甜葉菊隨機擴增多態(tài)性DNA技術優(yōu)化及親緣關系研究

胡能兵，何克勤，張子學，林 平，隋益虎，崔廣榮，2，*

（1.安徽科技學院植物科學學院，安徽鳳陽233100；2.安徽省甜葉菊工程技術研究中心，安徽蚌埠233000）

甜葉菊隨機擴增多態(tài)性DNA技術優(yōu)化及親緣關系研究

胡能兵1，何克勤1，張子學1，林 平1，隋益虎1，崔廣榮1，2，*

（1.安徽科技學院植物科學學院，安徽鳳陽233100；2.安徽省甜葉菊工程技術研究中心，安徽蚌埠233000）

以甜葉菊為試材，對影響其隨機擴增多態(tài)性DNA標記反應體系的7個因子進行優(yōu)化，同時對來自國內外的12個品種進行親緣關系分析。結果表明，20μL的優(yōu)化體系包括：雙蒸水13.6μL，10×Buffer（含15mmol/L MgCl2）溶液3μL，2.5mmol/L的dNTPS 1.2μL，10μmol/L的引物1μL，20ng的模板DNA 1μL，1U Taq聚合酶；熱循環(huán)程序為：94℃預變性4min，94℃變性30s，35℃退火30s，72℃延伸1min，40個循環(huán)，最后72℃延伸7min。聚類圖結果表明，品種間的遺傳距離變異范圍為0.12～0.88，在遺傳距離為0.37時，8個引物可將12個品種分為四大類，來自日本的2個品種與國內品種關系較遠。

甜葉菊，隨機擴增多態(tài)性DNA，優(yōu)化，親緣關系

甜葉菊（Stevia rebaudiana Bertoni）簡稱甜菊、甜草、甜茶、蜜菊等，為菊科甜葉菊屬多年生草本植物，原產南美巴拉圭一帶，中國于1976年引種成功[1]。甜葉菊富含糖苷類物質，其糖苷具有高甜度（為蔗糖250～450倍）、低熱量（僅為蔗糖的1/300）的特點，在體內不參與代謝、不蓄積、無毒性，被譽為是繼甘蔗、甜菜之后的世界第三大糖源。甜葉菊具有一定的藥理作用，對糖尿病、心臟病和高血壓等有較好的療效，現已廣泛應用于保鍵飲料、低熱量食品和醫(yī)藥行業(yè)中[2]。目前，甜葉菊在國內外的研究仍然處于起步階段，如栽培、離體快繁、糖苷鑒定及優(yōu)良單株篩選、品種選育等方面[2-8]，而日新月異的分子技術在甜葉菊上的研究，如優(yōu)異基因的分子標記、種質資源指紋圖譜構建卻鮮有報道，這給從事甜葉菊研究的各類人員，特別是期望品種得到保護的育種家提出新的課題。……