乙型病毒性肝炎患者血清IFN-γ、IL-10、TGF-β1檢測的臨床意義

趙磊 劉殿武 王俊英 南月敏 戴二黑

乙型肝炎是我國的常見病，其發病率高、治療困難、對人類健康危害嚴重。細胞因子對乙型肝炎的作用很復雜，成為近年來研究的重點。本實驗通過觀察分析肝炎患者血清中IFN-γ、白介素-10(IL-10)、TGF-β1的含量及其與肝功能和肝纖維化指標的關系，從而評價乙型肝炎患者血清三種細胞因子檢測的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 按2000年全國第十次病毒性肝炎及肝病學術會議修訂的《病毒性肝炎防治方案》的診斷標準［1］隨機選取70例于2005年11月至2006年5月在河北醫科大學附屬第三醫院和石家莊市第五醫院住院的乙型肝炎患者。其中急性肝炎(AHB)組6例;慢性肝炎輕度(CHBⅠ)組15例，男10例，女5例;平均年齡(43±8)歲;慢性肝炎中度(CHBⅡ)組17例，男11例，女6例;平均年齡(47±8)歲;慢性肝炎重度(CHBⅢ)組14例，男11例，女3例;平均年齡(41±11)歲;肝硬化(LC)組18例，男11例，女7例;平均年齡(54±8)歲。入選病例均除外心、腎、腦、肺等重要臟器疾患，并除外甲、丙、丁、戊型肝炎。以18例健康體檢者為對照(NC)組，男12例，女6例;平均年齡(44±8)歲。

1.2 方法 上述所有受檢對象清晨空腹抽肘靜脈血4 ml，分離血清，－80℃保存備用。肝功能指標檢測采用日本產全自動生化儀;HBV-DNA定量采用PCR法;肝纖四項指標檢測采用放射免疫法;血清 IFN-γ、IL-10、TGF-β1 檢測采用 ABC-ELISA法，試劑盒購自北京鼎國生物工程公司，實驗操作嚴格按照試劑盒操作說明書進行。

1.3 統計學分析 應用SPSS 13.0統計軟件，均數比較采用F檢驗和q檢驗，相關性采用直線相關分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 6 組血清 IFN-γ、IL-10、TGF-β1 水平比較 在 AHB、CHB及LC組中，AHB、CHB組血清IFN-γ水平顯著高于NC組，AHB組顯著高于CHB及LC組，CHBⅢ和LC組顯著高于CHBⅠ和CHBⅡ組，LC組顯著高于CHBⅢ組，差異均有統計學意義(P＜0.05或 ＜0.01);AHB、CHB 和 LC 組血清 IL-10水平顯著高于NC組，AHB組顯著低于CHB及LC組，CHBⅢ和LC組顯著高于CHBⅠ和CHBⅡ組，差異均有統計學意義(P＜0.05);AHB、CHB和LC組血清TGF-β1水平顯著高于LC組，AHB組顯著低于CHB及LC組，CHBⅡ、CHBⅢ和LC組顯著高于CHBⅠ組，LC組顯著高于CHBⅡ和CHBⅢ組，差異均有統計學意義(P ＜0.05 或 ＜0.01)。見表1。

2.2 CHB 和 LC 患者血清 IFN-γ、IL-10、TGF-β1 與肝功能的關系 在CHB和LC患者血清中，IFN-γ與ALT無相關關系(r=－0.165，P ＞0.05)，與TBIL 呈顯著負相關(r= －0.704，P ＜0.01)，與 ALB 和 PTA 呈顯著正相關(r=0.547、0.693，P ＜0.01)，;IL-10 與 ALT 無相關關系(r= －0.185，P ＞0.05)，與TBIL呈顯著正相關(r= －0.366，P ＜0.05)，與 ALB和 PTA呈顯著負相關(r= －0.655、－0.564，P ＜0.01);TGF-β1 與ALT無相關關系(r=0.04，P ＞0.05)，與 TBIL呈顯著正相關(r=0.701，P ＜0.05)，與 ALB 和 PTA 呈顯著負相關(r=－0.577、－0.607，P ＜0.01)。見表1。

表1 6 組研究對象血清 IFN-γ、IL-10、TGF-β1 水平pg/ml，xˉ±s

2.3 CHB 和 LC 患者血清 IFN-γ、IL-10、TGF-β1 與肝纖四項的關系 在CHB和LC患者血清中，IFN-γ與肝纖四項呈顯著的負相關(r= －0.648、－0.744、－0.822、－0.592，P ＜0.01);IL-10除與HA具有明顯正相關外(r=0.374，P ＜0.01)，與其余三項均無相關關系(r=0.156、0.229、0.188，P ＞0.05);TGF-β1 與肝纖四項呈正相關(r=0.649、0.552、0.642、0.521，P ＜0.01)。

2.4 CHB和LC患者血清肝纖四項與血清HBV-DNA的關系在CHB和LC患者血清中，HBV-DNA陽性患者肝纖四項水平要顯著高于陰性患者，差異均有統計學意義(P＜0.05)。而且隨著HBV-DNA復制水平的增高，肝纖四項水平也逐漸增高。見表2。

