微生物實(shí)驗(yàn)室純培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)教學(xué)設(shè)計(jì)

摘 要：微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)是進(jìn)行微生物研究和利用的基礎(chǔ)，其基本操作技術(shù)是學(xué)生必備的技能之一。通過(guò)實(shí)驗(yàn)使學(xué)生能更好地掌握無(wú)菌接種技術(shù)及純化培養(yǎng)等知識(shí)，具有極為重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義。本文在此重點(diǎn)探討微生物實(shí)驗(yàn)室純培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)教學(xué)設(shè)計(jì)。

關(guān)鍵詞：微生物培養(yǎng) 教學(xué)目標(biāo) 實(shí)施設(shè)計(jì)

微生物實(shí)驗(yàn)室純培養(yǎng)在生物技術(shù)中是一個(gè)重要的操作實(shí)驗(yàn)，課題涉及內(nèi)容多、范圍廣，實(shí)驗(yàn)難度很大。為了使學(xué)生更好地了解實(shí)驗(yàn)中的許多工作，包括儀器使用、菌液稀釋、菌株移植、接種等，都要在無(wú)菌的或不被污染的條件下進(jìn)行，才能保證做到純粹培養(yǎng)成功，筆者結(jié)合教學(xué)實(shí)際談?wù)剬?duì)本課題的教學(xué)設(shè)計(jì)。

一、教學(xué)目標(biāo)確立

依據(jù)課程內(nèi)容要求，確立本課題教學(xué)目標(biāo)見(jiàn)表1。

表1

二、教學(xué)實(shí)施設(shè)計(jì)

1.制訂實(shí)驗(yàn)計(jì)劃

依據(jù)課程內(nèi)容要求，確立本課題教學(xué)安排見(jiàn)表2。

表2

2.純化大腸桿菌的原理

微生物的純培養(yǎng)，選用平板劃線法或稀釋涂布平板法，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上操作，經(jīng)培養(yǎng)后可分離得到單個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，即菌落。

3.準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)材料

本課題所用材料、儀器及藥品見(jiàn)表3。

表3

實(shí)驗(yàn)材料大腸桿菌配制系列稀釋菌液

實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備培養(yǎng)皿、試管、酒精燈、試管架、移液管、膠頭滴管、接種環(huán)、涂布器、恒溫箱、無(wú)脂棉、玻璃棒、消毒棉球、超凈工作臺(tái)培養(yǎng)皿、試管、移液管、接種環(huán)、涂布器等滅菌（已滅菌備用）

實(shí)驗(yàn)藥品牛肉膏、蛋白胨培養(yǎng)基200ml、無(wú)菌水150ml提前配制（滅菌備用）

4.實(shí)驗(yàn)操作

（1）指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)操作。本課題實(shí)驗(yàn)可按照下面實(shí)驗(yàn)流程進(jìn)行操作：

超凈工作臺(tái)倒平板、接種培養(yǎng)箱純化培養(yǎng)。

（2）接種法。一般是無(wú)菌培養(yǎng)基在水浴鍋加熱融化后冷卻至50℃左右倒平板。操作必須始終在酒精燈火焰旁進(jìn)行，每皿倒入15ml左右并且不要將皿蓋完全打開(kāi)，冷卻后的平板要倒置。

平板劃線法（圖1）：即用接種環(huán)將菌體沾在平板培養(yǎng)基上。微生物細(xì)胞隨畫(huà)線次數(shù)的增多而減少，將微生物單個(gè)地分離，并最終形成標(biāo)準(zhǔn)的菌落。在畫(huà)線操作時(shí)應(yīng)注意：一是用接種環(huán)取菌種之前、每次畫(huà)線之前和畫(huà)線結(jié)束都要進(jìn)行灼燒滅菌，灼燒后要在酒精燈附近冷卻后再操作；二是畫(huà)線時(shí)不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基，如果采用分段畫(huà)線法操作從第二次操作應(yīng)總在上一次畫(huà)線末端開(kāi)始，首尾區(qū)不能相連；三是操作必須始終在酒精燈火焰旁進(jìn)行。

稀釋涂布平板法（圖2）：即先將菌液用無(wú)菌水進(jìn)行一系列梯度為（如10-1，10-2，10-3）稀釋液，用無(wú)菌玻璃涂棒將不同稀釋度的菌液均勻地涂布在平板上。聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落。在涂布操作時(shí)應(yīng)注意：一是配制系列梯度稀釋液必須用無(wú)菌水配制；二是配制系列梯度稀釋液和轉(zhuǎn)移菌液以及涂布過(guò)程等必須都在酒精燈火焰旁進(jìn)行。

（3）培養(yǎng)操作。 將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基（空白）放入37℃恒溫箱中，培養(yǎng)18～24h后，觀察并記錄。這期間安排學(xué)生代表或?qū)嶒?yàn)小組長(zhǎng)進(jìn)行定期觀察，并做好記錄，以便及時(shí)讓其他學(xué)生觀察到自己的實(shí)驗(yàn)成果。

三、問(wèn)題討論

引導(dǎo)學(xué)生理解在微生物的培養(yǎng)中應(yīng)保持培養(yǎng)物純凈的關(guān)鍵性。讓學(xué)生在體驗(yàn)實(shí)驗(yàn)操作中，體會(huì)無(wú)菌操作在實(shí)驗(yàn)中的重要性。讓學(xué)生認(rèn)識(shí)要在理解實(shí)驗(yàn)原理的前提下再進(jìn)行操作實(shí)驗(yàn)的必要性。讓學(xué)生觀察、展示實(shí)驗(yàn)成就，分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并指導(dǎo)學(xué)生回顧實(shí)驗(yàn)中的成敗原因，進(jìn)行討論總結(jié)。

（作者單位：海南省技師學(xué)院生物制藥工程系）