針刺足三里、太沖對腹瀉型腸易激綜合征大鼠胃腸激素SS、SP的影響

劉美榮，王思明，肖瑞飛，左和寧，彭芝配

（1.湖南中醫藥大學第一附屬醫院，湖南 長沙 410007；2.湖南中醫藥大學，湖南 長沙 410007）

腸易激綜合征（irritabel bowel snydrom，IBS）是一種以腹痛或腹部感覺不適伴排便習慣的改變為特征的功能性腸道疾病。羅馬Ⅲ標準將其分為便秘型（IBS-C）、腹瀉型（IBSD）、混合型（IBS-M）和未分型IBS（IBS-U）四種亞型。我國最常見的是IBS-D，占所有確診病例的74.1%[1]。IBS作為一種功能性疾病嚴重影響患者生活質量，但其發病因素尚未完全明了，目前尚無特異性治療手段。在臨床上，針灸可有效調節腸道功能紊亂。本實驗采用慢性溫和應激加孤養法加灌服番瀉葉刺激大鼠造成IBS-D模型，觀察針刺足三里、太沖對IBS-D大鼠腹瀉指數及胃腸激素的影響，以期為臨床上使用針刺療法治療IBS-D提供有效的實驗依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物

健康SD大鼠50只，雌雄各半，體質量200～250g，購于湖南斯萊克景達實驗動物有限公司（SCXK 2009－004）。

1.1.2 藥物

匹維溴銨片，50mg／片（solvay pharma公司生產，批號：611243）。番瀉葉，購于湖南省藥材公司，經湖南中醫藥大學中藥鑒定教研室鑒定為真品。

1.1.3 試劑

SS、SP酶聯免疫試劑盒，96T（上海滬峰生物科技有限公司）。

1.1.4 儀器

SHIMADZU－AY120分析天平（日本島津）；低溫離心機（湘儀實驗設備有限公司）；三用電熱恒溫水溫箱（上海躍進醫療器械廠）；酶標儀（美國伯騰儀器有限公司）；安迪牌無菌針灸針，0.25mm×25mm（貴州安迪藥械有限公司，標準號：GB2024－94）；大鼠固定板（湖南中醫藥大學針灸實驗室提供）。

1.2 方法

1.2.1 造模方法[2]

隨機分組后的大鼠除空白組外，其它組均予番瀉葉水煎劑灌胃。灌胃后，用慢性溫和束縛應激加孤養法刺激大鼠。每日僅隨機對大鼠做一項處理：①用漆包線捆綁住大鼠的雙后肢，使大鼠不能正常活動，造成一定應激刺激，每次2h；②夾尾1min；③置于45℃高溫環境5min；④置于4℃冰水游泳3min；⑤晝夜顛倒；⑥禁食24h；⑦電熱恒溫振蕩水槽水平振蕩（160次／min）45min。為使大鼠無法預料刺激的發生，任意的連續兩天所做的處理均不能相同，共刺激14d。模型評價：觀察大鼠的精神狀況、攝食量變化、體質量改變和大便情況。大鼠發生腹瀉，食欲下降，檢測腹瀉指數，模型組與空白組比差異具有統計學差異，證明模型成功。

1.2.2 動物分組

依據文獻方法[3]，用Excel隨機函數“Rand”將大鼠隨機分為空白組、模型組、捆綁組、針刺組、藥物組，每組10只，單籠喂養。

1.2.3 藥物制備及給藥劑量

匹維溴銨片，碾碎后溶入蒸餾水，按大鼠與成人體表面積換算[4]配制成濃度為0.3mg／mL的溶液，經灌胃給藥，給藥體積10mL／kg；番瀉葉，水煮沸5min，配制成濃度為2g／mL的溶液，經灌胃給藥，給藥體積10mL／kg。

