白細(xì)胞介素—6與基質(zhì)金屬蛋白酶—9與胎膜早破及絨毛膜羊膜炎的關(guān)系

[摘要] 目的 通過檢測胎膜早破孕婦羊水中白細(xì)胞介素6（IL—6）和胎膜中基質(zhì)金屬蛋白酶—9（MMP—9）的含量，探討IL—6和MMP—9與胎膜早破的關(guān)系及其在預(yù)測絨毛膜羊膜炎亞臨床感染等方面的診斷價(jià)值。 方法 選擇 2010年8月～2012年2月在我院住院分娩的未足月胎膜早破孕婦20例，足月胎膜早破孕婦25例為研究對象，足月剖宮產(chǎn)人工破膜孕婦40例作為正常對照組。檢測三組羊水中IL—6含量和胎膜中MMP—9的陽性率。結(jié)果 三組羊水中IL—6含量和胎膜中MMP—9的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01），未足月胎膜早破組與足月胎膜早破組均顯著高于正常對照組（P < 0.01）。絨毛膜羊膜炎組羊水IL—6含量和胎膜MMP—9陽性率顯著高于非絨毛膜羊膜炎組（P < 0.01）。結(jié)論 羊水中IL—6和胎膜MMP—9的含量與胎膜早破和絨毛膜羊膜炎存在相關(guān)性。

[關(guān)鍵詞] 胎膜早破；絨毛膜羊膜炎；白介素—6；基質(zhì)金屬蛋白酶—9

[中圖分類號] R714.43 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673—9701（2012）27—0037—03

Relationship of amniotic fluid interleukin—6 and MMP—9 levels with premature rupture of membranes and chorioamnionitis

WU Xueqin ZENG Yanhua ZHENG Pinduan XU Ruihuan LI Yufang

Department of Obstetrics and Gynecology， Longgang Central Hospital of Shenzhen City， Shenzhen 518116， China

[Abstract] Objective To investigate relationship of amniotic fluid Interleukin—6 and MMP—9 levels with premature rupture of membranes and chorioamnionitis. Methods From Oct 2010 to Feb 2012， 20 cases with pPROM， 25 cases with tPROM and 40 normal maternal were selected. amniotic fluid IL—6 and MMP—9 levels were detected. Results IL—6 and MMP—9 levels in three groups had significant difference（P < 0.01）. Level of pPROM and tPROM were more than control group（P < 0.01）. Conclusion Fluid interleukin—6 and MMP—9 levels show correlation with PROM and chorioamnionitis.

[Key words] PROM； IL—6； Chorioamnionitis； MMP—9

胎膜早破（premature rupture of membranes，PROM）是導(dǎo)致早產(chǎn)、增加圍產(chǎn)兒患病率及死亡率的重要原因之一。PROM 發(fā)生的原因是多方面的，炎癥和胎膜本身結(jié)構(gòu)缺陷是早破胎膜局部最基本的病理變化。胎膜早破可導(dǎo)致胎兒宮內(nèi)感染、早產(chǎn)、增加新生兒死亡發(fā)生率。因此研究胎膜早破的相關(guān)因素，對預(yù)防胎膜早破具有重要的臨床意義。本文分別檢測未足月胎膜早破孕婦、足月胎膜早破孕婦及足月無胎膜早破孕婦羊水中IL—6的含量和胎膜MMP—9的陽性率，探討其與胎膜早破和絨毛膜羊膜炎的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選擇2010年8月～2012年2月住院分娩的未足月胎膜早破孕婦（preterm premature rupture of membrane，pPROM）20例為未足月胎膜早破組，足月胎膜早破（term premature rupture of membrane，tPROM）25例為足月胎膜早破組； pPROM組年齡26～35歲，中位年齡27歲，孕28～35周，中位孕周33周；tPROM組年齡23～32歲，中位年齡28歲，孕38～41周，中位孕周39周；選擇同期在我院孕足月剖宮產(chǎn)人工破膜孕婦40例作為正常對照組，年齡24～30歲，中位年齡27歲，孕38～41周，中位孕周39周。三組孕婦年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。所有入選孕婦均無高血壓、心臟病、糖尿病、肝炎、腎炎、腫瘤等病史，破膜時(shí)間均在72 h內(nèi)。

1.2 胎膜早破診斷標(biāo)準(zhǔn)

