子宮內(nèi)膜異位癥合并不孕患者卵泡液中ENA-78的意義

張嶺梅 劉風(fēng)華 王沂峰 姚吉龍

上皮中性粒細(xì)胞活化肽-78(epithelial neutrophil-activating peptide-78，ENA-78)屬于C-X-C超家族，由78個(gè)氨基酸組成，相對(duì)分子量為83 000，是一種重要的炎性介質(zhì)，具有趨化和激活中性粒細(xì)胞的作用［1］。其作為復(fù)雜炎性網(wǎng)絡(luò)的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，在生殖過(guò)程中也有重要作用。本研究旨在檢測(cè)ENA-78在子宮內(nèi)膜異位癥合并不孕患者及輸卵管因素不孕癥患者卵泡液中的表達(dá)水平，探討ENA-78在子宮內(nèi)膜異位癥致不孕中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2009年12月至2011年8月于深圳市婦幼保健院行體外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET)子宮內(nèi)膜異位癥合并不孕患者及輸卵管因素不孕癥患者82例，年齡24～35歲;卵巢功能正常:月經(jīng)第2～5天基礎(chǔ)FSH水平4～10 U/L，LH水平4～10 U/L，E2水平200～293 pmol/L，陰道B超下每側(cè)卵巢竇卵泡數(shù)均為5～9個(gè);排除乙肝等感染性疾病;排除多囊卵巢綜合癥、糖尿病等其他內(nèi)分泌疾病。其中經(jīng)腹腔鏡或開(kāi)腹手術(shù)證實(shí)為子宮內(nèi)膜異位癥患者36例作為研究組，年齡(30±3)歲，不孕年齡(5.53±1.40)年。經(jīng)腹腔鏡或開(kāi)腹手術(shù)證實(shí)為輸卵管因素不孕患者46例作為對(duì)照組，年齡(30±3)歲，不孕年齡(4.87±1.17)年。IVF前及促排卵過(guò)程中B超下未發(fā)現(xiàn)雙側(cè)輸卵管積液情況。2組一般資料具有均衡性。

1.2 方法 所有患者均選擇黃體期降調(diào)節(jié)長(zhǎng)方案。取卵時(shí)，實(shí)驗(yàn)室人員揀卵后回收第1管無(wú)血液污染的卵泡液。卵泡液經(jīng)1 000×g離心10 min，取上清液分裝至無(wú)菌小試管中，－20℃保存，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)卵泡液ENA-78水平。人ENA-78試劑盒(美國(guó) ADL公司):檢測(cè)范圍 0～800 pg/ml，靈敏度1.0 pg/ml。嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行試劑配制和操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料正態(tài)性檢驗(yàn)用Kolmogorov Smirnov法，采用兩獨(dú)立樣本均數(shù)t檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

研究組卵泡液ENA-78水平平均為(185±65)pg/ml，對(duì)照組為(140±58)pg/ml，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。見(jiàn)表 1。

表1 2組患者卵泡液ENA-78水平及IVF-ET結(jié)局

3 討論

育齡女性子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生率約為25%，其中30%～50%合并不孕［2］。子宮內(nèi)膜異位癥引起不孕的機(jī)制復(fù)雜，目前尚無(wú)一個(gè)單一的因素可以解釋子宮內(nèi)膜異位癥與不孕的關(guān)系。有研究認(rèn)為子宮內(nèi)膜異位癥患者體內(nèi)免疫平衡異常是導(dǎo)致不孕的重要因素之一，異常的免疫調(diào)節(jié)可破壞腹腔液或卵泡液的微環(huán)境，導(dǎo)致卵泡發(fā)育異常、卵子質(zhì)量下降，而對(duì)其受精過(guò)程產(chǎn)生不良影響，造成不孕［3，4］。ENA-78作為一種重要的炎性介質(zhì)，在女性生殖系統(tǒng)的表達(dá)及作用已得到初步闡明。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)女性生殖系統(tǒng)如輸卵管上皮、卵巢組織、在位及異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞、腺細(xì)胞及胎膜組織等均可表達(dá)分泌ENA-78［5－8］。而在一些炎性等異常病變時(shí)其表達(dá)分泌會(huì)明顯升高，Chegini等［7］通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)TNF-α可以誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞ENA-78分泌增加，IL-1β、內(nèi)毒素、脂多糖等也可使相關(guān)組織細(xì)胞分泌ENA-78增加。ENA-78作為中性粒細(xì)胞趨化及活化的關(guān)鍵因子，其水平升高可導(dǎo)致中性粒細(xì)胞增多，并分泌相關(guān)細(xì)胞因子，損害正常組織或破壞局部微環(huán)境［6］。

