蓽茇-13味治療大鼠非酒精性脂肪肝病的實驗研究

李秀麗，唐曉光，高麗楓，劉青妍，娜日蘇

（赤峰學院醫學院，內蒙古赤峰024000）

蓽茇-13味治療大鼠非酒精性脂肪肝病的實驗研究

李秀麗，唐曉光，高麗楓，劉青妍，娜日蘇

（赤峰學院醫學院，內蒙古赤峰024000）

目的：研究蓽茇-13味對大鼠非酒精性脂肪肝病的療效.方法：雄性Wister大鼠40只隨機分組，每組8只.正常對照組僅喂飼普通飼料，其他大鼠喂飼高脂飼料（88%標準普通飼料+10%豬油+2%膽固醇）12周.分為模型對照組和蓽茇-13味低（2mg/kg）、中（4mg/kg）、高（8mg/kg）給藥組.治療組于13周開始灌胃蓽茇-13味.藥物干預8周末結束實驗，測定體重、肝濕重和肝指數，檢測血清中甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-c）高密度脂蛋白膽固醇（HDL-c）、丙氨酸轉移酶(ALT)、門冬氨酸轉移酶(AST)、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和肝組織TG、TC.結果：與對照組比較，模型組體重、肝濕重、肝指數以及血清中TG、TC、LDL-c、、ALT、AST、MDA和肝組織TG、TC含量均增加，具有顯著性差異（P＜0.05，P＜0.01）而HDL-c和SOD下降（P＜0.05）；與模型組比較，藥物干預組大鼠肝濕重和肝指數及血清TG、TC、LDL-c、ALT、AST、MDA和肝組織TG、TC降低，且肝臟脂肪變性和炎癥壞死減輕（P＜0.05，P＜0.01）.結論：蓽茇-13味對大鼠高脂飲食誘導的NAFLD有治療作用.

非酒精性脂肪肝病；大鼠；蓽茇-13味

隨著人們物質生活的不斷提高和飲食結構的改變，非酒精性脂肪肝病（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）的發病率也逐年升高，已成為僅次于病毒性肝炎的常見肝病.NAFLD是一種常見的隱匿性肝病，可發展為肝硬化和肝性腦病[1].目前，其發病機制并未清楚，治療藥物不甚完善，臨床仍處于探索階段.因此，研究NAFLD的藥物治療具有重要意義.本研究通過高脂飲食建立大鼠NAFLD的模型，以探索蓽茇-13味對NAFLD的治療作用.

1 材料與方法

1.1 材料

雄性Wister大鼠40只，清潔級，體重180g～200g，購買并飼養于北京大學醫學部實驗動物中心，實驗室溫度為（20±3）℃.高脂飼料由北京大學醫學部提供.蓽茇-13味由赤峰市巴林右旗中蒙醫院明根巴雅爾提供，臨用時用水研磨成400mg/ml的糊狀備用.丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-c）高密度脂蛋白膽固醇（HLD-c）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒由南京建成生物工程研究所提供.

1.2 方法

雄性Wister大鼠40只，分籠飼養，經適應性喂養1周后，隨機分為5組：正常對照組（Con）、模型組（Model）、蓽茇低劑量組（BL）、蓽茇中劑量組（BM）、蓽茇高劑量組（BH），每組為8只.Model、BL、BM、BH組各給予高脂飼料（87.7%普通飼料+10%豬油+2%膽固醇+0.3%膽酸鈉）飲食12周，Con組給予普通飼料.實驗動物均自由飲水.13周開始BL組、BM組、BH組定時灌胃，分別給予蓽茇-13味2mg/kg、4mg/kg、8mg/kg，每日一次.Con和model兩組給予4mg/kg蒸餾水灌胃.溫濕度符合標準，明暗12小時交替.藥物干預8周末，所有大鼠隔夜禁食12小時，稱重以10%的水合氯醛腹腔注射麻醉處死.腹主動脈取血，離心取血清備用.取肝組織于液氮中速凍后，置于-80℃冰箱備用.

1.3 觀測指標、檢驗項目和方法

⑴觀察大鼠的精神狀態、食欲狀態、活動情況和毛發情況.實驗結束后測體重和肝濕重,計算肝指數（肝濕重/體重）.⑵血清指標的測定.測定血清ALT、AST、TG、TC,LDL-c、HLD-c、MDA、SOD，全部采用全自動生化儀檢測，按照試劑盒說明書測定.

1.4 統計學處理

用SPSS13.0軟件進行數據統計.計量資料采用(X±s)表示,組間比較采用單因素方差分析及LSD檢驗,等級資料采用秩和檢驗.P＜0.05表示差異有顯著性.

2 結果

2.1 一般結果

各組大鼠均發育良好.與Con組相比較,Model組大鼠肝臟濕重和肝指數(每100g體重的肝臟濕重)均顯著高于Con組(P＜0.05).與Model組相比,BL、BM、BH組大鼠體重、肝臟濕重和肝指數均較Model組有所下降,其中BL、BM、BH組的肝臟濕重與Model組比較有顯著性差異(P＜0.05).而BM、BH組的肝臟指數與Model組比較有顯著性差異(P＜0.05).見表1.

