Galectin-3、CK19在橋本氏甲狀腺炎中的表達及意義

幸世濤　吳燕霞

[摘要] 目的 分析橋本氏甲狀腺炎（HT）中Galectin-3及CK19的表達情況，探討Galectin-3、CK19在HT合并甲狀腺乳頭狀癌（PTC）及HT伴不典型細胞群中的表達意義。 方法 復習我院存檔的HT病例切片，選取18例伴不典型細胞群的HT、18例伴PTC的HT，以20例單純橋本氏甲狀腺炎的病變組織做對照。行免疫組化單克隆抗體染色，一抗為Galectin-3和CK19，統計并分析。 結果 Galectin-3在HT伴PTC、HT伴不典型細胞群及對照組的表達率分別為83%、11%、5%，第一組與后兩組間差異有統計學意義（P ＜ 0.05），后兩組間差異無統計學意義（P ＞ 0.05）。CK19在HT伴PTC、HT伴不典型細胞群及對照組的表達率分別為89%、78%、10%，前兩組間差異無統計學意義（P ＞ 0.05），前兩組與對照組間差異有統計學意義（P ＜ 0.05）。 結論 HT增生淋巴組織周圍常可見不典型細胞群，這些不典型細胞群有時與PTC難以區分，通過Galectin-3、CK19聯合免疫組化染色有助于判斷不典型細胞群的性質。

[關鍵詞] Galectin-3；CK19；橋本氏甲狀腺炎；不典型細胞群；乳頭狀癌

[中圖分類號] R736.1[文獻標識碼] B[文章編號] 1673-9701（2012）29-0086-02

橋本氏甲狀腺炎（Hashimoto thyroiditis，HT）又稱慢性淋巴細胞性甲狀腺炎（chronic lymphocyticthyroiditis，CLT），由日本學者Hashimoto（橋本）于1912年首先報道并描述[1]，是以甲狀腺組織中淋巴細胞彌漫浸潤、淋巴濾泡形成及濾泡上皮嗜酸性變為主要特征的甲狀腺炎癥性病變。目前認為HT與自身免疫有關，以30～50歲女性多見，起病隱匿，發展緩慢，病程較長。不少學者觀察發現，HT病變中增生淋巴組織周圍常見PTC核樣改變的不典型細胞群，并可檢測到具有PTC特征的基因重排，并認為該基因重排是HT癌變的分子學基礎[2]，但是否可以就此判斷為HT伴PTC仍有較大分岐。Galectin-3和CK19在甲狀腺乳頭狀癌中的表達意義已較明確，Galectin-3、CK19聯合應用可提高甲狀腺乳頭狀癌診斷的敏感性[3]，但這兩種抗體在橋本甲狀腺炎中的研究較少。本文試圖通過檢測橋本氏甲狀腺炎合并乳頭狀癌（PTC）和HT病變中具有PTC核樣改變的不典型細胞群中Galectin-3、CK19的表達，初步探討Galectin-3、CK19在橋本氏甲狀腺炎合并乳頭狀癌及橋本氏甲狀腺炎不典型細胞群中的表達意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集我院2006年8月～2011年8月存檔的橋本氏甲狀腺炎及橋本氏甲狀腺炎合并乳頭狀癌病例，復習并選取其中臨床資料完整的56例，其中橋本氏甲狀腺炎伴PTC核樣不典型細胞群18例、橋本氏甲狀腺炎合并乳頭狀癌18例，單純性橋本氏甲狀腺炎20例。患者均為女性，中位年齡43歲。

1.2 方法

對上述56例患者病案蠟塊切片行HE染色及免疫組化染色，一抗即用型抗體為Galectin-3和CK19，染色方法為即用型（非生物素）Envison二步法，所有抗體及免疫組化試劑盒均購自北京中杉生物技術開發公司。染色步驟按試劑盒說明書操作：切片常規脫蠟至水，PBS沖冼；高溫高壓抗原修復2 min，滴加一抗4℃過夜，PBS沖洗后滴加非生物素二抗，25℃孵育15 min，PBS沖洗后滴加新鮮配制的DAB顯色液，蘇木素復染，鹽酸酒精分化，脫水透明后中性樹膠封片。

