吸收放散試驗在高效價冷凝集素致ABO血型鑒定不符及交叉配血不合的應用

[摘要] 目的 通過采用吸收放散試驗有效解決高效價冷凝集素導致的ABO血型正反定型不符及交叉配血不合的問題，探討疾病狀態下患者血清中高效價冷凝集素對交叉配血試驗的影響。提出吸收放散試驗是免疫血清學實驗中非常重要的技術手段。方法 ABO血型正反鑒定、自身對照試驗、吸收放散試驗、不規則抗體篩選、交叉配血用直接抗人球蛋白法、聚凝胺法配血。結果 采用吸收放散的方法有效的解決冷凝集素對試驗的干擾， ABO血型正反鑒定相符，自身凝集散開，凝聚胺或抗球蛋白交叉配血，主次側均無凝集。結論 重視高效價冷凝集素對血型鑒定和交叉配血的影響，靈活運用吸收放散法，進行抗體篩查以證實與已知特異性抗體反應的抗原活性物質的存在。區分冷凝集素與特異性抗體在鑒定ABO血和交叉配血中的不同意義，通過應用不同介質：鹽水介質、凝聚胺介質或經典抗球蛋白介質，在不同溫度：室溫、4 ℃、37℃分別進行交叉配血試驗，排除血清中是否有其他不規則抗體；亞型或由于疾病導致的抗原抗體減弱造成凝集使配血不合，通常經37 ℃水浴后冷凝集消失，如經37℃水浴后冷凝集仍然存在，考慮有特異性抗體存在，通常配血不合。

[關鍵詞] 吸收放散試驗；冷凝集素；ABO正反定型；交叉配血

[中圖分類號] R446.6 [文獻標識碼] B [文章編號] 2095-0616（2012）22-118-03

Application of absorption-radiation test in ABO blood group identification discrepancy and clinical cross-matching test out caused by high-titer cold agglutinins.

LI Qing Gulzar LI Zhiqiang

Department of Blood Transfusion，Xinjiang Uygur Autonomous Region Hospital of Traditional Chinese Medicine，Urumqi 830002，China

[Abstract] Objective To clarify the effect of clinical cross-matching test that caused by high-titer cold agglutinins which in patients serum，the absorption radiation test could solve the problem ABO blood group and finalize the design discrepancy and cross matching out which caused by high-titer cold agglutinins effectively.Puts forward absorption and irradiation test was very important technical means in immune serology experiment. Methods ABO blood group identification， self-reflection experiment，absorption and irradiation test，Irregular antibody screening， direct antiglobulin test of Coombs，Polybrene method.Results Using absorption method could solve the interference effectively which caused by cold agglutinin，ABO blood group identification positive conform to negative，self agglutination to disperse， primary and secondary side without agglutination in cross-matching text by Polybrene method or antiglobulin test of Coombs. Conclusion Pay attention to the effect which caused by high-titer cold agglutinins on blood type identification and cross-matching text，use absorption and irradiation method flexible for antibody screening，to confirm the presence of a substance which has antigenic activity act with the known specific antibody. Distinguish the different meaning between cold agglutinin and specific antibodies in the identification of ABO blood and blood cross-matching.Through the application of different media：saline，Polybrene medium or classic antiglobulin medium，on different temperature：room temperature，4℃，37℃ doing blood cross-matching test，to exclude whether there are other irregular antibody in serum. Subtype，or as a result of illness causing agglutination antigen antibody weakened the matching， usually after water bath on 37 ℃ cold agglutination disappeared，if remain，maybe there are specific antibodies caused the text unmatching.

[Key words] Absorption and irradiation test；Cold agglutinin；ABO blood group identification；Blood cross-matching

臨床上某些疾病如：血液系統疾病：再生障礙性貧血、淋巴細胞性白血病、陣發性睡眠性血紅蛋尿；免疫性疾病：自身免疫性溶血性貧血、骨髓瘤、系統性紅斑狼瘡；感染性疾病：支原體肺炎、肺心病、DIC；腫瘤：非霍奇金淋巴瘤、肝癌、肺癌；以及藥物影響等，導致患者血清中冷凝集素增高，在進行血型鑒定和配血過程中干擾實驗結果造成ABO血型正反定型和交叉配合困難。為了保證臨床輸血治療的有效性和安全性，如果遇到因疾病等因素導致的高效價冷凝集素時，必須進行抗體篩查和吸收放散試驗等確定凝集的真實性，并且應與其他假凝集如緡錢狀紅細胞凝聚和真凝集如有特異性的不規則抗體相區別，保證實驗結果的準確性，消除因輸血帶來的安全隱患，保證患者輸血安全，減少醫療事故的發生。本研究將以下15例高效價冷凝集素引起的ABO血型鑒定不符及交叉配血不合的情況進行探討，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2012年1～8月筆者所在醫院住院患者20例，男12例，女8例：其中肺心病、肝癌、自身免疫性溶血性貧血患者各3例；淋巴細胞性白血病、系統性紅斑狼瘡、DIC患者各2例；非霍奇金淋巴瘤、肺癌、陣發性睡眠性血紅蛋尿、再生障礙性貧血及藥物影響患者各1例。

