胃腺癌組織Naked1和MMP-9表達及其相關性研究

余澤兵 舒亦斌 雷慧慧 浙江省龍游縣人民醫院腫瘤外科 龍游 324400

胃腺癌組織Naked1和MMP-9表達及其相關性研究

余澤兵 舒亦斌 雷慧慧 浙江省龍游縣人民醫院腫瘤外科 龍游 324400

目的：觀察胃腺癌組織Naked1和MMP-9蛋白表達特征，探討兩者的關系及臨床價值。方法：選擇97例胃腺癌術后留取的蠟塊作為胃癌組，選擇62例正常胃黏膜組織作為正常對照組，應用免疫組織化學技術檢測兩組中Naked1和MMP-9蛋白表達，觀察Naked1和MMP-9表達與臨床病理特征的相關性。結果：胃癌組Naked1蛋白表達陽性率明顯低于正常對照組（P＜0.01），MMP-9蛋白表達陽性率明顯高于正常對照組（P＜0.01）。胃癌組Naked1和MMP-9蛋白表達與腫瘤的臨床分期、淋巴結轉移、浸潤深度、Ki67表達密切相關（P＜0.05或P＜0.01）；Naked1和MMP-9表達具有負相關性（P＜0.05），生存分析顯示Naked1低表達、MMP-9高表達患者預后差。結論：胃腺癌組織Naked1和MMP-9呈異常表達，兩者對病變的進展具有重要作用，術后檢測Naked1和MMP-9表達可能對判斷預后有一定價值。

胃腺癌 Naked1 MMP-9 免疫組化

胃腺癌臨床常見，侵襲和轉移是其重要的生物學行為，其發生發展是一個多基因、多階段的演進過程，其基因和蛋白的變化與患者的預后密切相關。Naked1是Wnt信號通路的重要抑制物，近來研究顯示Naked1低表達與腫瘤的生物學行為密切相關，并對病變進展有促進作用[1]。基質金屬蛋白酶-9（MMP-9）是細胞外基質降解蛋白的經典成員，其高表達可以促進腫瘤的進展。本實驗應用免疫組織化學技術檢測胃腺癌組織Naked1和MMP-9表達，探討其關系。

1 材料與方法

1.1 材 料 收集我院2005年1月—2007年11月胃腺癌手術后的蠟塊組織作為觀察組，納入均符合WHO中關于胃腺癌的診斷標準，同時經兩位病理主治醫師再次確診。排除術前放、化療的患者，排除臨床隨訪資料不完整患者。本組共97例，其中男50例，女47例，年齡39～76歲，平均55.8歲；PTNM分期：I期3例，II期45例，III期40例，IV期9例。同時選取距腫物邊緣超過5cm的切緣正常胃黏膜組織62例作為對照組，其中男32例，女30例，年齡37～76歲，平均55.1歲。兩組一般臨床特征比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 Naked1、MMP-9和ki67蛋白檢測 實驗用兔抗人多克隆Naked1、MMP-9和ki67蛋白濃縮液均購自北京中杉金橋生物技術公司，正式實驗前均進行預實驗，選擇最佳稀釋比例。Naked1、MMP-9和ki67的表達應用免疫組化SP法進行檢測，操作均由同一位主管病理技師完成，同時嚴格按照說明書操作，做好免疫組化質量控制。

1.3 免疫組化結果判定標準 Naked1、MMP-9和ki67蛋白的結果判斷均經兩位病理主治醫師判讀。陽性染色部位均定位于細胞質中，以棕黃色的顆粒樣著色為陽性細胞，選擇8個高倍視野（×400），以陽性細胞占全部計數細胞的百分率表示，取平均值。以平均每個高倍視野計數的呈陽性反應的細胞數≥25%為陽性，無明顯陽性反應或陽性反應細胞數＜25%為陰性。

1.4 統計學方法 數據應用SAS 6.12統計軟件進行統計分析，應用卡方檢驗、相關分析及生存分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 胃腺癌及正常胃黏膜組織中Naked1和MMP-9表達 胃腺癌組織Naked1表達陽性率明顯低于正常胃黏膜組織（P＜0.01），MMP-9表達陽性率明顯高于正常胃黏膜組織（P＜0.01），見表1。

表1 胃腺癌及正常胃黏膜組織Naked1和MMP-9表達比較 例（%）

2.2 胃腺癌組織Naked1和MMP-9表達與臨床病理特征的關系 胃腺癌組織Naked1和MMP-9表達與腫瘤的臨床分期、淋巴結轉移、浸潤深度和Ki67表達密切相關（P＜0.05或P＜0.01），見表2。

