賽北紫堇總生物堿LD50的測定

摘要：選取18～22 g KM小鼠90只，給予不同濃度賽北紫堇[Corydalis impatiens（Pall.）Fisch]生物堿灌胃給藥，觀察30 min內小鼠的存活情況，利用改良寇氏法公式計算LD50。結果表明，賽北紫堇總生物堿的LD50為176 mg/（kg·bw）。為賽北紫堇的開發和利用提供理論支撐。

關鍵詞：賽北紫堇[Corydalis impatiens（Pall.）Fisch]；總生物堿；半數致死量

中圖分類號：R284.1 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）10-2371-02

紫堇屬（Corydalis D C.）全球約320種，主要產于亞洲。中國有200余種，全國均有分布，以西南部種類分布最多，其中青藏高原約120余種，僅西藏就多達94種[1，2]。在臨床實踐中，藏醫主要將紫堇屬植物用于治療各種出血、肝炎或膽囊炎、流感等疾病，也有將其用于治療跌打損傷或其他外傷、發燒、腸胃炎等。賽北紫堇[Corydalis impatiens（Pall.）Fisch]為罌粟科紫堇屬植物。在藏藥處方中賽北紫堇的入藥率高達70%，是藏藥應用中很重要的藥材。截止目前，尚未見有關急性毒理學試驗的報道。本研究旨在通過灌胃給藥，利用改良寇氏法進行藏藥賽北紫堇總生物堿對小鼠LD50的測定，為臨床用藥提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

KM小白鼠（青醫動字第2012004號），體重18～22 g，雌雄各半，試驗前禁食12 h，不禁水。

1.2 藥品

藏藥賽北紫堇總生物堿提取物，每克相當于生藥22.73 g（藏藥賽北紫堇于2011年8月21日采于青海省貴德縣，并經由青海省藥檢所藏藥室駱桂法研究員鑒定，總生物堿提取物是由粗粉經2%鹽酸滲漉提取，提取液濃縮至小體積后加堿堿化至pH 12，收集沉淀干燥即得，待用時用生理鹽水稀釋）。

1.3 儀器

XB-5200B超聲波清洗（寧波新芝生物科技股份有限公司）；FA1604電子天平（上海精密科學儀器有限公司）；金馬牌JPT-5架盤天平（上海岑達天平秤有限公司）。

1.4 試驗方法

1.4.1 100%和0%致死量的確定 探索劑量范圍：先找出100%致死量與0%致死量為試驗的上、下限劑量（Dm和Dn）[3，4]。

取KM小白鼠20只，雌雄各半，逐一稱重并做好標記，雌、雄分別按照體重由小到大（或由大到小）排序。然后按照分層隨機原則將小白鼠分成5組，每組4只，按不同劑量的賽北紫堇總生物堿灌胃給藥，如出現4/4死亡時，下一組劑量降低，當出現3/4死亡時，則上一劑量為Dm；如降低一劑量出現的死亡率為2/4或1/4時，應考慮到4/4死亡劑量組在正式試驗時可能出現死亡率低于70%，為慎重起見可將4/4死亡劑量乘以1.4倍，作為Dm[5]。同法找出Dn。

1.4.2 改良寇氏法測量半數致死量（LD50） 取小白鼠50只，雌雄各半，逐一稱重并做好標記，雌、雄分別按照體重由小到大（或由大到小）排序。然后按照分層隨機原則將小白鼠分成5個劑量組，每組10只。小白鼠不禁水，禁食12 h后，按照計算劑量將賽北紫堇的總生物堿以灌胃方式給藥（按0.2 mL/10g給藥）。觀察30 min內小白鼠的存活情況，記錄各組小白鼠死亡率[6-8]。

2 結果與分析

2.1 100%和0%致死量

由表1、表2可知，賽北紫堇總生物堿的100%和0%致死量分別為316 mg/（kg·bw）和61.2 mg/（kg·bw）。

2.2 改良寇氏法測量半數致死量（LD50）

按下列公式（1）和公式（2）分別計算公比r和組距i

r=■ （1）

式中，G為組數；Dm、Dn為上下限劑量。

i=（Xm-Xn）/（G-1） （2）

式中，Xm、Xn為上下限劑量的對數，G為組數。

按下列公式（3）計算LD50[9]

