全自動免疫組化染色儀使用過程中的心得體會

[摘要] 目的 總結(jié)Ventana全自動免疫組化染色儀使用過程中的工作特點，并比較其與傳統(tǒng)手工操作免疫染色差異，分析其優(yōu)勢、探討不足。 方法 選擇同一時間段內(nèi)乳腺癌、卵巢癌、甲狀腺癌、消化系統(tǒng)癌、肺癌、腎癌、彌漫性大B細胞淋巴瘤等免疫組化病例，用機器操作與手工操作兩種方法進行免疫組化染色，對比實驗結(jié)果。 結(jié)果 應(yīng)用全自動免疫組化染色儀35種常用抗體中32種陽性染色著色均勻，定位準確，背景清晰，僅3種抗體（CA125、AAT、CD10）機器染色效果不佳，染色滿意率：91.4%（32/35）。 結(jié)論 Ventana全自動免疫組化染色儀區(qū)別于手工操作，運行過程中對某些細節(jié)步驟有特殊要求，其總體優(yōu)勢多：標準化程度優(yōu)良、工作效率高、染色效果滿意，其在臨床病理診斷領(lǐng)域中將日益得到廣泛應(yīng)用。

[關(guān)鍵詞] 全自動免疫組化染色儀；免疫組織化學；病理診斷

[中圖分類號] R365 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2013）03-

常規(guī)免疫組化技術(shù)在臨床病理鑒別診斷、評估腫瘤預后以及耐藥檢測等諸多方面日益發(fā)揮著不可或缺的作用。隨著對腫瘤研究的深入、新的免疫組化抗體的研制開發(fā)、醫(yī)院病理科的逐步發(fā)展，免疫組化已成為日常臨床病理技術(shù)工作的重要組成部分，工作量日益加大。傳統(tǒng)手工操作工作效率低，且容易受操作者個體手法、溫度、濕度及時間等不可控制因素的限制，不利標準化，質(zhì)量控制難以保證。全自動免疫組化儀的應(yīng)運而生彌補了上述不足，近年來全國一些醫(yī)院病理科已開始應(yīng)用。本文對我病理科新近投入使用的美國Ventana BenchMark? XT全自動免疫組化染色儀的工作特點進行階段性總結(jié)，并與人工操作比較，旨在探討自動化機器操作的優(yōu)勢與不足，分析遠期應(yīng)用價值。

1 材料與方法

1.1 材料及試劑

選擇自2012年1月～2012年3月滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院病理科工作中遇到的乳腺癌（10例）、卵巢癌（3例）、甲狀腺癌（8例）、消化系統(tǒng)癌（20例）、肺癌（15例）、腎癌（1例）、彌漫性大B細胞淋巴瘤（2例）等免疫組化病例（包括手術(shù)切除標本及小外檢標本），3μm石蠟切片。人工操作所用一抗、二抗、DAB顯色試劑盒（批號：111113413EF）均為福州邁新生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。機器操作一抗為福州邁新生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，二抗及顯色系統(tǒng)、復染液、蘇木精染色液（Mayer法），均為全自動染色儀自帶封閉套盒（批號：SN391920）。

1.2 方法

3 討論

筆者通過比較全自動免疫組化染色儀與傳統(tǒng)手工免疫組化操作兩種方法的差異，通過對染色結(jié)果的客觀分析，體會到機器操作的諸多優(yōu)勢，現(xiàn)總結(jié)以下幾點：

全自動免疫組化染色儀操作標準化程度提高，實驗結(jié)果準確、穩(wěn)定、可靠[3]。智能化設(shè)計使每種一抗可設(shè)置不同的修復條件以利于陽性著色，每張貼好標簽的玻片在切片盤上通過激光條碼掃描而被識別滴加一抗的名稱并按照該抗體設(shè)置的條件進行抗原修復。機器內(nèi)部沖洗過程完善，恒定吹氣，玻片上的試劑量保持不變，玻片表面始終平鋪一層油膜防止干燥。儀器內(nèi)部為37℃恒溫系統(tǒng)，組織切片不會受到外界溫差的影響[4]。上述多項功能使免疫組化實驗過程中的非特異反應(yīng)減少，背景清晰。此外，我們在儀器操作中發(fā)現(xiàn)3種抗體（CA125、AAT、CD10）在筆者所在科室條件下染色效果不佳，主要表現(xiàn)為定位不準確、出現(xiàn)非特異反應(yīng)，可能與一抗設(shè)置反應(yīng)條件不適宜或者試劑本身有關(guān)，有待進一步摸索試驗。

