血管內皮生長因子、肝素酶、鈣黏蛋白與胃癌生物學行為關系的研究

[摘要] 目的 研究血管內皮生長因子（VEGF）、肝素酶、鈣黏蛋白與胃癌生物學行為的關系。 方法 應用免疫組化ABC法檢測91例胃癌患者癌組織及癌旁正常組織VEGF、肝素酶、鈣黏蛋白的表達。 結果 91例胃癌患者VEGF在癌組織陽性表達率為72.52%，癌周正常組織陽性表達率為16.48%，二者差異有統計學意義。肝素酶在癌組織陽性表達率為80.21%，在癌周正常胃組織也有18.68%的表達率，二者差異有統計學意義。鈣黏蛋白在胃癌組織陽性表達率為64.84%，癌周正常組織陽性率為92.31%，二者差異有統計學意義。VEGF、肝素酶和鈣黏蛋白的表達與胃癌的分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移和臨床分期相關，VEGF還與腫瘤大小相關，肝素酶和鈣黏蛋白與腫瘤大小不相關。肝素酶、VEGF和鈣黏蛋白的表達兩兩之間沒有相關性。 結論 VEGF、肝素酶在胃癌組織中表達增高，鈣黏蛋白在胃癌組織中表達降低，均與胃癌的生物學行為有關，聯合檢測VEGF、肝素酶、鈣黏蛋白對胃癌的預后判斷及治療有重大價值。

[關鍵詞] 血管內皮生長因子；肝素酶；鈣黏蛋白；胃癌

[中圖分類號] R735.2 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2012）03-0051-02

Research of relationship between VEGF， heparinase， E-cadherin and biological behavior of gastric cancer

FU Yuxiang MA Guiliang MAO Weizheng LI Yang

Department of General's Surgery Qingdao Municipal Hospital Affiliated to Medical College of Qingdao University， Qingdao 266071， China

[Abstract] Objective To investigate the relationship between vascular endothelial growth factor (VEGF)， heparinase， E-cadherin and gastric cancer biological behavior. Methods The expressions of VEGF， heparinase， E-cadherin proteins of 91 cases of gastric carcinoma and adjacent normal tissues were detected by immunohistochemistry. Results In gastric carcinoma and adjacent normal tissue， the positive expression rate of VEGF protein was 72.52% and 16.48% respectively， and there was significant difference between the two groups. The positive expression rate of heparinase protein was 80.21% and 18.68% respectively， and there was significant difference between the two groups. The positive expression rate of E-cadherin protein was 64.84% and 92.31% respectively， and there was significant difference between the two groups. The expressions of VEGF， heparinase， E-cadherin proteins were closely correlated with differentiation， depth of invasion， metastasis of lymph nodes and TNM stage. And the expression of VEGF protein was also closely correlated with tumor size， but the expressions of heparinase and E-cadherin proteins were not correlated with tumor size. Conclusion VEGF， heparinase， E-cadherin show high expressions in gastric cancer and are correlated with gastric cancer biological behavior. The united detection of the VEGF， heparinase， E-cadherin will be helpful to judge prognosis and formulate treatment program.

[Key words] VEGF; Heparinase; E-cadherin; Gastric cancer

浸潤轉移是胃癌一個本質的生物學行為，是胃癌患者死亡率高、預后差的主要原因。癌組織的浸潤轉移是復雜的、多步驟的、多階段的、多基因的病理過程，其分子機制還不明確，研究與胃癌浸潤轉移相關的免疫分子，對胃癌的指導治療、預后判斷有重要價值。本文就研究血管內皮生長因子（VEGF）、肝素酶、鈣黏蛋白（E-cadherin，E-cad）與胃癌生物學行為的關系進行統計學分析，以了解VEGF、肝素酶、鈣黏蛋白能否作為胃癌浸潤轉移的臨床指標。

1 材料與方法

1.1 實驗標本

收集2010年2～6月手術切除的新鮮標本及術后病理石蠟塊91例，術前未經任何抗癌治療，其中男63例，女28例，年齡45～81歲，中位年齡62歲；根據2010年新TNM分期標準分為Ⅰ期10例，Ⅱ期21例，Ⅲ期38例，Ⅳ期22例。每例分別取胃癌組織及癌旁正常組織（距癌緣5 cm以上）各一塊，-80℃冰箱保存。術后病理示中高分化腺癌36例，低分化腺癌55例。

1.2 主要試劑

VEGF兔抗人抗體和E鈣黏蛋白兔抗人抗體購自美國Santa Cruz公司，肝素酶兔抗人抗體購自武漢博士德生物工程公司，SP試劑盒和DAB顯色試劑盒購自北京中山生物技術有限公司。

