肝纖維化實驗研究進展

[摘要] 肝臟纖維化是由多種原因引起的以肝內(nèi)結(jié)締組織的異常增生為病理過程的慢性肝損害，是慢性肝病發(fā)展到肝硬化的必經(jīng)過程。肝纖維化的進展常為慢性隱匿性的，早期尚有逆轉(zhuǎn)為正常的可能，晚期則為非可逆性的。因此，從實踐診斷的角度找出肝纖維化的標(biāo)志物，幫助臨床早期發(fā)現(xiàn)肝纖維化或肝硬化并及時治療，十分重要。

[關(guān)鍵詞] 慢性肝病；肝纖維化；肝硬化；膠原；實驗診斷

[中圖分類號] R575.1 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 2095-0616（2013）03-

病毒性肝炎是我國最常見的疾病之一，常常因其早期癥狀不明顯而失去治療機會，進而轉(zhuǎn)變成慢性肝炎，近年來慢性酒精性肝病及脂肪肝發(fā)病率不斷增高，以及血吸蟲性肝病，各種不同病因引起的慢性肝臟疾病，如得不到及時有效的診斷治療，都有發(fā)展為肝纖維化的可能[1]。肝纖維化已經(jīng)成為了我國的常見病、多發(fā)病[2]。臨床上，病理檢查采用肝臟穿刺具有局限性，而采用血清學(xué)指標(biāo)來監(jiān)測肝纖維化的發(fā)展變化過程和判斷抗纖維化的療效具有一定的臨床應(yīng)用價值，尤其是幾項理想的肝纖維化血清指標(biāo)和動態(tài)測定聯(lián)合使用能更有助于判斷纖維增生和纖維降解的相對強度[3-4]。本研究主要介紹幾種近年來研究較多的肝纖維化血清學(xué)指標(biāo)。

1 肝纖維化常用的血清學(xué)指標(biāo)。

1.1 膠原或膠原末端多肽

目前，已知人體肝臟中存在Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅷ、Ⅹ、Ⅺ、ⅩⅢ等8種膠原蛋白，其中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型是參與肝纖維化的主要膠原蛋白

1.1.1 血清Ⅰ型膠原及Ⅰ型前膠原羧基端肽 肝臟中Ⅰ型膠原含量較多，肝纖維化和肝硬化晚期時其含量明顯升高，其血清中含量與肝纖維化程度有較高的相關(guān)性，在各種慢性活動性肝病中其含量升高，急性肝炎時其含量不升高，但卻與肝臟炎癥指數(shù)無相關(guān)性。RIA法測定，正常人<197ug/L，血清Ⅰ型膠原在慢性肝炎和酒精性肝病中若高于300ug/L，則具有很高的診斷肝硬化的特異性。

1.1.2 血清Ⅲ型前膠原氨基端肽（procollagen-Ⅲ-peptide，PⅢP） PⅢP是Ⅲ型前膠原分泌到細(xì)胞外后被肽酶切下的N端后形成膠原分子，相互交聯(lián)成微纖維，是研究的最多的肝纖維化血清學(xué)指標(biāo)。PⅢP是反映Ⅲ型膠原代謝情況，即反映纖維化的動態(tài)過程。Ⅰ型膠原主要在肝纖維化和肝硬化晚期升高，而Ⅲ型膠原主要于肝纖維化早期增加，是敏感的肝纖維化化學(xué)指標(biāo)，陽性診斷率為90%，通過觀察證明，血清PⅢP升高早于光鏡下形態(tài)學(xué)觀察到的肝臟纖維增生發(fā)生之前[5]。PⅢP升高只發(fā)生在肝纖維化早期，肝硬化晚期由于Ⅲ型膠原合成率減低，PⅢP減低或正常。另外，PⅢP與肝細(xì)胞炎癥和灶性壞死也有關(guān)，急性肝炎、慢活肝、慢性酒精性肝炎時血PⅢP也升高，此升高是由于炎癥壞死所引起，不反映肝纖維化，隨炎癥壞死的好轉(zhuǎn)，血清PⅢP也下降，如果慢性肝炎PⅢP持續(xù)升高，提示有肝硬化的趨勢。血清PⅢP水平隨年齡增長有較大的變化，兒童至青少年由于發(fā)育期蛋白合成旺盛，血清PⅢP水平高于成年人，肝炎患兒見到血清PⅢP 升高通常無診斷價值。PⅢP升高無器官特異性，但其中以肝纖維化時升高幅度最大。因此，臨床上應(yīng)根據(jù)具體情況解釋測定結(jié)果。參考范圍：均值為100 ng/L，>150 ng/L為異常。

