單增李斯特菌免疫磁珠的制備研究

徐金亭，李志清，向軍儉，唐 勇，楊紅宇

（暨南大學(xué)分子免疫學(xué)與抗體工程研究中心，廣東廣州510632）

單增李斯特菌免疫磁珠的制備研究

徐金亭，李志清，向軍儉*，唐 勇，楊紅宇

（暨南大學(xué)分子免疫學(xué)與抗體工程研究中心，廣東廣州510632）

目的：制備可高效、特異地分離單增李斯特菌的免疫磁珠。探討羧基修飾磁珠與多克隆抗體的不同偶聯(lián)條件和免疫磁珠捕獲單增李斯特菌的能力。方法：以單增李斯特菌作為抗原，免疫新西蘭兔，獲得兔源多克隆抗體，鑒定其與單增李斯特菌體的結(jié)合能力；選擇6種不同的偶聯(lián)緩沖溶液，設(shè)置了6個主要偶聯(lián)時間和6組偶聯(lián)溫度，通過比較磁珠與抗體偶聯(lián)后上清中剩余的抗體量來確定最佳偶聯(lián)條件。結(jié)果：制備的多克隆抗體效價為1.3×105，該抗體與單增李斯特菌體有較好的結(jié)合，抗體與1mg羧基修飾磁珠在pH6.0的0.01mol/L一水嗎啉乙磺酸緩沖溶液（MES）中，37℃偶聯(lián)2h，偶聯(lián)抗體的量為160μg；制得的免疫磁珠的捕獲率可達(dá)77.0%。結(jié)論：獲得羧基磁珠與抗體偶聯(lián)的最佳條件，該免疫磁珠用于食品中單增李斯特菌的檢測，與常規(guī)的平皿增菌培養(yǎng)顯色法比較，檢測時間至少縮短20h。

免疫磁珠，單增李斯特菌，偶聯(lián)

單增李斯特菌（Listeria monocytogenes，LMO）是一種分布廣泛的食源性致病菌，其幾乎可以污染所有的食物。因此在上世紀(jì)90年代，LMO被世界衛(wèi)生組織列為食品中四大致病菌之一[1]。目前現(xiàn)有針對LM的檢測方法有傳統(tǒng)分離培養(yǎng)與鑒定法，雙抗夾心ELISA法，PCR以及熒光量子點法等[2-4]。上述這些方法都涉及到樣品前處理過程，增菌培養(yǎng)是樣品前處理的重要步驟。……