重組人基質金屬蛋白酶2（MMP-2）血紅素樣蛋白表達優化

李彥杰，肖國生，劉仁華，楊俊年

（1.重慶三峽學院生命科學與工程學院，重慶 404000；

2.三峽庫區可持續發展研究中心，重慶 404000）

重組人基質金屬蛋白酶2（MMP-2）血紅素樣蛋白表達優化

李彥杰1，2，肖國生1，劉仁華1，楊俊年1

（1.重慶三峽學院生命科學與工程學院，重慶 404000；

2.三峽庫區可持續發展研究中心，重慶 404000）

為確定重組大腸桿菌（BL21（DE3）/PET42a-PEX）最佳表達條件。在單因素實驗的基礎之上，以目的蛋白PEX表達量為響應值，應用Box-Behnken中心組合設計建立數學模型，進行響應面分析。響應面分析確定的最優因素水平組合為：LB培養基pH為7.50，誘導時菌液OD600為0.60，IPTG誘導濃度為0.60mmol/L，誘導培養時間為5.0h。對此工藝條件進行驗證得到目的蛋白PEX表達量為20.98mg/L。結果顯示，優化了基因重組大腸桿菌表達人PEX的條件，為實現基因重組原核工程菌發酵法制備重組PEX奠定了基礎。

大腸桿菌，基質金屬蛋白酶2，血紅素樣蛋白，Box-Behnken設計

基質金屬蛋白酶（matrixmetalloproteinase，MMPs）是一組Zn2+依賴性內源性蛋白水解酶超家族，在降解包括骨在內的全身各種組織細胞外基質（extracellular matrix，ECM）過程中扮演著重要角色[1-3]。MMP-2是該家族的重要一員，主要由成纖維細胞、角質形成細胞、內皮細胞、軟骨細胞、成骨細胞和單核細胞等多種細胞分泌合成[3-5]。MMP-2參與降解IV型膠原蛋白，I型膠原蛋白和細胞外糖蛋白，在腫瘤侵襲轉移中起關鍵作用[3，6]。基質金屬蛋白酶（MMPs）血紅素樣蛋白（matrixmetalloproteinase 2 hemopexin-like C-terminal domain，PEX）是除MMP-7、MMP-23和MMP-26外所有MMPs在羧基端共有的結構域，體內提取的PEX是MMPs的內源性抑制劑[7-10]。研究發現MMP-2-PEX能抑制MMP-2對ECM的降解、血管的形成、細胞的遷移和增殖[11-15]。提取人神經膠質……