1.3 實驗方法

VEGF、肝素酶、鈣黏蛋白在胃癌及癌周正常黏膜的表達通過免疫組織化學方法檢測。組織經1%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm連續切片。常規石蠟切片脫蠟。滴加內源性過氧化酶阻斷劑，室溫下孵育20 min。熱抗原修復，切片置于盛有檬酸鹽緩沖液的高壓鍋中2 min。滴加正常羊血清封閉，室溫下孵育30 min。滴加一抗（1:50稀釋），4℃冰箱過夜。滴加生物素標記的二抗，室溫下孵育30 min。DAB顯色，鏡下控制反應時間。蘇木素輕度復染，脫水，透明，封片。陰性對照試驗以PBS替代一抗。

1.4 半定量結果判定

染色強度分數標準無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。同樣物鏡下陽性細胞數1分為陽性細胞數≤10%，2分為11%～50%，3分為51%～75%。兩類分數乘積滿3分為（+），滿4分為（++），5分以上為（+++）。

1.5 統計學處理

應用SPSS 17.0軟件進行統計學分析。組間差異采用χ2檢驗，VEGF、肝素酶和鈣黏蛋白表達與胃癌生物學行為的關系采用秩和檢驗，相關性采用Spearman等級相關分析，P ＜ 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 肝素酶、VEGF、鈣黏蛋白的表達

肝素酶蛋白表達陽性產物位于細胞質（圖1A），癌組織陽性表達率為80.21%，癌周正常胃組織也有18.68%的表達率，差異有統計學意義（χ2=68.931，P ＜ 0.05）。VEGF陽性產物位于細胞質（圖1B），91例胃癌患者癌組織陽性表達率為72.52%，癌周正常組織陽性表達率為16.48%，差異有統計學意義（χ2=57.864，P ＜ 0.05）。鈣黏蛋白陽性表達產物位于細胞膜，細胞質及細胞核不表達，胃癌組織陽性表達率為64.84%，癌周正常組織陽性率92.31%，差異有統計學意義（χ2=20.396，P ＜ 0.05）。肝素酶、VEGF、鈣黏蛋白的表達相互之間無相關性。

2.2 VEGF、肝素酶、鈣黏蛋白的表達與胃癌生物學行為的關系

VEGF、肝素酶和鈣黏蛋白的表達與胃癌的分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移和臨床分期相關，VEGF還與腫瘤大小相關，肝素酶和鈣黏蛋白與腫瘤大小不相關。見表1。

3 討論

VEGF、肝素酶在低分化組中的表達明顯高于中高分化組，有淋巴結轉移組高于無淋巴結轉移組，胃癌Ⅲ～Ⅳ期高于Ⅰ～Ⅱ期。E-cad在低分化組、有淋巴結轉移組和胃癌Ⅲ～Ⅳ期組中是低表達的。表明VEGF、肝素酶和E-cad與胃癌的侵襲和轉移潛能密切相關，可作為胃癌生物學行為的標志物。

VEGF是活性最強的血管生成因子之一，它能與血管內皮細胞表面受體特異性結合，誘導血管生成，促使血管通透性增加，導致血管內的蛋白物質滲透到血管外間隙，形成纖維基質，誘導內皮細胞增生，最后使間質血管化，為胃癌的浸潤轉移提供基礎[1]。VEGF還能促進腫瘤的淋巴管生長，維持血管正常的結構完整性，從而引起腫瘤細胞生長和轉移[2，3]。研究發現[4]，胃癌組織VEGF表達陽性的患者與VEGF表達陰性的患者相比，其腫瘤組織體積更大，病理分期更晚，腫瘤細胞浸潤程度更深，更容易發生轉移。肝素酶是一類能降解肝素類物質的裂解酶，通常被稱作類肝素酶或乙酰肝素酶（heparanase），是通過水解硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的肝素類側鏈破壞細胞外基質和基底膜的基本結構，釋放并激活連接在肝素類側鏈上的活性物質，與血管生成、腫瘤轉移等過程密切相關[5，6]，促進了胃癌的浸潤轉移和血管形成[7]，實驗結果顯示肝素酶與胃癌的分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移和臨床分期相關，與腫瘤大小沒有相關性，與VEGF亦沒有相關性。

鈣黏蛋白（E-cad）是一類介導細胞與細胞之間相互黏附的具有鈣依賴性的跨膜糖蛋白，是主要的正常細胞生長接觸抑制劑，E-cad表達減少和異質性使細胞間的黏附減弱，因此癌細胞更易脫落，這是癌轉移的基礎[8]。鈣黏蛋白在癌周正常組織的表達明顯高于癌組織。本研究顯示，VEGF、肝素酶、鈣黏蛋白的表達與胃癌的分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移和臨床分期等生物學行為相關，可作為胃癌浸潤轉移的分子指標。由此，除了手術、放化療等治療手段外，可聯合基因工程或其他方法，抑制VEGF、肝素酶在癌組織中的表達，增強鈣黏蛋白的表達，為胃癌治療提供新手段。

[參考文獻]

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（收稿日期：2011-11-11）