Axl在上皮性卵巢癌中的表達及臨床意義

[摘要] 目的 檢測上皮性卵巢癌組織中Axl的表達，探討Axl在上皮性卵巢癌發生、發展及轉移中的作用。 方法 采用免疫組化法檢測83例上皮性卵巢癌組織、25例上皮性卵巢良性腫瘤及15例正常卵巢中Axl的表達情況，并分析其與上皮性卵巢癌主要臨床病理特征間的關系。 結果 Axl在上皮性卵巢癌組織中高表達，在上皮性卵巢良性腫瘤及正常卵巢組織中低表達，結果有統計學差異（P<0.05），其表達水平與病理分化、分期、淋巴結轉移及病灶部位相關，與病理類型無關（P>0.05）。 結論 Axl在上皮性卵巢癌中高表達，并在其發生、發展及轉移過程中具有重要意義。

[關鍵詞] Axl；上皮性卵巢癌；免疫組化；病理特征；轉移

[中圖分類號] R737.31 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2013）03-

卵巢癌是三大女性生殖系統腫瘤之一，死亡率高居首位，其中上皮性卵巢癌約占全部卵巢惡性腫瘤的90%，具有進展速度快、易復發轉移和產生耐藥性的特點，但具體機制尚不明確。近年來發現，受體酪氨酸激酶Axl在多種惡性腫瘤中高表達，并參其發生、發展及轉移機制，但國內關于Axl在卵巢癌方面的相關報道甚少。本研究應用免疫組化的方法檢測上皮性卵巢癌組織中Axl的表達，結合臨床資料探討其在卵巢癌中的意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

83例上皮性卵巢癌組織標本均來自煙臺毓璜頂醫院婦科2008年9月～2011年11月行手術切除且臨床資料完整的患者的石蠟組織包塊，術前均未行新輔助化療。取同期手術的上皮性卵巢良性腫瘤25例、正常卵巢15例作為對照組。

試劑

兔抗人Axl多克隆抗體（Abcam公司），辣根過氧化物酶標記羊抗兔抗體（上海生工有限公司），DAB顯色試劑盒（北京中杉生物有限公司）。

免疫組化檢測

石蠟切片60℃烘箱中烘片30 min，依次經過梯度乙醇脫蠟，3%過氧化氫溶液室溫封閉10 min，PBS振洗，pH 6.0的枸櫞酸鉀緩沖液微波抗原修復20 min，室溫自然冷卻，PBS振洗，滴加Axl抗體（1：30），4℃孵育過夜，PBS振洗后滴加二抗（1：200），孵育25 min，PBS振洗后DAB顯色。復染、脫水、透明、封片后顯微鏡下觀察。

1.4 結果判斷

統計學處理

2 結果

3 討論

卵巢癌是一種復發率高、易轉移的常見婦科惡性腫瘤，其發病隱匿，缺乏早期診斷的方法，確診時多為晚期，5年生存率僅為20%左右[1]。轉移是治療卵巢癌的最大難題之一，因此尋找新的潛在治療靶點具有重要意義。

Axl作為一種轉錄基因最早在人類慢性粒細胞白血病被發現[2]，后被證明廣泛存在于人體多種正常組織中，與Mer、Tyro3共同組成酪氨酸激酶家族，其共同配體為維生素K依賴性生長停滯特異性基因6（GAS6）。研究表明，Axl在正常人體多胚層組織中存在，參與PI3K/Akt、MAPK、NF-κB、STAT3等多種信號途徑，在神經膠質瘤[3]、前列腺癌[4]、胃腸道間質瘤[5]、乳腺癌[6]及非小細胞肺癌[7]等多種惡性腫瘤中異常表達，影響腫瘤細胞的浸潤、生長微環境及浸潤、轉移速度及預后。

Axl與多種惡性腫瘤密切相關，但在上皮性卵巢癌中的研究較少。本文采用免疫組化法檢測Axl在正常卵巢、上皮性卵巢良性腫瘤及上皮性卵巢癌中的表達，發現Axl在上皮性卵巢癌中的表達水平高于卵巢良性腫瘤及正常卵巢組織，而在后兩者中的表達無統計學差異。通過分析Axl表達水平與卵巢癌的病理類型、分期、分化及淋巴結轉移，得出結論：不同病理類型的卵巢癌組織中Axl的表達水平無統計學差異；FIGO分期晚、分化級別低、淋巴結轉移陽性者Axl的表達水平高，在分期早、分化級別高、淋巴結陰性者表達水平低，提示Axl與上皮性卵巢癌的侵襲性及預后等行為相關。在此基礎上，本文進一步比較了Axl在上皮性卵巢癌原發灶和其對應的大網膜、腸系膜、腸壁表面或腹壁轉移灶中的表達水平，發現后者處于較高的表達水平，提示Axl表達上調可能與上皮性卵巢癌的侵襲、轉移有關。

Axl與上皮性卵巢癌的惡性行為密切相關，但其機制尚不明確。Axl表達上調多伴有GAS6的改變，二者結合后Axl形成同源或異源二聚體，激活酪氨酸蛋白激酶活性，啟動下游信號通路。Axl相關的信號通路也可能與上皮間質轉化（EMT）相關，可由Snail、slug、twist誘導表達，降低細胞間粘連，游走能力增強，使其并在反饋環路中起關鍵性作用[8-9]。腫瘤細胞適應外部微環境時需要血管再生，Axl/GAS6聯合表達可以促進腫瘤與血管的關聯。Axl通過作用于血管生成素（ANG）及受體Tie2、DKK3調節血管內皮細胞功能；通過調節血管平滑肌細胞（VSMCs）發揮血管重建作用。

對于惡性腫瘤來說，浸潤、轉移及耐藥性仍是臨床治療面臨的最大難題。Rankin等[10]報道，利用siRNA沉默Axl基因表達對正常細胞的影響很小，證明針對Axl的靶點治療是安全的。研究證明，在乳腺癌中阻滯Axl信號通路途徑可以抑制癌細胞向淋巴結和其他臟器的遷徙行為，影響其間質樣浸潤特性、轉移瘤的形成及機體內組織細胞的微環境，總體生存率提高[6]。Axl與上皮性卵巢癌的浸潤轉移關系密切，阻斷其信號傳導通路對于治療轉移性卵巢癌具有重要意義。李靚等[11]用siRNA干擾卵巢癌OVCAR3細胞中Axl的表達，發現Axl表達抑制時可通過減少細胞內基質金屬酶-9（MMP-9）的mRNA的表達降低上皮性卵巢癌的成瘤、侵襲能力，表明Axl調控卵巢癌細胞浸潤和轉移。游離性Axl（sAxl）是Axl的胞外區結構，在正常人體血液中存在，可以跟GAS6特異性結合，動態調節Axl介導的信號途徑傳導[12-13]。Rankin等 [10]發現被sAxl作用后，小鼠癌細胞中PI3K/AKT、MMP-2和GAS6的信號降低，原發灶重量和數目分別下降了47%和42%，轉移灶的數量降低了63%，且與化療藥聯合使用能夠增強化療效果。sAxl主要作用是抗轉移，針對Axl的靶向治療是高級別和復發性卵巢癌的有效治療手段。由此可知，在Axl表達陽性的卵巢癌外周血中sAxl的水平對于腫瘤的早期診斷、治療和預后具有重要意義。

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（收稿日期：2012-12-18）