黃芪及黃芪多糖對隱孢子蟲感染小鼠腸黏膜局部免疫的調節作用

[摘要] 目的 探討黃芪及黃芪多糖對隱孢子蟲感染的免疫抑制小鼠的腸道局部粘膜免疫的調節作用。 方法 用醋酸地賽米松給Balb/c小鼠灌胃8 d，第9天接種1×106個隱孢子蟲卵囊，建立免疫抑制小鼠隱孢子蟲感染模型。再經黃芪水煎劑及黃芪多糖灌胃治療10 d，并設正常對照組、模型對照組和乙酰螺旋霉素對照組。每日計數小鼠糞便中隱孢子蟲卵囊的數量，于實驗第20天，光學顯微鏡觀察腸組織病理學改變，ELISA法測定腸組織勻漿上清IL-2、IL-4、TNF-α、IFN-γ水平及小腸黏液SIgA，流式細胞儀檢測腸黏膜上皮細胞下T細胞亞群。 結果 與模型組比較，黃芪水煎劑組、黃芪多糖組和乙酰螺旋霉素組小鼠卵囊排出數量減少，腸組織病理學改變較輕，免疫學檢測發現CD4+、CD8+淋巴細胞數量、小腸黏液SIgA及腸組織勻漿上清IL-2、IL-4、TNF-α和IFN-γ的水平明顯升高，差異有統計學意義（P<0.05）。結論 黃芪水煎劑及黃芪多糖通過上調腸道黏膜局部免疫功能促進隱孢子蟲感染小鼠恢復。

[關鍵詞] 黃芪；黃芪多糖；隱孢子蟲；黏膜免疫

[中圖分類號] R967 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2013）03-

隱孢子蟲病是一種世界范圍內的人畜共患病，流行遍布90多個國家，是世界最常見的6大腹瀉病因之一[1]。艾滋病患者隱孢子蟲感染率可達48%，是其致死重要因素[2-4]。隱孢子蟲感染和致病已經成為人類健康和公共衛生安全的重大威脅，同時也對畜牧經濟發展產生嚴重危害。隱孢子蟲易致免疫功能低下或缺陷者嚴重感染，提示隱孢子蟲致病與機體免疫力有重要關系。黃芪具有補氣固表、利水退腫、脫毒排膿、生肌等功效，中醫用于治療氣虛乏力，食少便溏等。本項研究采用醋酸地塞米松致免疫低下的隱孢子蟲感染的小鼠模型，探討黃芪水煎劑及黃芪多糖對隱孢子蟲感染的腸道局部免疫反應的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.2 方法

1.2.2 一般狀況觀察 稱量小鼠體重，觀察動物的活動、毛色、攝食等。

1.2.3 糞便中卵囊計數 按照文獻[8，9]敘述方法，每天收集小鼠糞便，以飽和糖水溶液懸浮隱孢子蟲卵囊，孔雀綠染液染色計數每克糞便中卵囊個數。

1.2.4 組織學觀察 取小鼠幽門下十二指腸上段約1 cm的組織塊，置中性福爾馬林固定液中。修塊、石蠟包埋、切片、HE染色、鏡檢、記錄、顯微照像。

1.2.5 腸上皮內淋巴細胞的分離和檢測 取從幽門至回盲部的小腸，用含有5%小牛血清D-Hank’s液沖洗并翻轉，置含有15 mL消化液的離心管中37℃孵育40 min，充分震蕩后，300目尼龍濾網過濾、離心，70%和40%雙層percoll密度梯度離心后，收集70%與40%Percoll之間的細胞，流式細胞儀檢測CD4+、CD8+T細胞數量的變化。

1.2.6 小腸黏液SIgA測定 取靠近回盲部1.5 cm的長段，用載玻片輕刮粘膜表面粘液至小試管中，加入PBS 0.5 mL ，離心后吸取上清，-20°C保存待測。sIgA的檢測采用ELISA法，具體操作按試劑盒說明書進行。

1.3 統計學處理

2 結果

2.1 小鼠一般狀態

模型組小鼠接受地塞米松誘導后，出現體重下降、行動遲緩、體毛疏松、攝食減少，偶有腹瀉。正常對照組小鼠體重稍有增加、活潑好動，其他組小鼠變化不明顯。

2.2 糞便中卵囊排出規律

3 討論

隱孢子蟲屬于機會致病性寄生蟲，通常不引起免疫力正常的個體發生感染，只有當人體免疫力降低時，如患艾滋病時，才具有異常的致病力，導致患者出現明顯的臨床癥狀和體征，甚至危及生命。隱孢子蟲卵囊經口感染后主要寄生在小腸黏膜上皮細胞內，因而，腸黏膜局部免疫在隱孢子蟲感染中意義重大。

目前用于治療隱孢子蟲感染的化學藥物主要有葉酸鹽拮抗劑、磺胺硝苯、甲氧芐氨嘧啶，抗生素主要有氨基糖苷類、大環內酯類。但是都不能從根本上殺死蟲體，并能引起副作用[10]。所以，探索中醫藥對隱孢子蟲感染的治療很有必要。黃芪是扶正固本的傳統中藥材，已經有實驗證實黃芪能增強機體免疫功能的報道。本研究探討的是黃芪及黃芪多糖是否能夠通過調節免疫抑制小鼠腸道局部黏膜免疫而促進隱孢子蟲感染的恢復。

從實驗結果可見，黃芪水煎劑組小鼠健康、活潑，病理觀察腸道黏膜恢復好，說明黃芪確實能促進隱孢子蟲感染的免疫低下小鼠的恢復。進一步檢測發現黃芪水煎劑組小鼠腸道SIgA水平、黏膜下CD4+細胞及腸組織勻漿上清細胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ、TNF-α的水平與模型組相比較，均明顯升高（P<0.05），而黃芪多糖組小鼠與黃芪水煎劑組小鼠相比較差異無統計學意義（P>0.05），提示黃芪多糖是黃芪水煎劑中促進黏膜免疫的主要成分。

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（收稿日期：2012-12-06）