Tiam1和MMP-14在宮頸癌中表達(dá)的臨床意義

[摘要] 目的 檢測Tiam1和MMP-14在宮頸鱗癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變和正常宮頸中的表達(dá)，了解其在宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展以及浸潤轉(zhuǎn)移方面的作用。 方法 收集某院病理科2010年6月～2012年6月手術(shù)切除宮頸鱗癌標(biāo)本100例，宮頸上皮內(nèi)瘤變30例，正常宮頸10例。采用免疫組化二步法檢測兩者在宮頸組織中的表達(dá)情況。采用SPSS18.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果 Tiam1在宮頸鱗癌中的表達(dá)高于CIN和正常宮頸（P ＜ 0.01）；Tiam1的表達(dá)與分化程度、深肌層浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P ＜ 0.05）；MMP-14在宮頸鱗癌的表達(dá)高于CIN和正常組織，且在CIN的表達(dá)亦高于正常組織（P ＜ 0.05）；MMP-14的表達(dá)與深肌層浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P ＜ 0.05）；兩者在宮頸鱗癌的表達(dá)強(qiáng)度呈正相關(guān)。 結(jié)論 Tiam1與MMP-14可能都參與了宮頸鱗癌的惡性發(fā)展過程，且與宮頸癌的深肌層浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。兩蛋白可能在宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展過程中具有協(xié)同作用，表達(dá)陽性的癌細(xì)胞可能具有更強(qiáng)的浸潤轉(zhuǎn)移的潛能。

[關(guān)鍵詞] Tiam1；MMP-14；宮頸鱗癌；免疫組化

[中圖分類號] R737.33 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2012）28-0056-03

T淋巴瘤侵襲轉(zhuǎn)移誘導(dǎo)因子1（T lymphoma invasion and metastasis factor 1，Tiam1）屬于原癌基因，具有影響細(xì)胞形體極化、調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架重組、促進(jìn)細(xì)胞運(yùn)動和遷移、參與基因表達(dá)調(diào)控等多種生物學(xué)功能[1]。膜型Ⅰ型金屬蛋白酶（memberane type Ⅰmatric metalloproteinase MT1-MMP/MMP-14）是基質(zhì)金屬蛋白酶家族的一個亞族，屬于一種跨膜蛋白水解酶，能降解細(xì)胞外基質(zhì)、基底膜、細(xì)胞因子、生長因子受體以及生長因子連接蛋白等而在腫瘤細(xì)胞的浸潤、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用[2]。本文通過檢測Tiam1與MMP-14在宮頸癌的表達(dá)，旨在探討其表達(dá)與宮頸癌之間的關(guān)系，并分析其可能的分子機(jī)制。

1 對象與方法

1.1 研究對象

收集某醫(yī)院病理科2010年6月～2012年6月由手術(shù)切除并經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為宮頸鱗癌的石蠟標(biāo)本100例，全部病例術(shù)前均未做放、化療等治療，年齡27～68歲，中位年齡45歲。收集宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）30例，同時取因婦科良性病變而行子宮全切的正常宮頸10例作為對照。所有標(biāo)本均經(jīng)4%甲醛固定后常規(guī)石蠟包埋，5 μm切片后HE染色，并由資深病理醫(yī)師重新進(jìn)行光鏡下確診。

1.2 主要試劑

兔抗人Tiam1多克隆抗體購自美國Santa Cruz公司，鼠抗人MMP-14單克隆抗體、PV-6000試劑盒和二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色劑購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 免疫組化染色及評分

采用二步法進(jìn)行免疫組化染色，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，DAB顯色后行蘇木素復(fù)染。用PBS代替一抗作為陰性對照。顯色判斷：Tiam1和MMP-14于腫瘤細(xì)胞胞漿呈棕黃色顆粒著色，在高倍視野下（×400）進(jìn)行顯色評分。首先根據(jù)著色細(xì)胞百分率計(jì)分：細(xì)胞質(zhì)無染色為0分，≤25%為1分，26%~50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分；同時根據(jù)染色強(qiáng)度計(jì)分：淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分（染色深淺需與背景著色相對比）[3]。每個病例觀察10個高倍視野，每項(xiàng)得分各取其平均值，最后總得分為兩項(xiàng)相加的和：陰性（－）：＜2分；陽性：2～7分；低表達(dá)（+）：2分；中等表達(dá)（++）：3~4分；高表達(dá)（+++）：5～7分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，P ＜ 0.05認(rèn)為有差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Tiam1和MMP-14的表達(dá)以及與宮頸鱗癌臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系采用χ2檢驗(yàn)分析，兩蛋白的關(guān)聯(lián)密切程度用Spearman秩相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 Tiam1和MMP-14在宮頸各組織類型中的表達(dá)

Tiam1在宮頸鱗癌中表達(dá)86例（86％），CIN中表達(dá)15例（50％），正常宮頸組織中表達(dá)2例（20％）。其在宮頸鱗癌的表達(dá)與CIN中的表達(dá)相比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P = 0.000）；宮頸鱗癌的表達(dá)與正常宮頸組織的比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P = 0.000）；在CIN中的表達(dá)與在正常組織的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P = 0.097）。

MMP-14在宮頸鱗癌中表達(dá)78例（78％），CIN中表達(dá)14例（46.7％），正常宮頸組織中表達(dá)1例（10％）。其在宮頸鱗癌的表達(dá)與CIN中的表達(dá)相比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P = 0.001）；宮頸鱗癌的表達(dá)與正常宮頸組織的比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P = 0.000）；在CIN中的表達(dá)與在正常組織的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P = 0.038）。見表1。

表1 Tiam1與MMP-14在宮頸各組織類型的表達(dá)[n（%）]

