Tiam1和MMP-14在宮頸癌中表達的臨床意義

[摘要] 目的 檢測Tiam1和MMP-14在宮頸鱗癌、宮頸上皮內瘤變和正常宮頸中的表達，了解其在宮頸鱗癌的發生發展以及浸潤轉移方面的作用。 方法 收集某院病理科2010年6月～2012年6月手術切除宮頸鱗癌標本100例，宮頸上皮內瘤變30例，正常宮頸10例。采用免疫組化二步法檢測兩者在宮頸組織中的表達情況。采用SPSS18.0軟件包進行統計分析。 結果 Tiam1在宮頸鱗癌中的表達高于CIN和正常宮頸（P ＜ 0.01）；Tiam1的表達與分化程度、深肌層浸潤和淋巴結轉移有關（P ＜ 0.05）；MMP-14在宮頸鱗癌的表達高于CIN和正常組織，且在CIN的表達亦高于正常組織（P ＜ 0.05）；MMP-14的表達與深肌層浸潤和淋巴結轉移有關（P ＜ 0.05）；兩者在宮頸鱗癌的表達強度呈正相關。 結論 Tiam1與MMP-14可能都參與了宮頸鱗癌的惡性發展過程，且與宮頸癌的深肌層浸潤、淋巴結轉移密切相關。兩蛋白可能在宮頸鱗癌的發生發展過程中具有協同作用，表達陽性的癌細胞可能具有更強的浸潤轉移的潛能。

[關鍵詞] Tiam1；MMP-14；宮頸鱗癌；免疫組化

[中圖分類號] R737.33 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2012）28-0056-03

T淋巴瘤侵襲轉移誘導因子1（T lymphoma invasion and metastasis factor 1，Tiam1）屬于原癌基因，具有影響細胞形體極化、調節細胞骨架重組、促進細胞運動和遷移、參與基因表達調控等多種生物學功能[1]。膜型Ⅰ型金屬蛋白酶（memberane type Ⅰmatric metalloproteinase MT1-MMP/MMP-14）是基質金屬蛋白酶家族的一個亞族，屬于一種跨膜蛋白水解酶，能降解細胞外基質、基底膜、細胞因子、生長因子受體以及生長因子連接蛋白等而在腫瘤細胞的浸潤、轉移中發揮重要作用[2]。本文通過檢測Tiam1與MMP-14在宮頸癌的表達，旨在探討其表達與宮頸癌之間的關系，并分析其可能的分子機制。

1 對象與方法

1.1 研究對象

收集某醫院病理科2010年6月～2012年6月由手術切除并經病理學證實為宮頸鱗癌的石蠟標本100例，全部病例術前均未做放、化療等治療，年齡27～68歲，中位年齡45歲。收集宮頸上皮內瘤變（CIN）30例，同時取因婦科良性病變而行子宮全切的正常宮頸10例作為對照。所有標本均經4%甲醛固定后常規石蠟包埋，5 μm切片后HE染色，并由資深病理醫師重新進行光鏡下確診。

1.2 主要試劑

兔抗人Tiam1多克隆抗體購自美國Santa Cruz公司，鼠抗人MMP-14單克隆抗體、PV-6000試劑盒和二氨基聯苯胺（DAB）顯色劑購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3 免疫組化染色及評分

采用二步法進行免疫組化染色，嚴格按照試劑盒說明書進行操作，DAB顯色后行蘇木素復染。用PBS代替一抗作為陰性對照。顯色判斷：Tiam1和MMP-14于腫瘤細胞胞漿呈棕黃色顆粒著色，在高倍視野下（×400）進行顯色評分。首先根據著色細胞百分率計分：細胞質無染色為0分，≤25%為1分，26%~50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分；同時根據染色強度計分：淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分（染色深淺需與背景著色相對比）[3]。每個病例觀察10個高倍視野，每項得分各取其平均值，最后總得分為兩項相加的和：陰性（－）：＜2分；陽性：2～7分；低表達（+）：2分；中等表達（++）：3~4分；高表達（+++）：5～7分。

1.4 統計學分析

所有數據采用SPSS18.0統計軟件進行分析，P ＜ 0.05認為有差異統計學意義。Tiam1和MMP-14的表達以及與宮頸鱗癌臨床病理學參數之間的關系采用χ2檢驗分析，兩蛋白的關聯密切程度用Spearman秩相關分析。

2 結果

2.1 Tiam1和MMP-14在宮頸各組織類型中的表達

Tiam1在宮頸鱗癌中表達86例（86％），CIN中表達15例（50％），正常宮頸組織中表達2例（20％）。其在宮頸鱗癌的表達與CIN中的表達相比較差異具有統計學意義（P = 0.000）；宮頸鱗癌的表達與正常宮頸組織的比較差異具有統計學意義（P = 0.000）；在CIN中的表達與在正常組織的表達差異無統計學意義（P = 0.097）。