1.1.3 Ⅳ型膠原（collagen type Ⅳ，CIV）及其分解片段（7S片段和NC1片段） CIV是由分子交聯(lián)形成的一種網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，其水平和肝纖維化及門脈高壓程度密切相關(guān)。由于其在合成代謝過程中不需去除端肽而沉積于細(xì)胞外基質(zhì)，故血中CⅣ型膠原的含量升高可反映肝血竇基底膜的更新率加快[6]。肝纖維化早期7S升高早于PⅢP，在肝硬化時NC1增高也比PⅢP更明顯。參考范圍：RIA法血清 CIV NC1片段（5.3±1.3）μg/mL。

1.2 糖蛋白

有研究發(fā)現(xiàn)糖蛋白是肝纖維化的重要標(biāo)志物，目前已報告的有纖維連接素、層黏連蛋白、粗纖維調(diào)節(jié)素等[7]。

1.2.1 層黏連蛋白（laminin，LN） LN主要由肝臟內(nèi)皮細(xì)胞合成，是基底膜的特有成分，與膠原蛋白多糖、糖胺多糖等共同構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)（ECM），血清LN水平與肝纖維化活動程度、門脈壓高低、炎性細(xì)胞浸潤及肝壞死程度有良好的正相關(guān)，可以作為診斷早期肝硬化的指標(biāo)之一[8]。肝硬化時明顯增高，敏感性達98%，特異性91%。參考范圍 RIA法血清LN（370±70）μg/L。

1.2.2 纖維結(jié)合蛋白（fibronectin，F(xiàn)N）及其受體（FN-R） FN分布在血漿和細(xì)胞表面，肝臟FN主要在肝竇壁內(nèi)，是由肝內(nèi)皮細(xì)胞和竇內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生，是構(gòu)成基底膜的成分，早期肝纖維化時FN明顯增高，晚期（特別是有大塊肝壞死肝功能嚴(yán)重受損時）FN明顯降低。有日本學(xué)者觀察到Fn-R在慢性肝炎、酒精性肝病、肝硬化和肝癌時血清Fn-R濃度明顯升高并且與組織學(xué)纖維化程度相一致，因此其被認(rèn)為是較好的肝纖維化血清學(xué)指標(biāo)。參考范圍血漿300～400μg/L（血清為血漿含量的67%）

1.2.3 粗纖維調(diào)節(jié)素（undulin，UN） UN與Ⅳ型膠原一樣屬于反映膠原降解的指標(biāo)，它存在于膠原致密纖維的表面，當(dāng)膠原結(jié)構(gòu)破壞時，UN游離出來而進入血中[9]。在肝纖維化的早期，當(dāng)Ⅲ型前膠原未增高時，已見UN增高，肝硬化時明顯增高，可增高8倍。

1.3 蛋白聚糖

蛋白聚糖又稱糖胺多糖，用于肝纖維化的指標(biāo)主要是透明質(zhì)酸。透明質(zhì)酸（hyaluronic acid，HA）由間質(zhì)細(xì)胞合成，是結(jié)締組織基質(zhì)中的主要成分，是一種大分子量的蛋白聚糖，內(nèi)皮細(xì)胞參與HA的降解。血清HA含量對判斷肝病的嚴(yán)重程度、鑒別有無肝硬化及預(yù)測肝病預(yù)后等有一定意義[10]。HA在肝硬化早期不一定升高，肝硬化晚期血清HA可顯著升高。這種變化與血清PⅢP的變化正相反（肝硬化早期肝臟有活動性肝纖維化，PⅢP升高，晚期為陳舊性肝纖維化，血清PⅢP可不升高）。因此，血清HA與血清PⅢP聯(lián)合檢測，對肝硬化可以起互補作用，能提高肝硬化診斷率，有利于了解肝硬化的進程和分期，從而大大提高臨床診斷的準(zhǔn)確性和可靠性。參考范圍血清HA 2～115μg/L。