參照《婦產(chǎn)科學(xué)》第7版相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，排除胎位異常、頭盆不稱、雙胎和機(jī)械性損傷導(dǎo)致的胎膜早破。羊膜腔感染診斷標(biāo)準(zhǔn)：①臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)：體溫≥37.4 ℃；孕婦心率>100次/min或胎心>160 次/min；子宮壓痛、羊水有臭味、白細(xì)胞計(jì)數(shù)>15×109/L。②病理診斷標(biāo)準(zhǔn)：胎膜組織病理檢查有炎性細(xì)胞浸潤。

1.3 樣本的采集與檢測

1.3.1羊水的采集與IL—6的檢測 研究組為陰道分娩者，于臨產(chǎn)后消毒外陰，用窺陰器暴露陰道及宮頸，留取后穹窿或?qū)m頸中的羊水5 mL，剖宮產(chǎn)者及對照組均于剖宮產(chǎn)術(shù)中切開子宮下段肌層，胎兒未娩出前用無菌注射器抽取羊水5 mL；抽取的羊水均置于無菌試管中，在室溫下靜止2 h后離心15 min，取上清液裝于無菌干燥試管內(nèi)，封口放于—70 ℃冰箱保存待測。采用Luminex 200 流式熒光點(diǎn)陣儀（美國Luminex公司），人IL—6流式熒光試劑盒（美國BIO—RAD公司提供）測定產(chǎn)婦羊水中IL—6的水平。所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.3.2 胎膜的采集與MMP—9的檢測 兩組孕婦均于產(chǎn)后剪取破口處全層胎膜組織2 cm×2 cm，立即置10 %福爾馬林中固定， 24 h內(nèi)常規(guī)脫水、浸蠟、包埋。MMP—9檢測采用免疫組化SP法（試劑由福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供）， 空白對照采用PBS代替一抗，陽性對照采用乳腺癌組織。在顯微鏡100倍視野下觀察，每張切片隨機(jī)選擇5個區(qū)域，根據(jù)黃色反應(yīng)的陽性強(qiáng)度及面積判斷結(jié)果。細(xì)胞著色強(qiáng)度以多數(shù)陽性細(xì)胞呈現(xiàn)的黃色計(jì)分。陽性細(xì)胞的陽性強(qiáng)度按無著色、淡黃色、棕黃色和棕褐色分別計(jì) 0、 1、 2、 3 分，著色陽性面積按無著色、 著色< 1/ 3、1/ 3～2/ 3、> 2/ 3分別計(jì) 0、 1、 2、 3分，兩項(xiàng)計(jì)分之和即為 MMP—9 的免疫組織化學(xué)（IH）積分。

1.4絨毛羊膜炎病理診斷

產(chǎn)后取胎膜母體面距胎膜破裂超過2 cm處的胎膜約2 cm×2 cm，甲醛固定后，石蠟包埋，常規(guī)切片、染色，進(jìn)行病理診斷。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t 檢驗(yàn)或F檢驗(yàn)， P < 0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 三組孕婦羊水IL—6含量和胎膜MMP—9的陽性率

三組羊水IL—6含量和胎膜MMP—9的陽性率均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01），未足月胎膜早破組與足月胎膜早破組均顯著高于正常對照組（P < 0.01）。見表1。胎膜MMP—9病理結(jié)果見圖1，2。

2.2 絨毛膜羊膜炎與非絨毛膜羊膜炎產(chǎn)婦羊水IL—6含量和胎膜MMP—9陽性率

對胎膜早破的產(chǎn)婦進(jìn)行胎膜病理檢查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在45例胎膜早破的患者中，有30例出現(xiàn)絨毛膜羊膜炎。絨毛膜羊膜炎組羊水IL—6含量和胎膜MMP—9的陽性率顯著高于非絨毛膜羊膜炎組（P < 0.01）。見表2。

表2 絨毛膜羊膜炎與非絨毛膜羊膜炎產(chǎn)婦羊水IL—6和胎膜含量MMP—9的陽性率

2.3 羊水IL—6和胎膜MMP—9的量對預(yù)測絨毛膜羊膜炎的價(jià)值

IL—6以68.5 ng/mL為預(yù)測絨毛膜羊膜炎的臨界值。絨毛膜羊膜炎組MMP—9陽性的患者29例，IL—6陽性的患者13例，非絨毛膜羊膜炎組MMP—9陽性的患者11例，IL—6陽性的患者5例。MMP—9和IL—6的敏感性、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值見表3。

表3 羊水IL—6和胎膜MMP—9的量對預(yù)測絨毛膜羊膜炎的價(jià)值（%）

注：敏感性：絨毛膜羊膜炎中得出陽性檢測的樣本占絨毛膜羊膜炎總數(shù)的百分比；特異性：非絨毛膜羊膜炎中得出陰性檢測的樣本占非絨毛膜羊膜炎總數(shù)的百分比；陽性預(yù)測值：得出陽性檢測的樣本總數(shù)中，絨毛膜羊膜炎樣本占陽性檢測樣本總數(shù)的百分比；陰性預(yù)測值即得出陰性檢測的樣本總數(shù)中，非絨毛膜羊膜炎樣本占陰性檢測樣本總數(shù)的百分比