表2 CHB和LC患者血清肝纖四項與血清HBV-DNA的關系xˉ±s

3 討論

乙肝自然感染率高，轉歸差異大，其發病機制尚未完全闡明。機體抗病毒免疫的功能及病毒逃避免疫的能力決定HBV感染的發生、發展和轉歸。輔助性T淋巴細胞根據其分泌細胞因子的不同，可將其分為Th1和Th2兩個亞群［2］。Th1亞群分泌IFN-γ、IL-2、TNF-β等，主要參與細胞介導的免疫反應。Th2亞群分泌IL-4、IL-5、IL-6等，主要促進體液免疫反應。近年來認識到Th1/Th2失衡可能是HBV感染慢性化的重要機制。Penna等［3］檢測了急性自限性乙型肝炎急性期和恢復期患者外周血Th細胞分泌的細胞因子。急性期產生Th1類細胞因子(IFN-γ)明顯比對照組高。恢復期患者Th細胞表現為Th0功能，同時分泌Th1和Th2細胞因子(IL-4、IL-5)，提示Th1細胞不僅與肝損害有關，可能在控制感染，促進疾病恢復方面起作用。

本次實驗發現，在不同臨床類型乙型肝炎患者中，AHB和CHB組血清IFN-γ和IL-10水平均顯著高于正常組，AHB組血清IFN-γ水平也顯著高于CHB組，而AHB組血清IL-10水平顯著低于CHB組，差異均有統計學意義(P＜0.05或＜0.01)。此研究表明，隨著病情的逐漸加重，血清IFN-γ水平逐漸下降，而血清IL-10和TGF-β1水平逐漸增高。提示三種細胞因子與慢性乙型肝炎的病情有關系。這些表明在急性肝炎患者體內以Th1類細胞介導的細胞免疫反應為主，而在慢性肝炎患者體內以Th2類細胞介導的體液免疫反應為主，隨著Th2類細胞合成的增加，限制了Th1類細胞的合成，削弱了IFN-γ殺滅 HBV的作用，導致HBV在體內持續存在，從而引起肝炎患者的慢性化。這與文獻報道［4］一致。因此，IL-10可能是決定機體產生有效的免疫反應抵抗HBV感染的關鍵因子。

本研究結果還表明，CHB和LC組患者血清IFN-γ與TBIL呈顯著負相關(P ＜0.01)，與ALB、PTA呈顯著正相關(P ＜0.01);血清IL-10與TBIL呈顯著正相關(P ＜0.01)，與ALB、PTA呈顯著負相關(P＜0.01)。說明了上述因子參與了慢性乙型肝炎的肝損傷，并與肝儲備功能有關。

現已知TGF-β1是肝纖維化形成過程中一個重要的調控因子，促進了肝纖維化的發展。TGF-β1在肝纖維化中的主要作用是激活星狀細胞，促使細胞外基質產生增加;抑制膠原酶及基質金屬蛋白酶使膠原降解減少及間接促星狀細胞增殖作用［5，6］。本研究結果表明，CHB 和 LC 組患者血清 TGF-β1 水平升高，且其升高水平與乙型肝炎的嚴重程度一致。隨著病情加重和肝纖維化進展，血清TGF-β1水平與TBIL呈正相關，與ALB和PTA呈負相關，提示血清TGF-β1與肝臟儲備功能下降有關。測定患者血清TGF-β1在一定程度上能反映肝功能。

血清PCⅢ、LN、HA、CⅣ水平是肝臟基質代謝產物，其血清水平從不同側面反映肝臟細胞外間質的代謝情況和肝纖維化進展情況［7］。本實驗結果表明，血清IFN-γ水平與肝纖四項水平均呈明顯負相關，表明IFN-γ參與肝纖維化的形成，有較強的抗肝纖維化作用，其水平的降低，提示抗纖維化能力減弱;血清IL-10水平只與肝纖四項中的HA有顯著正相關，而與其他三項并無相關關系，提示IL-10伴隨著肝纖維化的進程，其具體作用機制有待進一步深入研究。血清TGF-β1水平與肝纖四項呈直線正相關，其結果與報道相［8］一致，說明TGF-β1是參與ECM的合成與沉積的關鍵因子，提示TGF-β1與肝纖維化密切關系，能反映肝纖維化程度和肝硬化的形成。

本實驗結果還表明，肝纖四項水平在HBV-DNA陽性患者中顯著高于陰性患者。乙肝病毒持續存在造成對肝臟的持續損害，則使HSC持續活化，促肝纖維化進展。由此可見，抗病毒治療對于慢性病毒性肝炎患者來說是根本治療，既可以清除病毒，又可延緩肝硬化的形成。

細胞因子IFN-γ、IL-10、TGF-β1不僅與肝細胞的損傷有良好的相關性，而且與肝纖維化的形成密切相關。因此，測定乙肝病毒及細胞因子水平，在監測慢性乙型肝炎疾病的發生發展、肝纖維化進展程度以及評價治療療效及預后具有重要的實用價值。

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4 張萍，顏學真，吳文漪，等.慢性乙型肝炎患者外周血單個核細胞Th1、Th2型細胞標志物及其細胞因子的表達.中華傳染病雜志，2003，21:42-43.

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6 Bachem MG，Meyer D，Melchior R，et al.Action of rat liver perisinusoidal lipocytes by transforming growth factor derved form myofiblastlike cell a potential mechanism of self perpetuation in liver fibrogenesis.J Clin Inwest，1992，89:19-27.

7 劉露，張木坤，何伶俐.肝纖維化血清標志物在肝病診斷中的意義.放射免疫學雜志，2004，17:23-25.

8 張立煌，方海林，裘云慶，等.病毒性肝炎患者血清轉化生長因子β1活性及其與肝纖維化的關系.中華傳染病雜志，1997，15:82.