白藜蘆醇對鼻咽癌細胞ATP酶抑制作用研究

[摘要] 目的 檢測30 μmol/L白藜蘆醇對鼻咽癌細胞ATP酶活力及蛋白表達抑制作用。 方法 超微量ATP酶試劑盒檢測白藜蘆醇對鼻咽癌細胞膜的Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶和T-ATP酶活力的變化；Western-blot 檢測白藜蘆醇對鼻咽癌細胞ATP酶蛋白表達差異。 結果 RES能顯著抑制多種鼻咽癌細胞Na+-K+-ATP酶活力（P<0.01） 、Ca2+-Mg2+-ATP酶活力（P<0.01）和T-ATP酶活力（P<0.001），Western-blot 檢測結果顯示白藜蘆醇能濃度依賴性下調ATP的表達（P<0.05）。 結論 白藜蘆醇抑制鼻咽癌細胞株ATP酶活力，顯著下調ATP酶蛋白表達，可能是抑制鼻咽癌細胞株增殖的分子機制之一。

[關鍵詞] 白藜蘆醇；鼻咽癌；ATP酶

[中圖分類號] R739.6 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2013）03-

ATP酶又稱為三磷酸腺苷酶，是各種活細胞內普遍存在的一種高能磷酸化合物。它存在于組織細胞及細胞器的膜上，在物質運送、能量轉換以及信息傳遞方面具有重要的作用。ATP酶包含Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶等。近年來，大量研究表明，與正常細胞相比，腫瘤細胞內的ATP酶活性顯著升高，ATP酶在腫瘤細胞的增殖、代謝、遷移和凋亡中起重要作用[1-5]。另有研究報道，ATP酶在腫瘤細胞耐藥中起關鍵作用，它與耐藥蛋白ABCB1、ABCB5、ABCC1和ABCG2等表達有關[6-7]。白藜蘆醇（Resveratrol，RES）是多酚類化合物，主要來源于蓼科植物虎杖的根莖提取物。它是廣泛存在于自然界中的一種天然抗氧化物，具有抗動脈粥樣硬化、延緩衰老和抗腫瘤等作用[8-10]。筆者前期試驗結果發現30 μmol/L白藜蘆醇能選擇性抑制鼻咽癌細胞生長，而對正常細胞無明顯抑制生長作用。本研究采用30 μmol/L白藜蘆醇處理鼻咽癌細胞株，檢測對其ATP酶活力變化，從而探討白藜蘆醇抗鼻咽癌的機制。

1 材料與方法

1.1 試劑和材料

RES購置Sigma公司，新生牛血清購自杭州四季青公司，RPMI 1640培養基購自GIBCO公司。鼻咽癌細胞株CNE-1、CNE-2、5-8F、Sune-1、6-10B由南方醫科大學腫瘤研究所提供。超微量ATP酶測試盒購自南京建成生物工程研究所。小鼠抗人ATP單克隆抗體購自Cell Signaling公司，鼠抗人β-actin單克隆抗體購自武漢博士德公司，山羊抗小鼠二抗IgG（H+L）/TRITC購自invitrogen公司。其它試劑分別為進口分析純。

1.2 細胞培養和藥物的配制

鼻咽癌細胞（含CNE-1、CNE-2、Sune-1、5-8F、6-10B）由南方醫科大學腫瘤所饋贈，培養于含有10%FBS胎牛血清的1640培養基中，置于37℃，5%二氧化碳培養箱培養。電子天平稱取RES粉末22.8 mg加入1 mL DMSO，配制成100 mmol/L的母液凍存于-20℃冰箱，用前以含10% FBS的1640培養基稀釋成不同濃度的工作液。

1.3 超微量ATP酶試劑盒檢測白藜蘆醇對鼻咽癌細胞ATP酶活力影響

1.4 Western-Blot檢測鼻咽癌細胞蛋白的水平

1.5 統計學處理

2 結果

2.1 白藜蘆醇對鼻咽癌細胞CNE-1，CNE-2 Na++K+-ATP酶活力的影響

2.4 Western blot檢測蛋白表達水平

3 討論

鼻咽癌是指發生于鼻炎腔頂部和側壁的惡性腫瘤，是我國南方高發惡性腫瘤之一，發病率為耳鼻咽喉惡性腫瘤之首[11-12]。由于腫瘤原發部位隱蔽，惡性程度高，易呈侵潤性生長及早期轉移，使得鼻咽癌的檢測與治療是非常困難的。白藜蘆醇是一種天然存在的植物抗毒素，其抗腫瘤作用已被明確，但作用機制尚未清楚[13]。ATP酶是腫瘤組織異常增生的物質基礎之一，其中Na+-K+-ATP酶與細胞凋亡[14]、上皮間質轉化[15]、腫瘤的增殖及遷移等[16]相關。有研究發現，在非小細胞肺癌中減少ATP酶α1亞基表達，其增殖和遷移能力明顯被抑制[1]；Lefranc F等[2]發現ATP酶α1亞基在部分膠質母細胞瘤中與正常腦組織細胞相比表達是上調的，通過強心甾類物質可以顯著降低膠質瘤細胞中的ATP含量，導致膠質瘤細胞凋亡；在轉移性黑素瘤中，Mathieu V等[4]發現ATP酶α亞基表達水平比非轉移性黑素瘤高；另外Chen JQ等[17]研究表明，抑制Na+-K+-ATP酶活力可作為一種新的治療乳腺癌的手段。所以本研究探討白藜蘆醇對鼻咽癌細胞ATP酶活力影響，將有助于進一步了解白藜蘆醇抗鼻咽癌的作用機制。

綜上所述，白藜蘆醇通過抑制鼻咽癌細胞的ATP酶活力和ATP酶蛋白表達，從而影響腫瘤細胞的增殖、代謝、遷移等能力，促使腫瘤細胞凋亡。這可能是白藜蘆醇抑制鼻咽癌細胞增殖的作用機制之一。

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（收稿日期：2012-12-10）