3 討論

胎膜早破（premature rupture of membranes，PROM）指臨產(chǎn)前胎膜破裂，近 1/3 的早產(chǎn)由此引起，增加了圍生期母兒的發(fā)病率和死亡率。PROM發(fā)生的主要原因是細(xì)菌、病毒、支原體等所致的絨毛膜羊膜炎[1]，胎膜結(jié)構(gòu)被破壞，使胎膜薄弱處發(fā)生破裂。既往研究表明細(xì)胞因子與產(chǎn)程發(fā)動有關(guān)[2]，其中包括IL—6、IL—8等。

目前，臨床上判斷是否發(fā)生羊膜腔感染尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。國外研究多認(rèn)為羊水中IL—6含量升高可以較敏感地提示羊膜腔感染。劉振紅[3]、王艷麗[4]、馬文革[5]等也都認(rèn)為IL—6含量具有比較重要的臨床預(yù)測價(jià)值。本研究通過檢測IL—6含量和臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)相比較，結(jié)果提示：若以臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)作為判斷是否發(fā)生羊膜腔感染的標(biāo)準(zhǔn)，保證了特異性；但陽性推斷率卻低于IL—6檢測，由此可能導(dǎo)致部分孕產(chǎn)婦得不到及時(shí)的治療。而羊水中IL—6的含量在診斷的特異性稍差，但在診斷敏感性及臨床預(yù)測值方面優(yōu)于臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)。我們認(rèn)為有可能用IL—6的含量可作為預(yù)測胎膜早破的參考因素之一。

IL—6屬于由單核細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等產(chǎn)生的炎性細(xì)胞因子家族，參與機(jī)體的炎性反應(yīng)和創(chuàng)傷的愈合。孕婦宮內(nèi)蛻膜和絨毛組織的單核細(xì)胞是羊水IL—6的主要來源。馬文革等[5]發(fā)現(xiàn)在羊膜腔感染發(fā)生時(shí)，除蛻膜和絨毛以外，大量的炎性細(xì)胞將產(chǎn)生更多的IL—6，并且隨破膜時(shí)間延長，病原體入侵機(jī)會增加，感染加重，其含量也會逐漸增加。本研究結(jié)果與大多數(shù)報(bào)道一致，證實(shí)IL—6水平在胎膜早破方面具有臨床診斷意義。

金屬蛋白酶是活性中心中含有金屬離子的蛋白酶的總稱，MMP—9是其中一種，具有裂解膠原、彈性蛋白、纖維連接蛋白的作用[6]。胎膜和胎膜的羊膜上皮細(xì)胞、滋養(yǎng)層細(xì)胞及粒細(xì)胞分泌MMP—9，當(dāng)感染發(fā)生時(shí)，細(xì)菌通過產(chǎn)生有機(jī)汞，激活胎膜中的金屬蛋白酶，而感染導(dǎo)致的白細(xì)胞介素升高，可誘導(dǎo)白細(xì)胞局部浸潤，而白細(xì)胞是分泌MMP—9的來源之一[7]。因此MMP—9可以作為預(yù)測絨毛膜羊膜炎的指標(biāo)。

本文對胎膜早破的產(chǎn)婦和正常產(chǎn)婦羊水中IL—6和胎膜中MMP—9進(jìn)行檢測，顯示：胎膜早破組顯著高于正常對照組，而孕足月胎膜早破和未足月胎膜早破之間沒有差異。而對胎膜早破的產(chǎn)婦進(jìn)行病理診斷，明確存在絨毛膜羊膜炎的患者，與非絨毛膜羊膜炎產(chǎn)婦比較，其IL—6和MMP—9均明顯升高，說明IL—6和MMP—9與胎膜早破和絨毛膜羊膜炎存在相關(guān)性。對IL—6和MMP—9預(yù)測絨毛膜羊膜炎作用進(jìn)行進(jìn)一步探討，發(fā)現(xiàn)MMP—9的敏感性和陰性預(yù)測值均高于IL—6。

綜上所述，羊水中IL—6的含量和胎膜中MMP—9陽性率與胎膜早破有相關(guān)性，在胎膜早破的診斷和預(yù)測絨毛膜羊膜炎亞臨床感染等方面具有診斷價(jià)值。

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（收稿日期： 2012—06—29）