1.3 結果判斷

結果以細胞質內出現棕褐色顆粒為陽性細胞，隨機選擇10個高倍視野，計算1000個細胞中陽性細胞的比例，無陽性細胞或陽性細胞數＜10%為陰性（-），陽性細胞數10%~25%為輕度陽性（+），26%~50%為中度陽性（++），＞50%為強陽性（+++）。

1.4 統計學處理

采用SPSS 15.0統計軟件進行分析，陽性率用相對數表示，組間資料采用χ2檢驗，P ＜ 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 病理檢查

橋本氏甲狀腺炎診斷標準：①甲狀腺實質彌漫性淋巴細胞、漿細胞浸潤，伴或不伴淋巴濾泡形成。②淋巴細胞浸潤甲狀腺濾泡，濾泡上皮變性、壞死或崩潰。③甲狀腺濾泡萎縮。④濾泡上皮嗜酸性變及間質纖維化。PTC核樣不典型細胞群的診斷標準[4]：一般位于增生的淋巴濾泡周圍或陷于淋巴濾泡內，細胞立方或柱狀，排列不規則、較擁擠，胞質淡染或嗜酸，核增大，圓形或橢圓形，呈毛玻璃樣改變，部分細胞核內可見核溝或核內包涵體樣結構，核/質比增大，但不足于診斷乳頭狀癌（封三圖1、2）。橋本氏甲狀腺炎合并乳頭狀癌的診斷標準：同時具有橋本氏甲狀腺炎和典型甲狀腺乳頭狀癌的形態特征，且以橋本甲狀腺炎病變為主，乳頭狀癌往往為微小癌。

2.2 免疫組化染色結果

表1顯示，Galectin-3在HT合并PTC中的陽性表達顯著高于單純HT及HT伴PTC核樣不典型細胞群，且多數為較強的陽性表達（++～+++），具有統計學意義（P ＜ 0.05），而單純HT與HT伴PTC樣不典型細胞群Galectin-3的表達率沒有統計學意義（P ＞ 0.05）。

表2顯示，CK19在HT合并PTC及HT伴PTC核樣不典型細胞群中的表達（封三圖3）顯著強于單純HT，具有統計學意義（P ＜ 0.05）。

Galectin-3、CK19在HT合并PTC中均有強陽性表達，而表3顯示在HT伴PTC核樣不典型細胞群的病變組織中，Galectin-3和CK19的表達有顯著差異（P ＜ 0.05），Galectin-3在HT伴不典型細胞群中的表達顯著低于CK19在HT伴不典型細胞群中的表達，即便陽性，也大都為弱陽性（封三圖4）。

表1～3顯示，Galectin-3和CK19在HT合并PTC中均有強陽性表達，在單純HT中的表達率較低，而在HT伴不典型細胞群中Galectin-3的表達顯著低于CK19（P ＜ 0.05）。因此，在HT中若發現不典型細胞群，難于判斷是否為HT合并PTC時，可聯合檢測Galectin-3和CK19，若兩者均有強陽性表達，則應考慮HT合并PTC；若僅CK19強陽性而Galectin-3陰性或弱陽性，則應考慮為HT伴不典型細胞群，建議復查隨訪。

3討論

惡性腫瘤的治愈關鍵在于早發現、早治療。甲狀腺癌早期病變常無特殊癥狀和體征，臨床診斷常較困難，病理科報告的甲狀腺癌大多數是在臨床診斷橋本病或結節性甲狀腺腫而手術切除的標本中發現的。近年來，橋本甲狀腺炎伴乳頭狀癌的高比例已引起很多學者的重視，多數學者認為HT與PTC間有密切關系[5]，其發生是包括癌基因突變、重排、內分泌以及免疫等機體自身穩定系統調控失常等多種因素綜合作用的結果。擺在病理學者面前的問題是如何在HT病變中發現早期PTC病灶，以不至于漏診。