表2 胃腺癌組織Naked1和MMP-9表達與臨床病理特征的關系 例（%）

2.3 胃腺癌組織Naked1和MMP-9表達的相關性

經線性相關分析顯示，胃腺癌組織Naked1和MMP-9表達呈負相關（r=-0.49，P＝0.0210）。

2.4 胃腺癌組織Naked1和MMP-9表達與患者生存率的關系 本組患者術后均經正規系統的治療，20例患者接受TCF方案化療；33例患者應用FEP方案進行化療；44例患者應用FOLFOX方案進行化療，治療時間2～4個周期。本組患者隨訪時間為8～60個月，平均30.2個月。經生存分析顯示，胃腺癌組織Naked1和MMP-9表達與生存時間相關（χ2=9.76，P= 0.0239），即Naked1低表達、MMP-9高表達的患者預后差，見圖1～2。

3 討論

胃腺癌機制及生物學行為復雜，其發生發展過程中基因和蛋白均明顯改變。Naked1蛋白目前已被證實為經典的Wnt信號通路的抑制物[2]，在許多正常組織內均明顯表達，還可能具有調節黏附蛋白的作用[3-4]。Naked1蛋白表達下降，會失去對Wnt信號通路活性的抑制，可能對細胞外基質有一定調節作用[5]。MMPs是一組結構上具有很大同源性，并能有效降解細胞外基質的蛋白質，因為結構中含有金屬離子（主要是鋅和鈣）而得名[6]。MMP-9是基質金屬蛋白酶家族的重要成員，其發揮作用時能夠在細胞的表面對MMP-2等MMPs家族的成員進行有效活化，進而促進腫瘤離開原發部位發生轉移[7]。也有研究顯示MMP-9可以誘導腫瘤的間質細胞產生多種酶，該酶激活后被腫瘤細胞攝取到細胞膜表面，起到降解細胞外基質的作用[8-9]。

圖1 Naked1蛋白表達與胃腺癌預后的關系

圖2 MMP-9蛋白表達與胃腺癌預后的關系

本實驗結果顯示，胃腺癌組織Naked1和MMP-9異常表達，提示兩者表達失調對腫瘤的發生和進展有重要作用。胃腺癌組織Naked1和MMP-9表達均與腫瘤的臨床分期、淋巴結轉移、浸潤深度和Ki67表達密切相關，提示兩種蛋白參與了胃腺癌的進展，即兩者參與了腫瘤的脈管播散和增殖過程。相關分析顯示，Naked1和MMP-9的表達具有協同負向作用，即兩者可能具有互相調節的通路作用。Naked1可能通過MMP-9對細胞外基質的降解調節腫瘤的進展。Naked1異常表達使Wnt/β-catenin通路發生障礙，引起胞漿內未被磷酸化降解的β-catenin進入核內[10]，進而調節MMP-9的改變，促進腫瘤出現侵襲和轉移。生存分析顯示，Naked1低表達、MMP-9高表達患者生存時間短，提示聯合檢測二種蛋白對預后判斷可能有重要價值，由于臨床分期、淋巴結轉移、浸潤深度和Ki67也是和腫瘤預后相關的重要因素，因此說明Naked1和MMP-9可以作為胃腺癌預后的判斷指標。Naked1可能是機體腫瘤進展的多元性信號，對腫瘤發生時轉錄水平、黏附作用和細胞外基質的調節均有效果，但是具體機制尚有待更多實驗證實。

總之，胃腺癌組織Naked1和MMP-9蛋白異常表達，二者可能具有協同作用，共同促進腫瘤的進展，術后聯合檢測Naked1和MMP-9的表達對判斷胃腺癌的預后有一定價值。

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修回日期：2012-07-30

Correlation between Naked1 and Matrix Metalloproteinase 9 in Gastric Adenocarcinoma

YU Zebing，SHU Yibin，LEI Huihui.The People's Hospital of Longyou County，Longyou(324400)，China

Objective:To explore the relationship between Naked1 and matrix metalloproteinase 9(MMP-9)in gastric adenocarcinoma and its potential role in prognosis.Methods:Specimens from gastric adenocarcinoma tissue (n=97)and normal gastric tissue(n=62)were harvested.Expression of Naked1 and MMP-9 was determined by using immunohistochemistry.Results:Compared with the normal gastric tissue,Naked1 expression was lower but MMP-9 was higher in the gastric adenocarcinoma tissue.Naked1 and MMP-9 expression was closely related to clinical stage of carcinoma,metastasis,infiltration,and Ki67(P＜0.05 or P＜0.01).Naked1 was negatively related to MMP-9(P＜0.05).Survival analysis showed that lower expression of Naked1 and higher expression of MMP-9 was associated with poor prognosis.Conclusion:Naked1 is negatively correlated with MMP-9 in gastric adenocarcinoma and they may play a potential role in determining prognosis of gastric adenocarcinoma patients.

gastric adenocarcinoma Naked1 MMP-9 immunohistochemistry

2012-07-02