呋喃西林代謝物多克隆抗體制備及酶聯免疫吸附分析方法

任海濤，沈玉棟，徐振林，楊金易，雷紅濤，肖治理，王 弘，孫遠明

（廣東省食品質量安全重點實驗室，華南農業大學食品學院，廣東廣州510642）

呋喃西林代謝物多克隆抗體制備及酶聯免疫吸附分析方法

任海濤，沈玉棟，徐振林，楊金易，雷紅濤，肖治理，王 弘，孫遠明*

（廣東省食品質量安全重點實驗室，華南農業大學食品學院，廣東廣州510642）

為了建立檢測呋喃西林代謝物（SEM）的酶聯免疫吸附分析方法（ELISA），將所設計合成的系列半抗原與牛血清白蛋白（BSA）偶聯制備免疫原并免疫新西蘭大白兔，篩選獲得源于新穎半抗原H3的具有高親和力、高特異性抗SEM多克隆抗體。同時，基于設計合成的系列同/異源包被抗原，考察了不同結構包被原對ELISA靈敏度的影響，發現H4-OVA作為異源包被原建立SEM的ELISA檢測方法可獲得最佳的檢測效果，結果顯示：ELISA方法的半抑制濃度（IC50）為12.37ng/mL；定量檢測線性范圍（IC20～IC80）為0.439～110.78ng/mL；檢測限（IC10）達0.07ng/mL，達到了國內外相關檢測限量要求，可應用于實際食品樣品檢測。

硝基西林，半抗原設計，多克隆抗體，異源包被，ELISA（酶聯免疫吸附分析）

呋喃西林是一種硝基呋喃類藥物，代謝快速，代謝物為1-氨基脲（SEM）。近些年來廣泛應用于水產類和禽類養殖[1]。但因其代謝物具有三致作用（致癌、致畸性、致突變），對人體健康與生態平衡造成潛在威脅[2]。歐美和我國先后都明文規定動物源性食品中呋喃西林不得檢出[3]。由于呋喃西林在動物體內分解迅速，其原位穩定性只有數小時，因此檢測呋喃西林母體就顯得沒有意義，然而其代謝物與組織蛋白結合可以形成穩定的化合物，故有必要檢測呋喃西林代謝物[4]。……