內生菌根菌對藍莓抗氧化成分含量的影響

摘要：分析內生菌根菌對藍莓（Semen trigonellae）鮮果中抗氧化成分的影響。以北陸藍莓為材料，對接種和未接種菌根菌藍莓鮮果中具有抗氧化作用的花青素、鞣花酸含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性變化進行了研究。結果表明，藍莓接種菌根菌后鞣花酸、花青素、SOD活性總體呈上升趨勢，比未接種分別高31.3%，125.0%和22.8%。

關鍵詞：藍莓（Semen trigonellae）；內生菌根菌；鞣花酸；花青素；超氧化物歧化酶（SOD）

中圖分類號：S182 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）10-2408-03

藍莓（Semen trigonellae）又稱藍漿果，屬杜鵑花科（Ericaceae）越桔屬（Vaccinium）叢生灌木，其果實深藍色，果肉細膩，鮮食與加工皆宜。藍莓富含花青素和鞣花酸，抗氧化能力強，被聯合國糧農組織列為人類5大健康食品之一[1]。藍莓鮮果中的花青素屬于多酚類物質，其含量位列所有蔬菜和水果之首[2]。研究表明，花青素是天然水溶性抗氧化劑，具有清除自由基、延緩衰老、降低心血管疾病發病率、改善老年癡呆、抑制癌細胞生長等作用。鞣花酸也是廣泛存在于各種植物中天然多酚組分，屬天然抗氧化劑，具有抗衰老、增強肌體免疫力，抑制癌細胞生長等作用[3]。超氧化物歧化酶（SOD）是生物機體抗氧化酶系統重要的抗氧化酶之一，是生物體內重要的超氧陰離子自由基清除劑，能專一地清除生物氧化中產生的超氧陰離子自由基，防止脂質的過氧化反應，延緩機體衰老等作用。藍莓菌根菌（晶粒鬼傘，Coprinus micaceus）是遼寧省農業科學院從長白山野生越橘中篩選的內生菌根菌，可促進藍莓根部生長，并能增強藍莓的抗逆性。本研究通過在藍莓植株根部接種菌根菌后，分析藍莓鮮果中的花青素和鞣花酸含量變化以及SOD活性變化，旨在揭示菌根菌對藍莓鮮果抗氧化能力的影響，為藍莓菌根菌的應用提供借鑒和參考。

1 材料和方法

1.1 材料

藍莓菌根菌由遼寧省農業科學院微生物工程中心提供。

北陸藍莓經接種菌根菌，收集成熟果實作為處理樣品；以未接種植株的鮮果為對照樣品。

1.2 方法

1.2.1 鞣花酸含量的測定 參照郭金彩[4]報道方法：色譜柱Agilent TC-C18（5 μm，4.6 mm×250 mm），流動相為乙腈∶水∶磷酸=15∶84.5∶0.5（體積比），檢測波長為254 nm，流速1 mL/min，柱溫設為室溫。取3批藍莓樣品，按上述色譜條件以外標法定量分析。

1.2.2 花青素含量的測定 稱取1 g藍莓鮮果，搗碎，加入80%（體積分數）乙醇-水（pH=3）溶液8 mL，避光浸提30 min后，以8 000 r/min離心10 min，收集上清液并稀釋10倍，平行測定OD520 nm 3次，取平均值。

1.2.3 SOD活性的測定 以氮藍四唑（NBT）法測定，以抑制NBT光化還原反應的50%為一個酶活性單位，以（U）表示。

2 結果與分析

2.1 接種菌根菌對藍莓鮮果鞣花酸含量的影響

2.1.1 鞣花酸標準曲線的繪制 以鞣花酸峰面積（μV·s）為縱坐標，以鞣花酸進樣質量（μg）為橫坐標，作圖（圖1），得鞣花酸回歸方程為y=10 395x+40.69，R2=0.999 5（n=6），鞣花酸在0.136 0～2.175 4 μg范圍內呈良好線性關系。

