內(nèi)皮抑素聯(lián)合介入治療肝癌中血管生成的研究

[摘要] 目的 探討內(nèi)皮抑素聯(lián)合介入治療肝癌中血管生成的研究。 方法 2009年8月～2011年8月，27例肝癌患者中15例多次行單純肝動(dòng)脈化療栓塞（TACE），12例內(nèi)皮抑素聯(lián)合TACE，在手術(shù)切除后的病理標(biāo)本中的采用免疫組化方法分析兩組血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的表達(dá)情況和平均微血管密度（MVD）值的差異。 結(jié)果 單純組VEGF的表達(dá)明顯高于內(nèi)皮抑素組（P ＜ 0.05）；單純組MVD值顯著高于內(nèi)皮抑素組（P＜0.05）。 結(jié)論 內(nèi)皮抑素聯(lián)合TACE能夠抑制腫瘤血管的生成，減少腫瘤增長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移的機(jī)會(huì)，值得臨床進(jìn)一步的研究與推廣。

[關(guān)鍵詞] 內(nèi)皮抑素；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈化療栓塞；免疫組化；肝癌

[中圖分類號(hào)] R735.7 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2012）03-0146-02

Investigate the angiogenesis of liver cancer with interventional treatment combined endostatin

SUN Tao LU Chunfeng

Jiamusi University，Jiamusi 154000，China

[Abstract] Objective To discuss the angiogenesis of liver cancer with interventional treatment combined endostatin. Methods During August 2009 to August 2011， expressions of VEGF and MVD difference in 27 HCC patients， which 15 cases were treated with TACE and 12 cases with endostatin combined with TACE， determined with immunohistochemistry method after operation. Results Expressions of VEGF in simple TACE were higher than those in endostatin combined with TACE (P < 0.05); MVD values in simple TACE were higher than those in endostatin combined with TACE (P < 0.05). Conclusion TACE combined with endostatin can inhibit angiogenesis of tumor， reduce the chance of tumor growth and metastasis，and worthy of further research and extension in clinical.

[Key words] Endostatin; Vascular endothelial growth factor; Transcatheter arterial chemoembolization; Immunohistochemical; Liver cancer

肝癌是較常見的惡性腫瘤之一，預(yù)后較差，目前主要以手術(shù)切除為主，但大多數(shù)肝癌就診時(shí)已失去手術(shù)機(jī)會(huì)，經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈化療栓塞（transcatheter arterial chemoembolization，TACE）成為治療的一種手段。TACE采用的是化療性栓塞，可造成腫瘤組織的缺血缺氧，相對(duì)地會(huì)引起血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的高度表達(dá)。VEGF是一種特異地作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞已糖化的多功能蛋白，能誘導(dǎo)微血管形成，促進(jìn)腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移，VEGF表達(dá)與腫瘤的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)及預(yù)后密切相關(guān)[1]。血管內(nèi)皮抑制素（endostatin）能特異性地抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移，從而抑制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。本文旨在探討內(nèi)皮抑素聯(lián)合TACE在治療肝癌中血管的相關(guān)研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2009年8月～2011年8月，27例肝癌患者，其中男18例，女9例，年齡58～79歲，在介入治療前均未進(jìn)行過任何治療。其中15例多次行單純TACE（1個(gè)月、2個(gè)月、半年），治療后手術(shù)切除肝癌；12例行內(nèi)皮抑素聯(lián)合TACE（1個(gè)月、2個(gè)月、半年），并在治療后手術(shù)切除肝癌。

1.2 藥品及試劑

重組人血管內(nèi)皮抑制素注射液（recombinant human endostatin，rh-endostatin；商品名：恩度，YH-16），山東麥得津先聲藥業(yè)，批號(hào)20070401；鼠抗人VEGF單克隆抗體（MAB-0243）、鼠抗人CD34單克隆抗體（MAB-0034）、SP免疫組化試劑盒（KIT-9701），福州邁新。

1.3 介入治療

1.3.1 單純TACE組 采用seldinger法穿刺插管，行腸系膜上動(dòng)脈、腹腔干及肝固有動(dòng)脈造影，再選擇性地插入腫瘤供血?jiǎng)用}造影，造影證實(shí)后，將多柔比星40 mg、絲裂霉素8 mg、5-Fu 0.5 g與碘化油10 mL充分混合乳化后，經(jīng)導(dǎo)管注入腫瘤供血?jiǎng)用}，栓塞病灶。

1.3.2 內(nèi)皮抑素聯(lián)合TACE組 方法同上組，不同在于藥物混合乳化時(shí)，多加一種藥物恩度30 mg，再經(jīng)導(dǎo)管注入腫瘤供血?jiǎng)用}。