2.2 Tiam1在宮頸鱗癌中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

Tiam1的表達(dá)與組織分化程度、深肌層浸潤以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05）；與年齡和腫瘤大小無關(guān)（P ＞ 0.05）。見表2。

2.3 MMP-14在宮頸鱗癌中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

MMP-14的表達(dá)與深肌層浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05）；與年齡、組織分化程度和腫瘤大小無關(guān)（P ＞ 0.05）。見表3。

2.4 Tiam1、MMP-14在宮頸鱗癌中的相關(guān)性

宮頸癌組織中，Tiam1與MMP-14兩者表達(dá)強(qiáng)度經(jīng)Spearman秩相關(guān)分析得出，兩者在宮頸癌中表達(dá)強(qiáng)度呈正相關(guān)（r = 0.335，P = 0.000）。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Tiam1在宮頸鱗癌中的表達(dá)率高于CIN且高于正常宮頸組織，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.01），提示Tiam1可能參與宮頸鱗癌的惡性轉(zhuǎn)化過程。同時觀察到，Tiam1的表達(dá)與組織分化程度、深肌層浸潤以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P ＜ 0.05），這提示我們，組織分化程度越低，Tiam1的表達(dá)率越高；有深肌層浸潤組、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的Tiam1表達(dá)率高于無深肌層浸潤和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)率。Tiam1的表達(dá)與年齡和腫瘤大小無關(guān)（P ＞ 0.05）。該研究結(jié)果說明，Tiam1表達(dá)陽性的宮頸癌細(xì)胞可能具有更強(qiáng)的侵襲轉(zhuǎn)移能力。與之相似，有研究表明，Tiam1在鼻咽癌、胃癌、肝癌、前列腺癌等多種惡性腫瘤中呈陽性表達(dá)，且其陽性表達(dá)與組織的分化程度、侵襲轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)[4-7]。

本研究亦觀察到，MMP-14在宮頸鱗癌的表達(dá)高于CIN和正常組織，且在CIN的表達(dá)亦高于正常組織，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05）。MMP-14的表達(dá)與深肌層浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P ＜ 0.05）提示，其在有深肌層浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)率高于無深肌層浸潤、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)率。MMP-14的表達(dá)與年齡、組織分化程度和腫瘤大小無關(guān)（P ＞ 0.05）。有國外學(xué)者對MMPs在頭頸鱗癌淋巴轉(zhuǎn)移的作用的研究進(jìn)行Meta分析，結(jié)果顯示MMP-14可能對頭頸鱗癌轉(zhuǎn)移的生物學(xué)行為有重要意義[8]。既往研究表明，在對MMP-14在口腔鱗癌的研究中發(fā)現(xiàn)：其表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)[9]。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果提示，MMP-14可能參與了宮頸鱗癌的惡性轉(zhuǎn)化過程，MMP-14陽性的宮頸癌細(xì)胞可能具有更強(qiáng)的侵襲轉(zhuǎn)移潛能。

本研究結(jié)果顯示，在宮頸癌組織中，Tiam1與MMP-14兩者表達(dá)強(qiáng)度經(jīng)Spearman秩相關(guān)分析得出，兩者在宮頸癌中表達(dá)強(qiáng)度呈正相關(guān)，說明Tiam1與MMP-14兩蛋白可能在宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展過程中具有協(xié)同作用，但其詳細(xì)作用的分子機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

本研究得出以下結(jié)論，Tiam1與MMP-14可能都參與宮頸鱗癌的惡性發(fā)展過程，且與宮頸癌的深肌層浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。兩蛋白可能在宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展過程中具有協(xié)同作用，表達(dá)陽性的癌細(xì)胞可能具有更強(qiáng)的浸潤轉(zhuǎn)移的潛能。因此認(rèn)為，聯(lián)合檢測Tiam1與MMP-14兩蛋白對臨床診斷和治療宮頸鱗癌具有一定的參考價值。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Habets GG. Identification of an invasion-inducing gene，Tiam-1，that encodes a protein with homology to GDP-GTP exchangers for Rho-like proteins[J]. Cell，1994，77（4）：537-549.

[2] Egeblad M，Werb Z. New functions for the matrix metalloproteinases in cancer progression[J]. Nat Rev Cancer，2002，2（3）：161-174.

[3] Putti TC，To KF，Hsu HC，et al． Expression of epidermal growth factor receptor in head andneck cancers correlates with clinical progression： a multicentre immunohistochemical study in the Asia-Pacific region[J]. Histopathology，2002，41（2）：144-151.

[4] Woodcock SA. A modified tandem affinity purification technique identifies that 14-3-3 proteins interact with Tiam1，an interaction which controls Tiam1 stability[J]. Journal of proteome research，2009，8（12）：5629-5641.

[5] Qi Y. Prognostic value of Tiam1 and Rac1 overexpression in nasopharyngeal carcinoma[J]. ORL J Otorhinolaryngol Relat Spec，2009，71（3）：163-171.

[6] Walch A. Combined analysis of Rac1，IQGAP1，Tiam1 and E-cadherin expression in gastric cancer[J]. Mod Pathol，2008，21（5）：544-552.

[7] Engers R. Prognostic relevance of Tiam1 protein expression in prostate carcinomas[J]. Br J Cancer，2006，95（8）：1081-1086.

[8] Shimada T. Enhanced production and activation of progelatinase A mediated by membrane-type 1 matrix metalloproteinase in human oral squamous cell carcinomas：implications for lymph node metastasis[J]. Clinical experimental metastasis，2000，18（2）：179-188.

[9] Zhai Y. Expression of membrane type 1 matrix metalloproteinase is associated with cervical carcinoma progression and invasion[J]. Cancer Res，2005，65（15）：6543-6550.

（收稿日期：2012-06-08）