本實(shí)驗(yàn)對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥患者卵泡液中ENA-78水平進(jìn)行ELISA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜異位癥合并不孕患者卵泡液ENA-78水平較輸卵管因素不孕患者明顯升高，這也與Dorothea M的實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本一致［9］。同時(shí)對(duì)2組患者IVF-ET的隨訪發(fā)現(xiàn)，研究組與對(duì)照組相比，其胚胎種植率、妊娠率及流產(chǎn)率無(wú)降低，但其獲卵數(shù)及受精率明顯下降，提示子宮內(nèi)膜異位癥患者卵母細(xì)胞質(zhì)量異常。卵巢排卵使卵泡液成為腹腔液主要來(lái)源之一，腹腔液成份的變化可能來(lái)自于卵泡液成份的變化，并與之變化相一致，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與既往發(fā)現(xiàn)內(nèi)異癥患者腹腔液ENA-78水平變化一致［10］。腹腔液中ENA-78可以刺激中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞分泌生長(zhǎng)因子及細(xì)胞因子，促進(jìn)內(nèi)異癥形成，破壞腹腔局部微環(huán)境，因此ENA-78可以作為子宮內(nèi)膜異位癥及其嚴(yán)重程度的評(píng)價(jià)指標(biāo)。而卵泡液中ENA-78水平升高，與使之分泌增加的TNF-α、IL-1β，及由其所引起的炎性細(xì)胞及其分泌細(xì)胞因子協(xié)同，可使卵母細(xì)胞生長(zhǎng)的微環(huán)境發(fā)生改變，從而影響卵母細(xì)胞的質(zhì)量，并可使其受精能力及所形成的胚胎后續(xù)發(fā)育能力降低。

1 Walz A，Burgener R，Car B，et al.Structure and neutrophil-activating properties of a novel inflammatory peptide(ENA-78)with homology to interleukin 8.J Exp Med，1991，174:1355-1362.

2 Gianetto-Berrutti A，F(xiàn)cyles V.Endometriosis related to infertility.Minerva Gineco1，2003，55:407-416.

3 林蕓，周燦權(quán)，莊廣倫，等.子宮內(nèi)膜異位癥影響體外受精-胚胎移植結(jié)局的初步探討.中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志，2004，10:729-731.

4 Garrido N，Navarro J，García-Velasco J，et al.The enodmertrium versus embryonic quality in endometriosis-related infertility.Hum Reprod Update，2002，8:95-103.

5 Nakayama S，Mukae H，Ishii H，et al.Comparison of BALF concentrations of ENA-78 and IP10 in patients with idiopathic pulmonary fibrosis and nonspecific interstitial pneumonia.Respir Med，2005，99:1145-1151.

6 Itoh H，Nasu K，Nishida M，et al.Human oviductal stromal fibroblasts，but not oviductal epithelial cells，express Toll-like receptor 4:the site-specific mucosal immunity of the human fallopian tube against bacterial infection.Am J Reprod Immunol，2006，56:91-101.

7 Chegini N，Luo X，Pan Q，et al.Endometrial expression of epithelial neutrophil-activating peptide-78 during the menstrual cycle or in progestinonly contraceptive users with breakthrough bleeding and the influence of doxycycline therapy.Hum Reprod，2007，22:427-433.

8 Nishida M，Nasu K，F(xiàn)ukuda J，et al.Down-regulation of interleukin-1 receptor type 1 expression causes the dysregulated expression of CXC chemokines in endometriotic stromal cells:a possible mechanism for the altered immunological functions in endometriosis.J Clin Endocrinol Metab，2004，89:5094-5100.

9 Wunder DM，Mueller MD，Birkhuser MH，et al.Increased ENA-78 in the follicular fluid of patients with endometriosis.Acta Obstet Gynecol Scand，2006;85:336-342.

10 馮利霞，徐韶杰，孔翠花.子宮內(nèi)膜異位癥腹腔液中IL-2、IL-6的變化.河北醫(yī)藥，2010，32:1722-1723.