基于模擬酶切的酪蛋白定向酶解探究

彭莉娟，王 偉，張賽賽，趙春江，馮鳳琴，*

（1.浙江大學生工食品學院，浙江杭州310058；2.浙江省農業科學院，浙江杭州310021）

基于模擬酶切的酪蛋白定向酶解探究

彭莉娟1，王 偉2，張賽賽1，趙春江1，馮鳳琴1，*

（1.浙江大學生工食品學院，浙江杭州310058；2.浙江省農業科學院，浙江杭州310021）

用模擬酶切軟件peptidecutter提供的39種蛋白酶，對已知序列的酪蛋白進行模擬酶切，以生成的寡肽數量為指標建立酶解肽庫，選擇適用酶并進行真實條件下的酶解驗證，獲得最適用酶；以血管緊張素轉化酶（ACE）抑制肽的抑制率和酪蛋白磷酸肽（CPP）的氮磷摩爾比來評價ACE抑制肽的活性及CPP的純度，超濾分離酶解液獲得高純度的ACE抑制肽和CPP。結果表明：胰蛋白酶為最適用酶，超濾后ACE抑制肽的抑制活性及CPP的純度顯著升高（p<0.01），獲得了高活性的ACE抑制肽和高純度的CPP。

酪蛋白，模擬酶解，血管緊張素轉化酶（ACE）抑制肽，酪蛋白磷酸肽（CPP）

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

酪蛋白 臨夏州華安生物制品有限公司；馬尿酸、ACE、馬尿酰組氨酰亮氨酸（HHL） sigma公司；胰蛋白酶（28萬U/g） 國藥集團化學試劑有限公司；中性蛋白酶（15萬U/g）、堿性蛋白酶（4000U/g） 南寧龐博生物工程有限公司；乙腈 天津四友精細化學品有限公司，色譜純；其他化學試劑均為分析純。

LC-20AD液相色譜儀 日本島津公司；Kjeltec2300全自動定氮儀 丹麥FOSS公司；超濾裝置、膜包（PLCGC再生纖維素膜，截留分子量為1k和5k） 美國Millipore公司；PB-10 pH計、BSA224S電子分析天平 德國sartorius公司；DF101S磁力攪拌儀 中國英峪予華儀器廠；LXJ-IIB離心機 上海安亭科學儀器廠；DKS-24恒溫水浴鍋 中國中新醫療儀器有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 肽數據庫的建立及……