MMP-14在宮頸鱗癌中表達78例（78％），CIN中表達14例（46.7％），正常宮頸組織中表達1例（10％）。其在宮頸鱗癌的表達與CIN中的表達相比較差異具有統計學意義（P = 0.001）；宮頸鱗癌的表達與正常宮頸組織的比較差異具有統計學意義（P = 0.000）；在CIN中的表達與在正常組織的表達差異具有統計學意義（P = 0.038）。見表1。

表1 Tiam1與MMP-14在宮頸各組織類型的表達[n（%）]

2.2 Tiam1在宮頸鱗癌中的表達與臨床病理參數的關系

Tiam1的表達與組織分化程度、深肌層浸潤以及淋巴結轉移比較，差異具有統計學意義（P ＜ 0.05）；與年齡和腫瘤大小無關（P ＞ 0.05）。見表2。

2.3 MMP-14在宮頸鱗癌中的表達與臨床病理參數的關系

MMP-14的表達與深肌層浸潤和淋巴結轉移比較，差異具有統計學意義（P ＜ 0.05）；與年齡、組織分化程度和腫瘤大小無關（P ＞ 0.05）。見表3。

2.4 Tiam1、MMP-14在宮頸鱗癌中的相關性

宮頸癌組織中，Tiam1與MMP-14兩者表達強度經Spearman秩相關分析得出，兩者在宮頸癌中表達強度呈正相關（r = 0.335，P = 0.000）。

3 討論

本實驗結果顯示，Tiam1在宮頸鱗癌中的表達率高于CIN且高于正常宮頸組織，差異均具有統計學意義（P ＜ 0.01），提示Tiam1可能參與宮頸鱗癌的惡性轉化過程。同時觀察到，Tiam1的表達與組織分化程度、深肌層浸潤以及淋巴結轉移有關（P ＜ 0.05），這提示我們，組織分化程度越低，Tiam1的表達率越高；有深肌層浸潤組、淋巴結轉移組的Tiam1表達率高于無深肌層浸潤和無淋巴結轉移組的表達率。Tiam1的表達與年齡和腫瘤大小無關（P ＞ 0.05）。該研究結果說明，Tiam1表達陽性的宮頸癌細胞可能具有更強的侵襲轉移能力。與之相似，有研究表明，Tiam1在鼻咽癌、胃癌、肝癌、前列腺癌等多種惡性腫瘤中呈陽性表達，且其陽性表達與組織的分化程度、侵襲轉移等密切相關[4-7]。

本研究亦觀察到，MMP-14在宮頸鱗癌的表達高于CIN和正常組織，且在CIN的表達亦高于正常組織，差異均具有統計學意義（P ＜ 0.05）。MMP-14的表達與深肌層浸潤和淋巴結轉移有關（P ＜ 0.05）提示，其在有深肌層浸潤、淋巴結轉移組的表達率高于無深肌層浸潤、無淋巴結轉移組的表達率。MMP-14的表達與年齡、組織分化程度和腫瘤大小無關（P ＞ 0.05）。有國外學者對MMPs在頭頸鱗癌淋巴轉移的作用的研究進行Meta分析，結果顯示MMP-14可能對頭頸鱗癌轉移的生物學行為有重要意義[8]。既往研究表明，在對MMP-14在口腔鱗癌的研究中發現：其表達與淋巴結轉移有關[9]。本實驗研究結果提示，MMP-14可能參與了宮頸鱗癌的惡性轉化過程，MMP-14陽性的宮頸癌細胞可能具有更強的侵襲轉移潛能。

本研究結果顯示，在宮頸癌組織中，Tiam1與MMP-14兩者表達強度經Spearman秩相關分析得出，兩者在宮頸癌中表達強度呈正相關，說明Tiam1與MMP-14兩蛋白可能在宮頸鱗癌的發生發展過程中具有協同作用，但其詳細作用的分子機制還需進一步研究。

本研究得出以下結論，Tiam1與MMP-14可能都參與宮頸鱗癌的惡性發展過程，且與宮頸癌的深肌層浸潤、淋巴結轉移密切相關。兩蛋白可能在宮頸鱗癌的發生發展過程中具有協同作用，表達陽性的癌細胞可能具有更強的浸潤轉移的潛能。因此認為，聯合檢測Tiam1與MMP-14兩蛋白對臨床診斷和治療宮頸鱗癌具有一定的參考價值。

[參考文獻]

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（收稿日期：2012-06-08）