)膽紅素時(shí)用的時(shí)重氮法，檢測(cè)的總膽紅素中包含的組分有結(jié)合膽紅素，未結(jié)合膽紅素和δ-膽紅素，在檢測(cè)時(shí)，重氮試劑直接與結(jié)合膽紅素和δ-膽紅素反應(yīng)，但不能直接測(cè)定未結(jié)合膽紅素(Bu)濃度[1]。對(duì)于這些重氮化學(xué)法，一旦知道總膽紅素和直接膽紅素的測(cè)定值，便可計(jì)算出未結(jié)合膽紅素(Bu)值(間接膽紅素=總膽紅素-直接膽紅素)。此方法雖然是一種可行的替代測(cè)定方法，但必須認(rèn)識(shí)到確定兩種被測(cè)組分時(shí)的偏差和誤差，可能導(dǎo)致計(jì)算出的間接膽紅素出現(xiàn)較大的誤差[2]。

使用VITROS350干化學(xué)分析儀，可直接測(cè)定總膽紅素(TBIL)、間接膽紅素(Bu)和直接膽紅素(Bc)濃度。并且在測(cè)定BC時(shí)僅僅只是結(jié)合膽紅素，不測(cè)定δ-膽紅素(OLIMPUS AU640檢測(cè)直接膽紅素時(shí)包括結(jié)合膽紅素和δ-膽紅素)。由于在VITROS化學(xué)分析儀上直接測(cè)定未結(jié)合膽紅素(Bu)，從而在使用VITROS結(jié)合未結(jié)合膽紅素(BuBc)干片確定未結(jié)合膽紅素(Bu)濃度時(shí)可以使分析誤差更低。所以在用干化學(xué)檢測(cè)的BU比濕化學(xué)檢測(cè)的IBIL在病理性黃疸時(shí)更加準(zhǔn)確。

δ-膽紅素(δ-BIL)，它是一種白蛋白和膽紅素間非酶促反應(yīng)形成的共價(jià)結(jié)合物。δ膽紅素的反應(yīng)性與結(jié)合膽紅素相似，在血中含量極低。一旦進(jìn)入血液循環(huán)，它會(huì)慢慢地與白蛋白結(jié)合而成為δ膽紅素[3]。δ膽紅素在血清中的存在時(shí)間與白蛋白的半衰期相關(guān)，為2～3周。在BC的檢測(cè)中，由于BC在正常人體內(nèi)從肝臟到腸道，隨腸道排出體外，所以正常人體內(nèi)幾乎沒(méi)有BC，而在阻塞性黃疸的時(shí)候由于腸道阻塞，導(dǎo)致大量BC回流入血，引起B(yǎng)C升高，直接膽紅素(DBIL)也升高。但是經(jīng)過(guò)治療阻塞疏通之后，BC隨腸道排出，立刻就下降，對(duì)于疾病療效的反映比DBIL靈敏。溶血性黃疸時(shí)由于體內(nèi)未結(jié)合膽紅素的大量增加，導(dǎo)致結(jié)合膽紅素和δ-膽紅素輕度升高，而肝病性黃疸時(shí)，由于肝細(xì)胞病變引起的未結(jié)合和結(jié)合膽紅素及δ-膽紅素都增加，治療后由于干化學(xué)和濕化學(xué)測(cè)試項(xiàng)目實(shí)際物質(zhì)的不同，就導(dǎo)致干化學(xué)評(píng)價(jià)的更好。

以上結(jié)果及分析表明，在實(shí)際工作中，對(duì)于病理性黃疸的檢測(cè)，采用干化學(xué)的BU，BC檢測(cè)來(lái)評(píng)價(jià)病情要比采用濕生化的IBIL、DBIL檢測(cè)來(lái)評(píng)價(jià)要更加準(zhǔn)確，靈敏。

[1]周新，涂植光.臨床生物化學(xué)和生物化學(xué)檢驗(yàn).第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2003.

[2]姚勇.強(qiáng)生干化學(xué)分析儀定標(biāo)的使用經(jīng)驗(yàn).中外健康文摘·醫(yī)藥月刊，2007，8.

[3]楊志娜，田衛(wèi)東，李安均，等.Olmpus AU640全自動(dòng)生化分析的維護(hù)與保養(yǎng).中國(guó)療養(yǎng)醫(yī)學(xué)，2010，19(3):264-265.