烏司他丁對重度創傷失血性休克大鼠腸道屏障的影響

趙軍魁 王云輝 程愛國

創傷-失血性休克(traumatic-hemorrhagic shock，THS)是指機體遭受嚴重創傷后發生的生命器官缺血缺氧和細胞代謝障礙引起的全身性病理過程和臨床綜合征，平時和戰時都較常見，其發病率在多發傷患者約為50%，戰傷傷員約為30-40%［1］。據世界衛生組織預計，至2020年，全球每年死于車禍的人數將達230萬多人，而在這些死亡的創傷病人中大部分都伴有創傷-失血性休克，這是導致交通傷員死亡的主要原因之一［2］。本研究通過建立大鼠重度創傷-失血性休克模型，通過常規的乳酸林格氏液復蘇以及應用烏司他丁復蘇進行比較，以期為臨床上救治創傷-失血性休克患者提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組 健康雄性SD大鼠97只(由北京軍事醫學科學院提供)，體質量220～270 g。因創傷、失血意外死亡27只，剩余70只隨機分為3組:假休克組(SS組，n=10)，動物只分離組織并行血管插管，不進行放血及造成骨折，穩定10 min后開始取血液;乳酸林格氏液復蘇組(LRS組，n=30):模型制作成功后，將血液回輸并輸入兩倍量的乳酸林格氏液進行復蘇，在30 min內給完。烏司他丁治療組(LRS+UTI組，n=30):烏司他丁 50 000 U·kg－1·d－1加入乳酸林格氏液，余同上組復蘇，待實驗大鼠蘇醒后放入籠中自由進食進水，再按時間段分為復蘇后12、24、48 h，到時間點，取血作化驗，最后做統計學分析。

1.2 THS模型制作 實驗前12 h禁食、不禁水。實驗動物稱重后用10%水合氯醛(0.3 ml/100 g)腹腔注射麻醉，分離右側股動、靜脈分別行插管術，股動脈用于放血及監測血壓，股靜脈用于補液。用骨鉗致大鼠左股骨干中下1/3處粉碎性骨折(無明顯外出血)。然后經右股動脈導管緩慢放血，在10 min內使大鼠平均動脈壓(MAP)降至(35±5)mm Hg，其間根據大鼠血壓的上下波動繼續放血或經股靜脈回輸少量血液，并將此動脈血壓值維持90 min，完成大鼠創傷-失血性重度休克模型［3］。

1.3 檢測指標 到時間點用10%水合氯醛(0.3 ml/100 g)腹腔注射麻醉大鼠，常規消毒，通過腹正中切口進入腹腔，下腔靜脈采血檢驗。ELISA法檢測血中二胺氧化酶及內毒素含量。以上試劑盒購自上海藍基生物科技有限公司，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.4 統計學分析應用SPSS 16.0統計軟件，計量資料以±s表示，組間均數比較用單因素方差分析(one-way ANOVA)，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組血內毒素(ET)含量比較 LRS組與LRS+UTI組12、24、48 h三個時間點其 ET值均高于 SS組(P ＜0.05)，LRS組在24 h達到高峰，其后下降，下降幅度較小，而LRS+UTI組24、48 h下降明顯。LRS+UTI組與LRS組相比24、48 h ET值差異有統計學意義(P ＜0.05)。見表1。

表1 3組血ET含量比較EU/ml，xˉ±s

2.2 二胺氧化酶(DAO)含量比較 實驗發現LRS+UTI組在復蘇后24 h即出現明顯下降趨勢，復蘇48 h后明顯下降。LRS+UTI組與LRS組相比24 h、48 h DAO含量差異均有統計學意義(P ＜0.05)。見表2。

表2 實驗組血DAO含量比較EU/ml，xˉ±s

2.3 3組動物病死率比較 實驗過程中SS組無動物死亡，其余各實驗組動物均有動物死亡，LRS+UTI組較LRS組死亡率雖有所降低，但經統計學分析無顯著性差異(P＞0.05)。

表3 3組動物死亡率的比較

3 討論

隨著各種致傷因素不斷增加，創傷已成為臨床上常見的疾病，據統計，創傷是45歲以下人類死亡的第1位原因［4］。而現代創傷的一大特點就是創傷患者大多都伴有創傷-失血性休克，隨著對腸道黏膜屏障功能的進一步深入研究，人們發現在休克的發生發展過程中，腸道作為應激的“中心器官”“啟動器”［5，6］。起著非常重要的作用。休克的發生可導致腸道黏膜屏障的損傷，而腸道黏膜屏障的損傷可進一步加重休克，防止休克時腸道黏膜屏障的損傷對抗休克治療起到非常重要的作用。