1.2.4 針刺方法

造模結束后，空白組、模型組、捆綁組和針刺組灌生理鹽水，藥物組灌服匹維溴銨溶液。針刺組給予針刺相應穴位；捆綁組和藥物組在同等條件下相應時間點給予相應的捆綁刺激，每日1次，共14d。穴位定位：參照《實驗針灸學》“實驗動物常用腧穴簡表”定位[5]。“足三里”穴捻轉針法[6]：向心角度捻轉，幅度90°左右，頻率120次／min。“太沖”穴行捻轉瀉法：離心角度捻轉，幅度180°左右，頻率60次／min，每穴操作3min，留針30min。

1.2.5 觀測指標及檢測方法

（1）一般狀態觀察。每日觀察大鼠進食、飲水、精神狀態及毛色。

（2）腹瀉指數測定。參照文獻[7]分別在造模前1d、治療前1d、治療后14d測定5h內各組大鼠腹瀉指數。

（3）胃腸激素的測定。在治療14天后，各組大鼠禁食不禁水16h，腹腔注射臨時配制的10%水合氯醛，劑量0.3mL／100g。麻醉后，腹主動脈EDTA管采血5mL低溫離心，分離出血漿待測。采血后，在大鼠回盲部以上約5cm處取一小段回腸組織，肛門以上約2cm處取一小段直腸組織，立即用生理鹽水沖洗，無菌濾紙吸干后稱重，充分勻漿后低溫離心，將分離出的上清液置于冰箱中-20℃保存備用。生長抑素（SS）和P物質（SP）的含量分別按各自的ELISA試劑盒使用說明書方法測定。

1.3 統計學處理

用SPSS16.0統計軟件分析，所有計量資料均以均數±標準差（）表示，符合正態性和方差齊性者，組內前后比較采用配對t檢驗，多組比較采用單因素方差分析q檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義，P＜0.01表示差異有顯著性統計學意義。

2 結果

2.1 造模后大鼠一般情況

造模后大鼠豎毛，毛枯槁無光澤，易激惹，大便稀或溏泄，漸見肛周污穢。

2.2 大鼠體質量結果比較

造模前各組大鼠體質量比較均無顯著性差異（P＞0.05）。造模后模型組、捆綁組、針刺組、藥物組體質量增長緩慢，與空白組比較，均有顯著性差異 （P＜0.05）。治療14天后捆綁組與模型組比較無顯著性差異（P＞0.05）；針刺組、藥物組體質量增加明顯，與模型組比較，均有顯著性差異（P＜0.05），針刺組與藥物組比較無顯著性差異（P＞0.05）。結果見表1。

表1 各組大鼠造模前、造模后、治療后體質量比較（n＝10，，g）

表1 各組大鼠造模前、造模后、治療后體質量比較（n＝10，，g）

注：與空白組比較：＊P＜0.05；與模型組比較：▲P＜0.05。

組別 造模前 造模后 治療后空白組269.12±11.76330.53±9.89385.01±9.72模型組 271.98±9.56305.16±10.50＊ 326.01±6.81捆綁組 267.02±10.60307.08±9.53＊ 317.05±7.62針刺組 267.09±10.66304.10±8.68＊ 364.31±8.06▲藥物組 261.98±9.93306.68±10.73＊ 362.50±8.61▲

2.3 大鼠攝食量比較

造模前各組每只大鼠平均日攝食量均無顯著性差異（P＞0.05）。造模期模型組、捆綁組、針刺組、藥物組攝食量減少，與空白組比較均有顯著性差異（P＜0.01）。治療期捆綁組與模型組比較無顯著性差異（P＞0.05）；針刺組、藥物組攝食量明顯增加，與模型組比較均有顯著性差異（P＜0.01），針刺組與藥物組比較無顯著性差異（P＞0.05）。結果見表2。

