瘦素與端粒酶對(duì)良惡性胸腔積液的診斷價(jià)值

[摘要] 目的 探討胸腔積液瘦素濃度、端粒酶活性對(duì)良惡性胸腔積液的診斷價(jià)值。 方法 檢測(cè)29例惡性胸腔積液患者胸液中的瘦素濃度和端粒酶活性，以28例良性胸腔積液作對(duì)照。 結(jié)果 惡性胸腔積液中的瘦素濃度較良性者增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；瘦素的敏感性82.76%， 特異性92.86%，準(zhǔn)確率87.72%；端粒酶的敏感性89.66%，特異性82.14%，準(zhǔn)確率85.96%。結(jié)論 瘦素與端粒酶對(duì)惡性胸腔積液的診斷與鑒別診斷有一定的臨床價(jià)值，聯(lián)合檢測(cè)瘦素與端粒酶對(duì)惡性胸腔積液診斷具有較高的診斷價(jià)值。

[關(guān)鍵詞] 胸腔積液；瘦素；端粒酶

[中圖分類(lèi)號(hào)] R730.4；R521.7 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2012）28-0135-02

胸腔積液是由多種疾病引起的常見(jiàn)癥狀，準(zhǔn)確判斷胸腔積液的性質(zhì)對(duì)于治療方案的擬定有重要臨床意義。細(xì)胞學(xué)檢查是判斷胸腔積液性質(zhì)的金標(biāo)準(zhǔn)，但其陽(yáng)性率較低[1]。因此良、惡性胸腔積液的鑒別診斷在臨床上十分困難，尋找血液和胸腔積液中高敏感性、高特異性的腫瘤標(biāo)志物是目前研究的熱點(diǎn)。我們對(duì)57例胸腔積液患者胸液中的瘦素（leptin）濃度和端粒酶（telomerase）活性進(jìn)行檢測(cè)分析，探討瘦素和端粒酶對(duì)胸腔積液性質(zhì)的診斷價(jià)值。現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1 一般資料

選擇我院呼吸內(nèi)科2009年1月～2011年12月間住院的胸腔積液患者57例，其中惡性胸腔積液29例，經(jīng)胸水脫落細(xì)胞檢查證實(shí)，男17例，女12例，平均年齡（69.15±5.82）歲，其中肺癌21例，胃癌胸膜轉(zhuǎn)移1例，乳腺癌胸膜轉(zhuǎn)移1例，宮頸癌術(shù)后胸腔轉(zhuǎn)移1例，食管癌胸腔轉(zhuǎn)移1例，不明原因胸腔轉(zhuǎn)移癌4例。選擇28例同期住院的良性胸腔積液患者作為對(duì)照組，男17例，女11例，平均年齡（67±6.33）歲，經(jīng)臨床、細(xì)胞學(xué)檢查等排除惡性腫瘤的可能。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

于超聲定位下胸腔穿刺收集胸液50 mL，30 min內(nèi)4℃下1 500 rpm離心10 min，棄上清液，用冷PBS液洗滌2次后染色，血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)，將2×105沉渣細(xì)胞置入1.5 mL的Epppendorf管中，-70℃保存。冷凍標(biāo)本測(cè)定前室溫下復(fù)融，按照DNA提取試劑盒說(shuō)明采用酚-氯仿法提取胸水沉渣細(xì)胞中DNA。采用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)-酶聯(lián)免疫法（RTPCR-ELISA）測(cè)胸腔積液端粒酶的活性，以吸光度（OD值）表示，超過(guò)陰性對(duì)照孔吸光度的2倍以上為端粒酶陽(yáng)性，反之為陰性。胸液瘦素濃度的檢測(cè)采用雙抗體夾心ELISA法，由上海泰思特臨床檢驗(yàn)所提供技術(shù)支持。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用t 檢驗(yàn)，以（x±s）表示；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)， P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用受試者工作特性曲線（ROC）判定胸液瘦素的診斷效能，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 胸腔積液中瘦素濃度與端粒酶活性

惡性胸腔積液組胸液瘦素濃度（42.32±12.45）ng/L，顯著高于良性胸腔積液組（16.12±9.85）ng/L，兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。惡性胸腔積液組胸液端粒酶活性（OD值）為（0.86± 0.26），良性胸腔積液組胸液端粒酶活性為（0.08±0.06），兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），見(jiàn)表1。惡性胸腔積液組29例中有23例檢測(cè)出端粒酶基因表達(dá)，28例良性胸腔積液中有3例有端粒酶基因表達(dá)，惡性胸腔積液中端粒酶基因的表達(dá)高于良性胸腔積液組，兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=39.6，P< 0.01 ）。

表1 胸腔積液中瘦素濃度與端粒酶活性比較（x±s）

注：*與良性胸腔積液組比較，P < 0.05

2.2 ROC曲線對(duì)胸液瘦素診斷價(jià)值的判斷

ROC曲線下面積（AUC）為0.834，面積的標(biāo)準(zhǔn)誤為0.052，綜合考慮敏感性、特異性時(shí)最佳臨界值選為26.5 ng/L，敏感性0.81、特異性0.76（圖1）。