Galectin-3是一種具有氨基末端和羧基末端糖類識別區的糖類結合蛋白，存在于多種組織細胞的胞核、胞漿、胞膜及細胞間。許多研究顯示，Galectin-3可以通過刺激細胞生長增殖，阻止腫瘤細胞凋亡以及促進血管生成、腫瘤細胞與細胞外基質相互作用等，在腫瘤的發生發展、轉移中起重要作用[6，7]。

細胞角蛋白主要存在于正常上皮和各種上皮來源的腫瘤中，是哺乳動物細胞5種支架成份之一，CK19分子量為40 kD，是一種低分子量角蛋白，由KRT19基因編碼，正常組織中含量極少，當細胞癌變時CK19含量升高并被釋放出來。

本組試驗表明，Galectin-3、CK19在HT合并PTC病變中均有較強陽性表達，兩組間無顯著差異，但在單純HT中的表達較弱，即便陽性也是散在弱陽性表達，與HT合并PTC中的表達有顯著差異。因此，Galectin-3、CK19聯合檢測的強陽性表達可作為診斷HT合并PTC的輔助指標，甚至有學者指出，HT中Galectin-3的強陽性表達應視為癌變[8]。而對于HT病變中的不典型細胞群，CK19和Galectin-3的表達則有顯著差異，CK19的表達較強，其強度與HT伴PTC相當，與Prasad等[9]、張寶燕、李向紅等[4]的研究非常接近，提示某些HT中的PTC核樣不典型細胞群在細胞骨架水平上發生了改變，而獲得了PTC的某些免疫表型特征，可能是HT合并PTC的前驅病變。但Galectin-3的表達率顯著偏低，且陽性較弱、散，這也提示不典型細胞群還并非真正意義上的PTC，應引起足夠的重視。因此，我們在臨床病理工作中遇到的HT不典型細胞群，若診斷上難于把握，聯合檢測Galectin-3和CK19將有助于做出正確判斷。

綜上所述，Galectin-3、CK19聯合檢測可作為早期判斷HT合并PTC的靈敏標記，還可用于判斷HT病變中具PTC核樣不典型細胞群是否為微小PTC病變的有用標記。對于針吸細胞學標本，隨著細胞蠟塊技術及快速免疫組化技術的興起，相信Galectin-3、CK19在早期發現HT合并PTC的應用價值會凸顯出來。

[參考文獻]

[1]Hashimoto H. Zur kenntiss der lymphomatosen veranderung der Schilddrusse strumalymphoma. Arch klein Cgur，1912，97：218-222.

[2]陳佳瑞，王家東. 橋本甲狀腺炎與甲狀腺乳頭狀癌相關性的研究進展[J].現代腫瘤醫學，2009，17（12）：2449-2451.

[3]潘丹玲，林潔. 500例甲狀腺乳頭狀癌臨床病理與Galectin-3、CK19和MC的表達分析[J]. 中外醫學研究，2011，9（36）：1-2.

[4]張寶燕，李向紅，王金泉，等. 橋本氏甲狀腺炎不典型細胞群Galectin-3、CK19、CK7的表達及意義[J]. 臨床與實驗病理學雜志，2009，25（5）：519-522.

[5]Stella C L，Obruen JM，Forrester K L，et al. The Coexistence of Gestational on Pregnancy Outcome[J]. Am J perin atol，2005，25（6）：325-329.

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[7]Raz A，Zhu D，hogun V，et al. Evidence for the role of 34 kDa galactoside binding lectin in transformation and metastasis[J]. Int j cancer，1990，46（5）：871-877.

[8]張曉，邱新光. 橋本病伴結節樣變中Galectin-3，CK19的表達及其臨床意義[J]. 中國實用醫刊，2008，35（1）：9-11.

[9]Prasad ML，Huang Y，Pellegata NS，et al. Hashimotos Thyroiditis with papillary thyroid carcinoma（PTC）-like nuclear alterations express molecular markers of PTC[J]. histopathology，2004，45：39-46.

（收稿日期：2012-05-23）