2.2 血清生化指標的變化

2.2.1 肝功能:Model組大鼠血清ALT、AST較Con組大鼠顯著升高(P＜0.05，P＜0.01)；與Model組相比,BL、BM、BH組大鼠ALT均有顯著性差異(P＜0.05),BH組的AST有顯著性差異(P＜0.05),而BL、BM組的AST有下降趨勢.脂質氧化：Model組SOD、MDA與Con組比較具有顯著性差異(P＜0.05).與Model組相比,BM、BH組大鼠MDA均有非常顯著性差異(P＜0.01),BL組MDA均有顯著性差異(P＜0.05)，而BM、BH組大鼠SOD有顯著性差異(P＜0.05)見.表2.

表1 各組大鼠體重肝濕重和肝指數(X±s)

表2 血清學肝功能和脂質氧化指標的變化(x±s)

2.2.2 血脂:與Con組相比,Model組大鼠血清TC、TG、LDL-c、HDL-c顯著升高(均為P＜0.05),與Model組相比,BL、BM、BH組大鼠血清TG、TC均有下降（P＜0.05),其中BH組TG顯著下降(均為P＜0.01)，BM、MH組的LDL-c組與Model組相比均有下降（P＜0.05)，而對于HDL-C的測定，BL、BM、BH組與Model組比較具有所升高（P＜0.05).見表3.通過對肝組織中甘油三酯和總膽固醇的測定，模型組與對照組比較有顯著性差異（P＜0.05).給藥組三個劑量組與模型組比較都有所降低（P＜0.05)，其中高劑量組降低膽固醇比較明顯，具有非常顯著差異（P＜0.01）.見表4.

表3 血清學血脂的變化

3 討論

導致肝臟的炎癥.脂肪性肝炎的持續存在，即炎癥－壞死的循環，或其它因素的打擊，造成肝臟細胞外基質的合成大于降解，從而形成進展性纖維化.大鼠經高脂飲食誘導12周后，模型組的肝濕重和肝指數、TG、TC、LDL-c與對照組比較，明顯升高，而HDL-c則降低，說明模型組脂代謝紊亂；而ALT、AST、MDA、SOD血清水平模型組與對照組比

NAFLD發病機制極為復雜,1998年Day和James提出的“二次打擊”學說已成為解釋該病發生機制的主要理論[2].首次打擊主要指胰島素抵抗和脂質代謝紊亂所導致的肝細胞脂質堆積,形成單純性脂肪肝，而在此基礎上發生的氧化應激和脂質過氧化損傷，成為NAFLD發病中的第二次打擊，從而較具有顯著性差異，說明模型組已出現脂肪性肝炎.

表4 肝組織TG、TC含量的變化（mg.g-1肝組織）

藥物蓽茇-13味主要是由蓽茇、絞股藍、沙棘、苦參等13味藥組成的.蓽茇為胡椒科植物蓽茇(PiperlongumL.)的近成熟或成熟果穗,是中蒙醫常用藥材,具有溫中散寒、理氣止痛功能.臨床中不僅用于治療胃脘痛、嘔吐、泄瀉、臍腹痛、牙痛、頭痛,蒙醫還用于治療高脂血癥、冠心病等病.蓽茇中所含胡椒堿具有降低TG、TC[3]，抗氧化作用[4]；絞股藍(Gynostemmapentaphyllum)是葫蘆科植物絞股藍屬植物，其根或莖全草人藥，其有效成分為絞股藍總苷，研究發現絞股藍總苷具有降低血脂、可以顯著提高機體SOD水平，同時抑制MDA和/或加快其清除，從而有效的防治機體的脂質過氧化反應[5]；沙棘為胡頹子科沙棘屬植物，沙棘為藥食同源植物.沙棘果實入藥具有止咳化痰、健胃消食、活血散瘀之功效.沙棘果實中含有異鼠李素及其糖甙、槲皮素、山柰酚等7種黃桐物質，尤其是槲皮素作用較多.通過對槲皮素的實驗研究,發現其具有多種藥理活性,如免疫增強功能[6]、抗菌、抗病毒[7]、鎮痛[8]、抑制血小板凝集[9]、舒張血管[10]、抗酒精性氧化損傷[11]、抗氧化應激作用[12]等.

本研究結果顯示，與模型組比較，蓽茇-13味藥物干預組體重、肝濕重、肝指數下降；血清TG、TC、LDL-c和肝組織TG、TC降低,HDL-c升高；提示蓽茇-13味具有改善脂質代謝紊亂的作用；血清ALT、AST水平和MDA水平與模型組比較降低，而SOD升高，說明肝臟脂肪變性和炎癥壞死程度減輕，提示蓽茇-13味具有脂質過氧化作用，降低炎癥程度的作用.本實驗藥物干預開始于建立模型后的第13后，此時，大鼠肝細胞脂肪性變和肝組織炎癥已較嚴重，用蓽茇-13為干預后，脂質代謝紊亂、肝組織炎癥有所改善，說明蓽茇-13味對大鼠高脂飲食誘導的NAFLD有治療作用.其組分所含的有效成分所產生的降血脂、抗氧化作用有可能起到了協同作用.蓽茇-13味對NAFLD的治療作用機制有可能與其降低血脂、保肝降酶、抗肝纖維化、抗氧化有關.其量效關系不甚明顯和作用機制尚未開展，這都有待今后繼續深入研究.

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R575.1

A

1673-260X（2011）01-0035-03

內蒙古自然科學基金項目（20080404Zd31）