2.1.2 藍莓中鞣花酸的含量測定 鞣花酸標準品、未接菌根菌和接種菌根菌的藍莓鮮果鞣花酸色譜圖見圖2。由圖2可知，鞣花酸保留時間為13.85 min，未見干擾峰。通過外標法測定藍莓鮮果中鞣花酸含量見表1，其中未接種菌根菌的藍莓鮮果鞣花酸含量為2.389 2 mg/g，接種藍莓菌根菌的藍莓鮮果鞣花酸含量為3.136 8 mg/g，其含量高于對照樣品31.3%。

2.2 接種菌根菌對藍莓鮮果花青素含量的影響

采用分光光度計法測定藍莓鮮果中花青素含量，結果見圖3。未接種菌根菌的藍莓鮮果花青素OD520 nm為0.56，接種菌根菌后藍莓鮮果中花青素OD520 nm為1.26，含量比未接種菌根菌的高125.0%。花青素為植物次級代謝產物，基本結構單元是2-苯基苯并吡喃型陽離子，即花色基元。現已知的花青素有20多種，又稱花色素，影響花青素形成的因素有pH值[5，6]、溫度[7，8]、光誘導[9，10]等。藍莓接種菌根菌對花青素形成的影響還未見報道。

2.3 接種菌根菌對藍莓SOD活性的影響

SOD普遍存在于動植物與微生物體內，作為生物機體重要的抗氧化酶，是生物體內重要的超氧陰離子自由基清除劑，能專一地清除生物氧化中產生的超氧陰離子自由基，有助于減少和阻止脂質的過氧化反應，延緩機體衰老及防止生物大分子損傷。未接種菌根菌藍莓鮮果SOD活性為42.48 U/g，接種菌根菌藍莓鮮果SOD活性為52.18 U/g，接種菌根菌藍莓鮮果SOD活性比未接種的高22.8%（圖4）。

3 結論

綜上所述，藍莓接種遼寧省農業科學院篩選的菌根菌（晶粒鬼傘）后，藍莓鮮果中具有抗氧化作用的鞣花酸和花青素含量上升，SOD活性提高。處理樣品中的鞣花酸含量比對照高31.3%，花青素含量比對照高125.0%，SOD活性比對照高22.8%。接種菌根菌（晶粒鬼傘）能提高藍莓的抗氧化活性。

參考文獻：

[1] CHEN C M， ZHANG N， WANG M. Ethnobotany of wu fan shu（Vaccinium bracteaturn Thunb.）[J]. Journal of Plant Re-sources and Environment，1998，7（1）：45-48.

[2] 劉 艷， 宋立秋， 范俊娟， 等. HPLC法測定藍莓中鞣花酸含量[J]. 江蘇農業科學，2008（3）：217-219.

[3] KALT W，FOMEY C F，ARTIN A，et al. Antioxidant capacity， vitamine C， phenolics and anthocyanins after strorage of small fruits[J]. Journal of Agricultural and Food chemistry，1999， 47（11）：4638-4644.

[4] 郭金彩.高效液相色譜法測定鞣花酸含量[J].河北化工，2006， 29（9）：55-56.

[5] 王振宇，楊 謙. 大花葵紅色素理化特性研究[J]. 林產化學與工業，2003，23（3）：102-104.

[6] 劉曉芳，李 萍，黃閩敏， 等. 紅寶石海棠葉片花青素及葉綠素含量的影響因子[J]. 經濟林研究，2007，25（1）： 38-41.

[7] SAURE MC，鄧西民. 蘋果花青索形成的外部調控[J]. 國外農學（果樹），1990（l）：1-8.

[8] 趙宗方，趙 勇，吳桂法. 果實花青素含量與PAL活性關系的研究[J]. 園藝學報，1994，21（2）：199-200.

[9] 耿玉韜.果實著色的理論與實踐[J].山西果樹，1989（1）：36-39.

[10] CHALKER-SCOTT L. Environmental significance of anthocyanins in plant stress responses[J]. Photochemistry and Photobiology，1999，70（1）：1-9.