表2 各組大鼠造模前、造模期、治療期平均攝食量比較（n＝10，，g）

表2 各組大鼠造模前、造模期、治療期平均攝食量比較（n＝10，，g）

注：與空白組比較：＊＊P＜0.01；與模型組比較：▲▲P＜0.01。

組別 造模前 造模期 治療期空白組38.75±1.12 47.36±2.41 53.44±1.52模型組 38.52±1.48 30.61±1.79＊＊ 36.84±2.13捆綁組 38.39±1.57 30.15±2.31＊＊ 35.72±1.48針刺組 38.30±1.26 29.44±1.57＊＊ 45.79±1.37▲▲藥物組 38.58±1.33 31.16±1.82＊＊ 46.27±2.45▲▲

2.4 大鼠腹瀉指數比較

造模前各組均無腹瀉，腹瀉指數為0。造模后模型組、捆綁組、針刺組、藥物組腹瀉指數明顯升高，與空白組比較均有顯著性差異（P＜0.01）。治療后捆綁組與模型組比較無顯著性差異（P＞0.05）；針刺組、藥物組腹瀉指數明顯降低，與模型組比較均有顯著性差異（P＜0.01），針刺組與藥物組比較無顯著性差異（P＞0.05）。結果見表3。

表3 各組大鼠造模前、造模后、治療后腹瀉指數比較（n＝10，）

表3 各組大鼠造模前、造模后、治療后腹瀉指數比較（n＝10，）

注：與空白組比較：＊＊P＜0.01；與模型組比較：▲▲P＜0.01。

組別 造模前 造模后 治療后空白組0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00模型組 0.00±0.00 1.07±0.13＊＊ 0.89±0.21捆綁組 0.00±0.00 1.08±0.15＊＊ 0.95±0.19針刺組 0.00±0.00 1.06±0.11＊＊ 0.18±0.17▲▲藥物組 0.00±0.00 1.07±0.12＊＊ 0.17±0.20▲▲

2.5 大鼠回腸組織中胃腸激素含量比較

模型組回腸組織中SS、SP含量顯著升高，與空白組比有顯著性差異（P＜0.01）。捆綁組與模型組相比較無顯著性差異（P＞0.05）；針刺組、藥物組與模型組比，回腸組織中SS、SP含量降低，具有顯著性差異（P＜0.01）。結果見表4。

表4 各組大鼠回腸組織中胃腸激素含量比較（n＝10，）

表4 各組大鼠回腸組織中胃腸激素含量比較（n＝10，）

注：與空白組比較：＊＊P＜0.01；與模型組比較：▲▲P＜0.01。

組別 SS（μg／g） SP（ng／g）空白組9.333±0.992 30.379±1.672模型組 24.147±0.893＊＊ 37.463±1.628＊＊捆綁組 25.443±0.709 36.691±1.671針刺組 13.750±1.225▲▲ 31.317±1.199▲▲藥物組 13.681±0.734▲▲ 31.964±1.547▲▲

2.6 大鼠直腸組織中胃腸激素含量比較

各組大鼠直腸組織中SS、SP含量無顯著性差異（P＞0.05）。結果見表5。

表5 各組大鼠直腸組織中胃腸激素含量比較（n＝10，）

表5 各組大鼠直腸組織中胃腸激素含量比較（n＝10，）

組別 SS（μg／g） SP（ng／g）空白組157.598±3.799 144.995±3.763模型組 133.270±4.216 131.312±3.070捆綁組 147.631±4.085 142.424±3.805針刺組 147.463±6.547 138.513±2.948藥物組146.268±6.291 141.555±4.208

2.7 大鼠血漿中胃腸激素含量比較

各組大鼠血漿中SS、SP含量無顯著性差異（P＞0.05）。結果見表6。

表6 各組大鼠血漿中胃腸激素含量比較（n＝10，）

表6 各組大鼠血漿中胃腸激素含量比較（n＝10，）

組別 SS（μg／L） SP（ng／L）空白組75.705±1.508 72.246±3.899模型組 75.687±2.311 72.225±2.508捆綁組 75.725±2.111 72.500±3.110針刺組 74.645±2.615 78.964±2.573藥物組76.844±2.747 80.481±2.579