1.4 免疫組化方法及結(jié)果判定

采用S-P試劑盒（福州邁新）分析，按福州邁新提供說明進(jìn)行免疫組化分析。VEGF蛋白分布于細(xì)胞漿中陽性染色呈棕黃色或棕褐色顆粒，整片觀察10個(gè)高倍視野，陽性細(xì)胞>10%為陽性，≤10%為陰性。微血管密度（microvessel density，MVD）計(jì)數(shù)方法：參照Weidner等[2]報(bào)道改進(jìn)的計(jì)數(shù)方法，在低倍視野中，確定血管著色最密集區(qū)域，再在高倍視野下進(jìn)行計(jì)數(shù)，取3個(gè)視野均值，即為MVD值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用χ2檢驗(yàn)、兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，以α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

在對(duì)肝癌的治療中，從表1中可看出VEGF的表達(dá)單純組與內(nèi)皮抑素組的陽性率分別為66.67%、25.00%，χ2=4.64，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），內(nèi)皮抑素組可以更好地抑制VEGF的表達(dá)，MVD值（表1）也進(jìn)一步地驗(yàn)證內(nèi)皮抑素組較好地抑制血管的生成。

3 討論

原發(fā)性肝癌是較常見的一種消化系統(tǒng)腫瘤，發(fā)病率和死亡率均極高，臨床癥狀一般情況下出現(xiàn)較晚，當(dāng)患者發(fā)現(xiàn)時(shí)多已是中晚期，而手術(shù)等治療方法對(duì)于中晚期患者療效并不太明顯，其原因是肝癌的血供豐富，并具有較強(qiáng)的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的能力。腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移需要血管新生，研究發(fā)現(xiàn)促進(jìn)血管新生的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）為一主要因子。

VEGF為一種特異地作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞己糖化的多功能蛋白，它的高表達(dá)與腫瘤微血管密度、惡性程度、患者預(yù)后不良等密切相關(guān)[3]。在肝癌中腫瘤的生長(zhǎng)必然需要血管的生成，而VEGF在肝癌患者中的表達(dá)明顯高于其它患有肝臟疾病和正常的人[4]。Brodsky等[5]曾研究過肝癌組織血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)。他們采用免疫組化的方法對(duì)肝癌組織、癌旁組織及正常組織中VEGF進(jìn)行表達(dá)，研究發(fā)現(xiàn)肝癌組織的VEGF水平明顯高于癌旁組織和周圍正常組織。

1997年O′Reilly等[6]從小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞瘤（EOMA）的培養(yǎng)上清中提取出的一種新的強(qiáng)效血管生成抑制因子，命名為內(nèi)皮抑制素。它由內(nèi)生性膠原ⅩⅧ羧基端的183個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成，可直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，特異性地抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移，從而抑制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。

本文中所有患者均采用TACE治療，其作用是通過高濃度的化療劑和血管栓塞劑，阻斷腫瘤組織的供血，使癌細(xì)胞壞死凋亡，造成了腫瘤組織缺血、缺氧。Folkman等[7]提出，當(dāng)腫瘤局部造成乏氧的環(huán)境下，則啟動(dòng)血管生成促進(jìn)因子如VEGF等的產(chǎn)生，從而促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。內(nèi)皮抑素聯(lián)合TACE可抑制VEGF的表達(dá)，減少腫瘤血管的生成，國內(nèi)曾有人報(bào)道[8]內(nèi)皮抑素聯(lián)合TACE介入治療肝癌，取得較好的療效。在本組研究中，VEGF的表達(dá)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，χ2值為4.64，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），內(nèi)皮抑素組具有更好的抑制VEGF的表達(dá)。微血管密度（MVD）直接反映腫瘤血管的生長(zhǎng)情況，以CD34計(jì)數(shù)的MVD值能反映肝癌新生血管形成[9]。本文中MVD值的差異經(jīng)t檢驗(yàn)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。內(nèi)皮抑素聯(lián)合TACE組能夠較明顯地抑制腫瘤血管的生成，從而達(dá)到抑制腫瘤的生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移。但本研究時(shí)間較短，患者采用了手術(shù)切除病灶。而采用非手術(shù)治療，單純內(nèi)皮抑素聯(lián)合TACE的遠(yuǎn)期療效還需進(jìn)一步觀察。

總之，對(duì)VEGF與肝癌的研究已經(jīng)取得了一定的進(jìn)展，內(nèi)皮抑素已更廣泛地應(yīng)用于臨床，內(nèi)皮抑素聯(lián)合TACE將會(huì)在治療肝癌中得到進(jìn)一步的深入研究及廣泛推廣，成為治療肝癌的一種新手段。

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（收稿日期：2011-11-23）