1.2 試劑

單克隆抗血清：抗-A、抗-B；反定型標準紅細胞：A細胞、B細胞、O細胞；不規則抗體篩查：篩選紅細胞；不規則抗體鑒定：譜細胞；抗球蛋白試劑（抗-IgG+C3D、抗-IgG、抗-C3D）由上海血液生物醫藥有限責任公司生產。凝聚胺（Polyberne）試劑盒由珠海貝索生物有限公司生產。生理鹽水由新疆制藥廠生產。

1.3 儀器

離心機購于珠海貝索生物有限公司，水浴箱購于天津市泰斯特儀器有限公司。

1.4 檢測方法

根據全國臨床檢驗規程[1]中有關ABO血型、不規則抗體、交叉配血、吸收、放散試驗的方法進行操作。聚凝胺和抗球蛋白法實驗按試劑盒說明書的方法操作。

1.5 試驗判定

1.5.1 ABO血型 冷凝集素效價在室溫下通常大于1∶4在臨床輸血中有意義[2]。其中檢測的20例患者，最低的冷凝集素抗體效價為32，最高的效價達1 024，致使在標準抗體檢測患者抗原和標準紅細胞檢測患者抗體時均呈現凝集現象。ABO正、反定型不合。

1.5.2 生理鹽水 在室溫交叉配血時主側管凝集為弱凝集；4℃配血時，主側管凝集為強凝集；主側管經37℃，10～15 min水浴后，凝集自行散開，顯微鏡觀察無凝集，交叉配血相合。

1.5.3 吸收試驗 用37 ℃生理鹽水將O型壓積紅細胞1～1.5 mL至少洗滌3次，分別取2份患者血清和1份洗滌后的壓積紅細胞，充分混勻紅細胞和血清，把混合物放置4 ℃吸收1 h，間歇混勻；使其充分吸收，離心混合物，立即分離血清，移除上層抗血清備用；進行交叉配血：其中鹽水介質、聚凝胺、抗球蛋白介質試驗均無凝集，交叉配血相合。吸收后的實驗初步判斷主側管凝集是由于患者血清中含有高效價冷凝集素對交叉配血的影響。

2 結果

2.1 ABO血型血清血檢測

用37℃生理鹽水將患者紅細胞洗滌3～5次，配成3%～5%的紅細胞懸液與標準抗-A、抗-B血清反應定正定型，將被吸收的患者血清與標準紅細胞Ac、Bc、Oc反應定反定型：正反定型相符，可排除亞型。

2.2 交叉配血試驗

在室溫、4 ℃不同溫度下，患者血清分別與ABO同型及O型獻血者的紅細胞進行鹽水交叉配血，室溫時主側管出現弱凝集，4 ℃時主側管出現2+～4+凝集不等；將此實驗結果放置37 ℃水浴10 min后，凝集消失，鹽水配血結果顯示相合；將經吸收后的血清進行聚凝胺、抗球蛋白兩種介質的交叉配血，結果顯示均無凝集，提示患者血清中的冷凝集素吸收完全，交叉配血相合。從而初步判斷由于患者血清中含有冷凝集素所致主側管凝集現象。

2.3 直接抗人球蛋白試驗、不規則抗體篩選與抗體鑒定

為了確定ABO血型不符及交叉配血不合的確是由冷凝集素引起的，還需將患者血清與篩選細胞和譜細胞做不規則抗體篩查和抗體特異性鑒定。與抗人球蛋白試劑（抗-IgG+C3D、抗-IgG、抗-C3D）做直接抗人球蛋白試驗，確定試驗為陰性。以排除紅細胞被致敏了特異性抗體或由補體干擾導致配血不合。

2.4 冷凝集素試驗及效價測定

冷凝集素試驗時必須用37℃鹽水洗滌紅細胞吸收血清中的冷抗體。冷凝集素效價測定用患者血清與標準Oc測定不同溫度下的效價。

3 討論

紅細胞可以特異性的吸附血型抗體，不同抗體有不同的吸附條件，冷凝集素一般為抗紅細胞的Ⅰ類抗原的IgM抗體，通常在4 ℃比在室溫或37 ℃更容易被吸收，健康人的血清中含有極少量或少量的冷凝集素，通常鹽水效價在1∶4以下，冷凝集素≤4 ℃活性最強[4]，能迅速與紅細胞凝聚，當實驗溫度升高至37 ℃時凝聚的紅細胞呈可逆性完全散開，凝聚在紅細胞表面的冷凝集素迅速解離，在特殊介質中不引起非特異性凝集。某些由于病理情況會導致冷凝集素增高[5]。以下疾病出現幾率較高，如嚴重感染，免疫性疾病、血液疾病，病毒感染，某些惡性腫瘤等將出現高效價[6]。20例患者中所患有肺部感染、系統性紅斑狼瘡、DIC、自身免疫性溶血性貧血、淋巴細胞性白血病、EB病毒感染、支原體肺炎、陣發性睡眠性血紅蛋白、非霍奇金淋巴瘤、肝癌、肺癌等疾病以及患者服用了某些藥物導致免疫功能異常等因素是引起高效價冷凝集素致ABO血型鑒定不符及交叉配血不合的原因。