LD50=log-1[Xm-i（ΣP-0.5）] （3）

式中，Xm為最大劑量的對數；i為組距，即相鄰兩組劑量之差；P為各組動物死亡率，計算時用小數表示；ΣP為各組動物死亡率總和。

按公式（4）、（5）、（6）分別計算log LD50的標準誤LD50的95%可信限和LD50的平均可信限：

log LD50的標準誤=i×■（4）

LD50的95%可信限=log-1（log LD50±1.96 S■）

（5）

LD50的平均可信限=LD50±（LD50 95%可信限的高限-LD50 95%可信限的低限）/2 （6）

式中，n為每組動物數（n=10），p、q分別為每組的死亡率和存活率。

把表3試驗結果的相應數值帶入公式得：

r=0.66

i=2.499 7-2.318 0=0.181 7

LD50=log-1[Xm-i（ΣP-0.5）]

=log-1[2.4997-0.181 7（1.9-0.5）]

=log-12.25

=176 mg/（kg·bw）（總生物堿）

log LD50的標準誤=i×■=0.1817×■=0.05

LD50的95%可信限=log-1（log LD50±1.96 SlogLD50）

=log-1（2.2544±1.96×0.05）

=143～225 mg/（kg·bw）（總生物堿）

LD50的平均可信限=LD50±（LD5095%可信限的高限-低限）/2

=176±（225-143）/2

=135～217 mg/（kg·bw）（總生物堿）

3 小結與討論

賽北紫堇粗提物半數致死量LD50為176 mg/（kg·bw）總生物堿，logLD50的標準誤為0.05；LD50的95%可信限為（143～225）mg/（kg·bw）總生物堿；LD50的平均可信限為（135～217）mg/（kg·bw）總生物堿。

半數致死量（LD50）是衡量藥物毒性大小的指標，是評價藥物優劣的重要參數。通過半數致死量（LD50）可了解藥物單次給藥或短時間內多次給藥后動物所產生的毒性反應及其嚴重程度，為臨床用藥提供一定的參考。通常將藥物的半數致死量/半數有效量的比值稱為治療指數[9]。用以表示藥物的安全性，指數越大越安全[10]。本文研究的半數致死量（LD50）為賽北紫堇的后續藥理學研究奠定了劑量基礎，將在賽北紫堇的開發和利用上發揮極大的作用，具有重要的研究價值。

參考文獻：

[1] 范彩霞.紫堇屬（Corydalis D C.）植物資源在藏藥中的應用及其開發保護[J].中國醫學生物技術應用雜志，2003（1）：36.

[2] 張秀峰，王水潮.青海紫堇屬藥用植物資源調查與開發利用[J].時珍國藥研究，1997，8（6）：547.

[3] 陳 奇.中藥藥理研究方法學[M].第二版.北京：人民衛生出版社，2011.

[4] 鄒莉波.藥理學學習指導[M].北京：中國醫藥科技出版社，2007.

[5] 王玉祥.藥理學實驗[M]. 北京：中國醫藥科技出版社，1998.

[6] 錢望月，董海平，劉思遠，等.羥丁酸鈉對布比卡因、羅哌卡因和氯普魯卡因驚厥ED50、LD50的影響[J]. 數理醫藥學雜志，2010，23（1）：84-86.

[7] 程慧珍，丁伯平，張年寶，等.八厘麻毒素的提取及其半數致死量研究[J].中國藥業，2010，19（15）：10.

[8] 吳 桐，張 龍，王 晉，等.東莨菪堿對氯胺酮鎮痛、催眠作用及半數致死量的影響[J].上海醫學，2010，33（4）：325-328.

[9] 牛 牧，文 靜，劉軼蘭，等.異丙嗪對氯胺酮催眠、鎮痛作用及LD50的影響[J]. 中國醫藥導報，2008，5（10）：11-12.

[10] 馬志宏.紅茂草水提取物腹腔注射對小鼠半數致死量的測定[J].畜牧獸醫雜志，2010，29（15）：13-15.