圖1 ROC曲線對(duì)胸液瘦素診斷價(jià)值的判斷

2.3 兩種腫瘤標(biāo)志聯(lián)合檢測(cè)的診斷效能

聯(lián)合檢測(cè)胸液中的端粒酶活性和瘦素濃度，如果以其中1項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性作為對(duì)惡性胸腔積液的診斷依據(jù)（平行試驗(yàn)），則敏感性為96.55%、特異性為75.00%，敏感性提高，但特異性降低；若以2項(xiàng)指標(biāo)均陽(yáng)性作為對(duì)惡性胸腔積液的診斷依據(jù)（串行試驗(yàn)），敏感性為75.86%、特異性為96.43 %，敏感性降低，特異性提高。見(jiàn)表2。

表2 胸腔積液端粒酶和瘦素診斷效能的評(píng)價(jià)（%）

3 討論

胸腔積液是臨床常見(jiàn)的癥狀，多種疾病可導(dǎo)致胸腔積液的發(fā)生，包括惡性腫瘤、結(jié)核、肝硬化及充血性心力衰竭等。準(zhǔn)確判斷胸腔積液的性質(zhì)對(duì)于選擇合適的治療方式、判斷原發(fā)疾病的嚴(yán)重性和預(yù)后具有重要的臨床價(jià)值。脫落細(xì)胞學(xué)檢查作為確診惡性胸腔積液的金標(biāo)準(zhǔn)，但其陽(yáng)性率僅為30%，即使反復(fù)送檢其陽(yáng)性率也僅提高到50%，敏感性較低，容易漏診。因此，本文探索聯(lián)合胸腔積液中瘦素濃度、端粒酶活性檢測(cè)對(duì)惡性胸腔積液的診斷與鑒別診斷價(jià)值。

目前認(rèn)為端粒酶是一種最為廣譜的腫瘤標(biāo)記物，大約腫瘤細(xì)胞80%～90%表達(dá)端粒酶活性[2]。端粒酶是一種RNA依賴(lài)的DNA多聚酶，端粒酶以自身的RNA 為模板，合成位于染色體末端的一段富含5′-TTAGGG-3′的特異性DNA序列（端粒），以補(bǔ)償細(xì)胞分裂過(guò)程中端粒的丟失，使細(xì)胞得以無(wú)限分裂。端粒酶的活性與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系。端粒酶在惡性腫瘤的生成和發(fā)展方面具有重要作用，端粒酶活性的表達(dá)與惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移及惡性轉(zhuǎn)化有關(guān)，隨著腫瘤分化程度由高到低，端粒酶陽(yáng)性率呈升高趨勢(shì)[3，4]。當(dāng)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移至胸膜后，胸腔內(nèi)便產(chǎn)生大量癌性胸水，癌性胸水中含有大量由惡性腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的端粒酶。本研究采用RTPCR-ELISA擴(kuò)增胸液中的端粒酶，對(duì)29例惡性胸腔積液患者和28例良性胸腔積液患者進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明，惡性胸腔積液組較良性胸腔積液組的胸液端粒酶活性顯著升高，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。胸液端粒酶的診斷效能為敏感性89.66%、特異性82.14%、準(zhǔn)確率85.96%，比文獻(xiàn)報(bào)道胸水脫落細(xì)胞的診斷價(jià)值高。

瘦素（leptin）是主要由脂肪組織產(chǎn)生和分泌的多肽類(lèi)激素，具有調(diào)節(jié)能量代謝的作用。近來(lái)在腫瘤方面的研究表明，瘦素及其功能性受體表達(dá)高低可作為區(qū)分組織良惡性的指標(biāo)。研究發(fā)現(xiàn)，瘦素是一種新的促腫瘤生長(zhǎng)因子[5]，瘦素能刺激腫瘤組織和腫瘤細(xì)胞的分化、增殖[6，7]以及增加腫瘤細(xì)胞的侵襲力[8，9]。本研究結(jié)果表明，惡性胸腔積液組胸液中的leptin水平高于良性組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），說(shuō)明胸液中的leptin對(duì)鑒別良、惡性胸腔積液有一定的臨床意義。通過(guò)ROC曲線對(duì)胸液瘦素診斷價(jià)值的分析發(fā)現(xiàn)，ROC曲線下面積（AUC）為0.834，面積的標(biāo)準(zhǔn)誤為0.052，胸液瘦素濃度用于診斷惡性胸腔積液有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P = 0.006），胸液瘦素濃度越高，胸腔積液惡性的可能性越大；綜合考慮敏感性、特異性時(shí)最佳臨界值選為26.5 ng/L，敏感性0.81、特異性0.76。本研究中，胸液瘦素診斷惡性胸腔積液的敏感性82.72%，特異性92.86%、準(zhǔn)確度87.87%。

本研究結(jié)果還表明，以1項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性作為對(duì)惡性胸腔積液的診斷依據(jù)，敏感性96.55%、特異性75.00%；如以2項(xiàng)指標(biāo)均陽(yáng)性作為對(duì)惡性胸腔積液的診斷依據(jù)，敏感性75.86%、特異性96.43%。本研究中單個(gè)指標(biāo)比較：胸水中的leptin的診斷價(jià)值與端粒活性各有優(yōu)劣；單獨(dú)檢測(cè)胸液的瘦素和端粒酶對(duì)惡性胸液的診斷與鑒別診斷均有一定的診斷價(jià)值，但單項(xiàng)指標(biāo)診斷惡性胸液尚有較大局限性，二者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)惡性胸水的診斷有互補(bǔ)價(jià)值。

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（收稿日期：2012-07-10）