省時、省力，工作效率提高。傳統(tǒng)手工操作專人每天操作30～60張切片工作負荷已很繁重，且實驗過程中需要不斷計時，為保證滿意的實驗結(jié)果常常需4℃冰箱過夜孵育一抗。我科室新近引入的Ventana全自動免疫組化染色儀可自動完成從脫蠟、一抗孵育、二抗滴加、DAB顯色直至至復染的全套程序，后續(xù)僅需人工完成脫水及封片過程，這比一些文獻報道的全自動免疫組化儀在功能上更加完善了[5， 6， 7]。機器可隨開隨做，一次實驗可完成30張切片，整理運行時間為3 h左右。

健康環(huán)保。儀器配套的進口試劑本身毒性小對外界污染少，且備有廢液回收系統(tǒng)，可將染色過程中的廢液集中回收。自動完成顯色過程避免了手工操作時DAB顯色液對工作人員的危害[6]。

關(guān)于儀器操作與手工操作的差異筆者大致總結(jié)如下：

步驟差異：儀器操作有一些額外步驟，如：新到試劑需注冊，一抗條件需摸索后錄入電腦，但均為一次性；帶組織及標簽的玻片需浸泡牛奶中防止脫片；顯色復染結(jié)束后梯度酒精脫水前先進洗潔精溶液中洗涮充分去掉玻片上的油膜成分；機器需要定期保養(yǎng)等。

試劑差異：儀器配套試劑均為國外進口專利試劑，如抗原修復液名為細胞前處理清洗緩沖液（cell condition solution，CC1），是Tris緩沖液，pH值呈弱堿性，溫度升高時可水解氨基和醛基之間的共價鍵，使蛋白質(zhì)分子復性，增加抗體的通透性。通過促進抗原抗體間的結(jié)合能力，增強反應(yīng)的敏感性和特異性。筆者查到有學者也認為高pH值的抗原修復液效果優(yōu)于傳統(tǒng)的pH6.0枸櫞酸液，是今后的必然趨勢[8]。此外機器配套一種改良的Mayer蘇木精，復染效果稍不同于手工染色，使細胞核著色略似淺天藍色。

儀器操作對切片平整程度要求高。組織切片若有折疊、刀痕、氣泡、褶皺等可造成切片厚薄不均時，可能導致上機滴加試劑后出現(xiàn)氣泡，致使反應(yīng)不理想，形成非特異性染色[9]。

綜上所述，全自動免疫組化染色儀具有省時、省力、操作簡易、結(jié)果準確可靠以及健康環(huán)保等優(yōu)點，其為提高病理科免疫組化工作效率、實現(xiàn)標準化和質(zhì)量控制提供了便捷而可靠的工具[4]。在病理學界倡導標準化及質(zhì)量控制的大勢所趨下，全自動免疫組化染色儀必將會成為臨床病理乃至科研工作中不可或缺的設(shè)備之一，并在各醫(yī)院病理科長遠發(fā)展中扮演重要角色。

[參考文獻]

[1]楊月紅，袁靜萍，袁修學，等.自動免疫組化儀的使用體會[J].臨床與實驗病理學雜志，2011，27（3）：333-334.

[2]羅玉鳳，曹金伶.簡介免疫組化染色機[J].診斷病理學雜志，2012，19（4）：319.

[3]馬鐵，紀蓮，姜衛(wèi)國.新型全自動免疫組化染色機在臨床病理工作中高標準化應(yīng)用體會[J].中國醫(yī)科大學學報，2012，41（7）：662-663.

[4]余琦，李寧，楊江輝，等.全自動免疫組化染色儀與手工免疫染色的比較[J].局解手術(shù)學雜志，2010，19（2）：83-85.

[5]羅小平，胡維維，伍尚金.全自動免疫組化染色儀與人工操作的比較[J].醫(yī)療衛(wèi)生裝備，2007，28（4）：59-60.

[6]于蘭，何松，陳亞麗.全自動免疫組化染色儀的應(yīng)用體會[J].臨床與實驗病理學雜志，2009，25（2）：215-216.

[7]姜冰，楊軍，彭長纓，等.全自動免疫組化染色儀在臨床病理的應(yīng)用[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志，2008，18（18）：2745-2746.

[8]楊元發(fā)，李秀娟.關(guān)于免疫組化實驗的體會[J].實用醫(yī)技雜志，2006，13（18）：3321.

[9]林蓁，田甜.提高全自動免疫組化儀制片質(zhì)量的相關(guān)細節(jié)[J].臨床與實驗病理學雜志，2012，28（6）：700-701.

（收稿日期：2012-12-10）