烏司他丁(UTI)是在人類尿液中發現的一種糖蛋白。UTI作為一種廣譜蛋白酶抑制劑，除具有抑制水解酶，穩定溶酶體膜的作用外，近年研究發現其還具有抑制超氧化物的生成，清除氧自由基;減少炎癥因子的釋放，抑制炎癥反應;抑制中性粒細胞的聚集以及免疫調節等作用，對腸道具有保護作用［3，7］。

創傷-失血性休克引起腸道屏障功能損傷的可能機制:(1)缺血再灌注損傷:當休克時，交感神經髓質系統興奮，而腸道對兒茶酚胺敏感性較高，腸道黏膜血管收縮，血流下降，并且由于腸黏膜絨毛小血管成“發卡”狀［8］，血液易從小靜脈短路進入小靜脈，引起腸黏膜缺血。有研究發現，胃腸道的血流量不僅下降的早而且恢復晚［9］，當缺血的腸道恢復血流再灌住后，次黃嘌呤-黃嘌呤系統被激活，產生大量有毒性的活性氧代謝產物，使細胞通透性增加，導致細胞功能障礙，而腸組織富含黃嘌呤氧化酶，因而所受損傷更重。(2)細胞因子和炎性介質:在嚴重創傷、休克時，細胞因子和炎性介質大量產生并相互作用形成網絡，并且這些物質不斷循環促進形成“瀑布樣反應”［10］，造成腸黏膜損傷并加重休克甚至導致衰竭，持續長期存在可引起MSOF。(3)內毒素與細菌易位:當發生嚴重創傷休克時，可有多種因素導致腸黏膜屏障功能受損，腸通透性增加，細菌可穿透腸壁易位，而內毒素易位比細菌易位更重要，還可作用于細胞膜產生細胞毒性，損傷線粒體的功能，最終發展成腸源性感染，促進發生 SIRS等病理過程，甚至發生敗血癥、MOSF［11］。

DAO主要存在于哺乳動物的黏膜上層或絨毛上層細胞中，是具有高度活性的細胞內酶，當腸黏膜由于各種原因受損時，進入腸細胞間隙淋巴管和毛細血管，使血漿中DAO升高，測定血中的DAO活性可間接的反映腸道黏膜的完整性和損傷程度［12］。

實驗中發現在LRS組與LRS+UTI組復蘇12、24、48 h血漿中DAO的含量均高于SS組，提示在復蘇結束后腸道的功能仍未恢復，而LRS+UTI組血漿中DAO的含量的下降速度明顯，且24、48 h差異顯著，進一步證實烏司他丁聯合適量乳酸林格液復蘇創傷-失血性休克，與單純用乳酸林格液相比較，能有效減輕缺血-再灌注引起的腸黏膜損傷，較好的保護腸黏膜屏障功能。

ET是革蘭氏陰性細菌細胞壁脂多糖成分，小劑量的內毒素即可引起廣泛的生物學效應及病理反應，臨床上細菌感染的患者常常發生內毒素血癥，病死率可高達20% ～30%［13］，因此血標本中的內毒素檢測對于疾病的診斷及防治都有重要的意義。

本實驗觀察到在LRS組復蘇后大鼠血漿中的內毒素仍然維持較高的水平，約為正常的2倍，說明此時由于免疫受損功能尚低，腸道的功能仍未恢復，腸道的通透性仍然很高，而LRS+UTI組在復蘇后12 h內毒素水平較高，但24 h已明顯下降，至48 h已基本降至正常，提示加用烏司他丁后由于降低了腸道通透性，促進了腸道功能的恢復，減輕了腸道的損傷。

但本試驗也發現在LRS復蘇的同時加用UTI后的大鼠病死率與單純應用LRS復蘇的病死率比較雖有所降低但無統計學意義(P＞0.05)，提示在創傷-失血性休克后機體的病生理變化機制非常復雜，單純應用一種藥物可能起的作用不是很大，可考慮多種藥物聯合應用可能更有價值。

1 Suhartic C，VanGorp EC，Setiati TE，et al.The role of cytokines in activation of coagulation and fibrinolysis in danger shock syndrome.Shock，2002，87:42-46.

2 Peden M，Scurfield R，Sleet D，et al.World report on road traffic injury prevention.Geneva:WHO，2004:4533-4539.

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8 彭光宇主編.局部解剖學.第5版.北京:人民衛生出版社，2001.85-86.

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13 劉霞，趙希敏，徐惠芳，等.大鼠休克復蘇后腸絨毛與內毒素的定量分析.上海第二醫科大學學報，2001，21:417-420.