3 討論

IBS在中醫學中屬“泄瀉”、“腹痛”范疇。中醫認為七情失調可引起內臟功能發生紊亂，尤其對肝脾有很大的影響。《醫方考》所云：“瀉責之脾，痛責之肝，肝責之實，脾責之虛，脾虛肝實，故會痛瀉。”因此肝郁脾虛是IBS最為多見的證型。

針灸治療IBS的優點在于無副作用，可避免因胃腸疾病而對藥物吸收所造成的影響，減少消化道的負擔。太沖為足厥陰肝經的原穴、輸穴，原穴為臟腑原氣所留止之處，臟腑發生病變會相應地反應到原穴上來，而針刺原穴又能調整臟腑氣血，通達三焦氣機，改善內臟功能，從而發揮其維護正氣、抗御病邪的作用。《四穴總歌》曰：“肚腹三里留”，足三里是足陽明胃經的合穴、胃之下合穴，“合治內腑”，具有和胃健脾、補中益氣、通調腑氣、扶正祛邪之功能。《靈樞·五邪》記載“邪在脾胃，則病肌肉痛，陽氣有余，陰氣不足，則熱中善饑；陽氣不足，陰氣有余，則寒中腸鳴腹痛；陰陽俱有余，若俱不足，則有寒有熱，皆調于三里”。金元時代的李東垣曰“以胃合三里穴推而揚之以伸元氣”，認為刺激足三里穴能起到補益脾胃元氣之功。因此，胃腸有疾，當為首選。

隨著對IBS的進一步了解，大量研究發現胃腸激素的改變和IBS的發病關系密切。其發病與胃腸激素SP、粘膜中生長抑索（SS）、VIP、CGRP、細胞受體等密切相關[8]。腦腸肽是調節胃腸道運動的重要物質，與IBS發病密切相關常見有 VIP、SS、5-HT、SP、NPY等。

生長抑素（SS）在腦和胃腸道中分布廣泛，對胃腸道的內分泌、外分泌、小腸的吸收和運動等具有廣泛作用，其主要生理作用為抑制胃腸道的運動和膽囊收縮[9]。新近研究發現，腹瀉型IBS患者的血漿和乙狀結腸黏膜中，SS的含量明顯高于正常人。推測其作用機制，腹瀉型IBS的發生可能是SS升高，間接引起肥大細胞釋放增多，而肥大細胞通過釋放生物活性物質參與IBS患者的腹痛或腸道運動加速，誘發內臟的高敏感性，使腸道呈現出運動占優勢的癥狀：腹痛、腹瀉等[10]。SP是一種速激肽，在全身均有分布，以胃腸道和中樞神經系統濃度最高。在腸道中主要存在于腸肌間神經叢和黏膜下神經叢，可增強胃腸蠕動，有強烈促消化道平滑肌收縮，加強結腸的集團推進運動，刺激小腸、結腸黏膜分泌水和電解質作用。

在本實驗中，捆綁組和模型組相比，各種指標數據均無顯著性差異（P＞0.05），說明捆綁因素在實驗過程中無影響。模型組和捆綁組大鼠回腸組織中SS、SP含量高于其他組，有顯著性差異（P＜0.01），而直腸組織和血漿中各組SS、SP含量無顯著性差異（P＞0.05），說明針刺足三里、太沖主要作用部位在回腸組織中，可通過降低IBS-D模型大鼠回腸中SS、SP含量而發揮治療作用。

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[3]李志春，桂立輝.利用Excel實現對實驗對象隨機分組的應用[J].毒理學雜志，2005，19（3）：235-236.

[4]陳奇.中藥藥理研究方法學[M].第2版.北京：人民衛生出版社，2006：1167-1169.

[5]李忠仁.實驗針灸學[M].北京：中國中醫藥出版社，2003：327.

[6]楊兆民，郭恩吉，郭誠杰.刺法灸法學[M].上海：上海科技出版社，l996：22.

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[10]張茹，王福賢.腸易激綜合征患者血漿及乙狀結腸黏膜中VIP及SS的含量[J].標記免疫分析與臨床，2004，11（2）：81-82.