植物甾醇酯的高效液相色譜分析

【摘 要】本文研究了植物甾醇酯、植物甾醇和脂肪酸酯的定性、定量分析方法。采用正相高效液相色譜法，紫外檢測器，結果表明：三種物質10min內出峰，分離效果好，此方法快速、準確、簡便。

【關鍵詞】植物甾醇 植物甾醇酯 高效液相色譜

【中圖分類號】G642 【文獻標識碼】A 【文章編號】1674-4810（2013）34-0048-02

游離植物甾醇在油脂中溶解性較差，在體內很難被吸收利用，造成使用上的困難。與植物甾醇相比，植物甾醇酯具有更優的親脂性和更佳的降膽固醇效果，是一種新型功能性食品添加劑。目前，國內外的少數廠家已能使用植物甾醇等原料合成植物甾醇酯，對于合成過程中跟蹤檢測的分析方法卻未見報道。

一 儀器與試藥

Agilent 1100型液相色譜儀，Agilent 1100型紫外檢測器；電子天平；梅特勒托利多。

植物甾醇酯對照品購于cognis生物制品有限公司，經HPLC測定純度為95.31%，所用試劑均為色譜純。

二 實驗方法

1.對照品溶液的制備

稱取Cognis甾醇酯（95%）對照品50mg溶于50mL流動相，配制成質量濃度為1mg/mL的對照品溶液，搖勻，經0.45μm微孔濾膜過濾，即得對照品儲備液，備用。

2.樣品溶液的制備

向裝有溫度計的250mL四口燒瓶中加入一定量的植物甾醇和脂肪酸甲酯，油浴加熱，機械攪拌，溫度達到90℃后繼續反應1h，再加入一定量的甲醇鈉，而后恒溫反應4h，最后將熱的反應液轉入漏斗中，經水洗、乙醇洗滌，脫溶劑后得到樣品。

稱取合成樣品50mg溶于50mL流動相，配制成質量濃度為1mg/mL的樣品溶液，搖勻，經0.45μm微孔濾膜過濾，即得樣品儲備液，備用。

3.色譜條件

色譜柱：硅膠正相柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：正己烷∶異丙醇∶甲醇=98∶2∶1.5%；流速：1mL/min；檢測波長：210nm；進樣量：20μL。

4.線性關系考察

吸取對照品儲備液1、2、4、6、8mL，分別置于10mL容量瓶中，使用流動相定容，搖勻，得到5個不同濃度的對照品溶液。分別吸取20μL，按上述色譜條件進樣分析。以濃度X（μg/mL）為橫坐標，峰面積Y為縱坐標，繪制標準曲線并計算回歸方程。回歸方程為：Y=187269X+29637，r=0.9987。結果表明：甾醇酯在0.1～0.8mg/mL的濃度范圍內與峰面積有良好的線性關系。

5.精密度試驗

吸取上述標準對照品溶液中的0.6mg/mL 20μL，按上述色譜條件，重復進樣5次，測得甾醇酯峰面積的RSD為1.29%。

6.穩定性試驗

取0.4mg/mL對照品溶液，分別于0、2、6、12、24h，吸取20μL進樣，測得甾醇酯峰面積的RSD為1.76%。結果表明，供試品溶液在24h內穩定性較好。

7.重現性試驗

取同一批原料5份，按供試品溶液制備方法分別制備5份，測定，計算甾醇酯的百分含量的RSD為1.94%。

8.回收率試驗

稱取已知甾醇酯含量樣品5份，各取5mg分別加入甾醇酯對照品適量，按供試品溶液的制備方法進行處理，按上述色譜條件測定，結果甾醇酯的平均回收率為98.72%，RSD為1.87%。

9.樣品測定

吸取經微孔濾膜（0.45μm）濾過后的樣品溶液20μL，在上述色譜條件下進樣分析。

三 討論

經實驗最后確定流動相為：正己烷∶異丙醇∶甲醇=98∶2∶1.5%。加入少量異丙醇能使甾醇快速出峰，峰型較理想，加入量過多也會使甾醇與其他峰無法分開。正己烷∶異丙醇=98∶2時峰型較理想；加入甲醇能使甾醇酯與甲酯很好分離。實驗還考查了反相液相色譜法對樣品測定，發現甾醇組份能分別出峰，但甾醇酯不能得到理想峰型。

四 結論

本實驗對高效液相色譜法進行了系統性分析，考查了不同色譜柱和流動相，最后確定了分析三種物質較理想的分析條件：紫外檢測器；硅膠正相柱Hypersil CN（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：正己烷∶異丙醇∶甲醇=98∶2∶1.5%；流速：1mL/min；檢測波長：210nm；進樣量：20μL。本方法簡便、易行，而且穩定、重現性好。

參考文獻

[1]盛漪、華偉、谷文英.植物甾醇降膽固醇生理功能及其研究進展[J].糧食與油脂，2002（12）：25～26

[2]唐傳核、彭志英.一種新型功能性食品——植物甾醇酯[J].中國油脂，200l（3）：60～63

〔責任編輯：范可〕