通常冷凝集素是在進行血型鑒定和交叉配血時被發現的，在了解患者疾病情況下，首先要排除特異性不規則抗體存在，然后利用吸收、放散的方法移除患者血清中的冷凝集素，用被紅細胞吸收后的患者血清與標準ABO紅細胞進行反定型鑒定，進一步確定ABO血型正、反的一致性。試驗結果注意與細菌污染造成的紅細胞多凝集相鑒別，通常多凝集的紅細胞其特點沒有血型選擇性，用加溫和洗滌紅細胞的方法均不能消除凝集，而將其細胞分別與標準血清抗A、抗B做吸收放散試驗，根據放散液中放散出的抗體與相應細胞反應判定血型，正反定型相符，并可排除亞型。其次進行不規則抗體篩查與特異性抗體鑒定試驗，進一步可排除患者血清中是否存在其他不規則抗體，如A亞型中抗-A，B亞型中有抗-B，其他較為常見的抗體如：抗-M、抗-N、抗-P、抗-Le等。血型抗體與疾病密切相關，輸血前的不規則抗體篩查國外開展較早[7]，由于其重要性，近年來國內較大的醫院開始重視并相繼開展了此項檢查。規范輸血前的抗體篩查，建立健全血型抗原、抗體的血清學檢測標準規程在臨床安全、有效的輸血治療中具有重要的實用價值。

通過以上20例臨床病例的血型、血清學分析，筆者認為，高效價冷凝集素在室溫所致同型鹽水配血不合（包括疾病所致的抗原抗體減弱）與亞型同型鹽水配血不合，多數結果呈現為單一的主側管凝集，與ABO血型及其亞型和Rh血型所致凝集具有本質上的區別，高效價冷凝集素所致同型配血不合多為弱凝集，一般經37℃水浴后凝集消散，但特別注意與亞型及其他不規則抗體引起的凝集相鑒別必須作出準確的判斷，通過相關實驗證明交叉配血最終是相合的。亞型同型配血不合通常結果也為弱凝集，但37 ℃水浴后凝集不消散，顯示交叉配血不相合，必須找到與之匹配相合的血源方可輸血。如在寒冷的冬季或實驗室溫度較低時出現的ABO血型鑒定正反定型不符和交叉配血不相合時，首先應考慮是否含有高效價的冷凝集，并通過上述試驗予以證實，如含有高效價的冷凝集素，根據情況應將患者血清、紅細胞經特殊處理，4 ℃，1～24 h吸收后，再進行凝聚胺或抗球蛋白交叉配血，如果有條件可選擇全自動微柱凝膠法做交叉實驗，因為微柱凝集是在37 ℃條件下進行的，此方法具有高度的特異性且可以排除人為操作的誤差，消除冷凝集素的影響，結果判斷直接客觀，準確可靠，從而避免漏檢，同時提示工作人員注意實驗室環境溫度，在適宜的條件下按照標準操作規程進行實驗操作。對于含有高效價冷凝集素的受血者，在低溫輸注供血者血液時，可使紅細胞發生自身凝集，最好盡量避免輸血，對患者情況特殊必須輸血時，必須將輸血帶來的風險告知醫護人員并由有醫護人員告知患者或其監護人，并得到知情同意方可輸血，為了防止輸入的冷抗體被激活而發生血液凝集及溶血，醫護人員可將血液適當加溫或使用血液加溫儀緩慢輸注，應注意因溫度過高使紅細胞被破壞和污染現象。輸血過程中應密切注意觀察患者情況，以確保患者的安全。

[參考文獻]

[1] 中華人民共和國衛生部醫政司.全國臨床檢驗規程[M].第3版.南京：東南大學出版社，2006：246-264.

[2] 林國連，詹奕榮，劉紅杏，等.冷凝集素對血型鑒定和交叉配血的影響相關研究分析[J].河北醫學，2010，3（3）：16.

[3] 劉達莊.免疫血液學[M].上海：上海科學技術出版社，2002：219.

[4] 蘭炯采.冷凝集素綜合癥三例報告[J].中國輸血雜志，1993，6（2）：99.

[5] 曾小玲，付艷霞.冷凝集造成配血不合1例[J].臨床血液學雜志，2007，1（4）：45.

[6] 伍夢佐，程源，徐巖.系統性紅斑狼瘡伴抗磷脂綜盒征和冷凝集現象1例[J].中國實用內科雜志，2007（1）：1217-1218.

[7] Hoeltge GA，Domen RE，Rybiekil A，et al.Multiple red cell transuions and allommunization experience with 6996 antibodies detected in total of 159 262 patients from 1985 to 1993[J].Arch pathol Lab Med，1995，119（1）：42-45.

（收稿日期：2012-10-22）