1.4 酶學(xué)檢測

1.4.1 單胺氧化酶 （monoaminoxidase，MAO） MAO主要來源于線粒體，是臨床較早用于肝纖維化診斷的項目[11]。MAO活性增高與體內(nèi)結(jié)締組織增生密切相關(guān)。如果肝癌患者MAO增高，表明同時伴有肝硬化。參考范圍比色法（醛偶氮笨酚法） 12～40μ/mL。

1.4.2 脯氨酸羥化酶（prolyl hydroxylase，PH） PH能將膠原肽鏈上的脯氨酸羥化為羥脯氨酸，是膠原纖維合成酶，肝纖維化時膠原纖維合成亢進，此酶活性增加，可超過100μg/L。PH檢測可用于肝病隨訪及預(yù)后判斷，慢性肝炎、肝硬化PH進行性增加，提示肝細(xì)胞壞死和肝纖維化加重，治療后若PH逐漸下降，提示治療有效病情好轉(zhuǎn)。參考范圍 28～51μg/L。

1.4.3 脯氨酸肽酶 （prolidase，PLD） PLD為富含于肝細(xì)胞中的二肽水解酶，急性肝炎、重癥肝炎、慢活肝及肝硬化活動期該酶與ALT均顯著升高，但靜止期的慢性肝炎及肝硬化，ALT正常而PLD顯著升高。因此，PLD是診斷急性肝損害與進展性肝纖維化的良好指標(biāo)。參考范圍 890～1 240 U/L。

1.4.4 金屬蛋白酶組織抑制因子（tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1） TIMP-1是一項反映肝臟細(xì)胞外基質(zhì)降解活性低下的指標(biāo)，慢性酒精性肝病患者血清中TIMP-1水平和肝纖維化程度有較高的相關(guān)性，且在各組慢性肝病之間重疊較少[12]?，F(xiàn)已研制出該指標(biāo)測定的ELISA診斷試劑盒。

2 其他相關(guān)檢測項目

2.1 甘氨膽酸 （glycocholic acid，GCA）

甘氨膽酸參考值<2 500μg/L。急性肝炎、慢活肝、肝硬化及原發(fā)性肝癌患者GCA明顯升高，肝硬化腹水時陽性率達100%，GCA反映肝損傷不僅敏感性高，而且反映其損傷程度，是預(yù)測肝硬化預(yù)后的最好指標(biāo)[13]。

2.2 細(xì)胞角蛋白

細(xì)胞角蛋白參考值8.5～57.3 μg/L。當(dāng)細(xì)胞角蛋白>70μg/L時，其診斷肝纖維化的特異性為86%，敏感性為84%。是反映肝纖維化程度特異性較好的指標(biāo)。

2.3 PGA指數(shù)參考值

PGA指數(shù)參考值0.26～0.96。PGA指數(shù)是凝血酶原時間（PT）：r-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）：載脂蛋白A1（APOA1）的比值數(shù)。PGA指數(shù)隨纖維化程度的發(fā)展而升高，且與肝組織的損傷和肝纖維化活動成正相關(guān)。

2.4 雌二醇（estradiol，E2）

E2參考值0.28～3.67 nmol/L。肝臟病變之后代謝能力下降，致使E2不能正常代謝而增加，因此，測定E2可反映肝臟病變程度及代償情況[14]。

2.5 睪酮（testostenone）

睪酮參考值男性14.5～25.5 nmol/L。是檢測男性患者肝纖維化的一項指標(biāo)[14]。肝纖維化患者雌激素水平升高，雄激素水平降低，其下降程度可反映肝硬變的代償程度。

以上介紹了幾種有關(guān)肝纖維化診斷與預(yù)后療效觀察的血清學(xué)指標(biāo)，目前科研人員已研發(fā)出多種指標(biāo)檢測的診斷試劑盒，隨著醫(yī)學(xué)科學(xué)的發(fā)展越來越多的先進技術(shù)將會被臨床應(yīng)用，相信通過醫(yī)務(wù)工作者的努力和各實驗室的落實，肝纖維化的診斷指標(biāo)會被列入常規(guī)檢測項目，肝纖維化患者會被及早發(fā)現(xiàn)及時得到治療，人們將不再被肝硬化所困擾，人人也都會有一個健康的身體。醫(yī)學(xué)將永遠(yuǎn)造福于人類。

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（收稿日期：2012-？-？）