胎盤蛋白13檢測在子癇前期患者妊娠中晚期血清中的變化分析

汪瓊?cè)A 顏瑜

子癇前期在婦產(chǎn)科臨床上一種較為多見的妊娠并發(fā)病癥，一般出現(xiàn)在孕婦妊娠20周以后，主要的臨床表現(xiàn)為患者出血蛋白尿、高血壓以及水腫等，同時伴有全身不同程度的損傷，嚴(yán)重患者甚至可能出現(xiàn)心力衰竭，抽搐，彌漫性血管內(nèi)凝血以及胎盤早剝等嚴(yán)重并發(fā)癥。隨著醫(yī)學(xué)的快速發(fā)展，已經(jīng)有越來越多的研究表明，胎盤血管重鑄發(fā)生障礙以及滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤不足是子癇前期病情發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[1]。而近年的醫(yī)學(xué)研究表明，胎盤蛋白13（placental protein 13，PP13）對于胎盤內(nèi)血管的重鑄形成以及滋養(yǎng)細(xì)胞的浸潤起到重要的調(diào)節(jié)作用[2]。因此，本研究對本院收治的44例子癇前期患者的臨床資料進(jìn)行回顧性分析，探討妊娠子癇前期患者血清中的胎盤蛋白13含量與孕婦妊娠孕周長短的變化關(guān)系，為進(jìn)一步認(rèn)識子癇前期的發(fā)病規(guī)律提供實驗參考。現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年12月-2012年12月本院收治的44例子癇前期患者，其中輕度子癇前期患者16例，重度子癇前期患者28例，同時選取30例正常健康孕婦進(jìn)行對照。患者年齡22.3~36.8歲，平均（27.65±4.17）歲。其中29例患者為首次妊娠患者，15例患者為二次妊娠患者。三組研究對象的年齡、孕周等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。所有研究對象均無慢性高血壓、近期感染、心臟病、糖尿病以及腎臟病史[3]。

1.2 方法 對所有孕婦在不同孕周采用ELISA檢測方法測定孕婦血清中的胎盤蛋白13（PP13）的含量，比較不同孕周的子癇前期患者以及正常妊娠孕婦的胎盤蛋白含量的變化。

1.3 研究對象血清胎盤蛋白13樣品的收集與測定分別于試驗設(shè)計的時間點(diǎn)（妊娠中晚期）對患者進(jìn)行靜脈采血3 mL，血液收集于管中，放置3 h后于3000轉(zhuǎn)/min的條件下離心15 min，取上清液。血清樣品在-80 ℃下保存。采用ELISA試劑盒測定，酶標(biāo)儀在450 nm條件下測定吸光度[4]。具體測定方法：首先將ELISA試劑盒在室溫中（22~25 ℃）放置半個小時，讓其平衡。打開試劑盒從中取出固相載體反應(yīng)板。將上述實驗所需各種工作液在規(guī)定時間內(nèi)配制好。在相對應(yīng)的固相載體反應(yīng)板的孔中加入100 μL標(biāo)準(zhǔn)品以及100 μL待測樣品溶液。將酶標(biāo)板封閉上蓋，在37 ℃的環(huán)境中孵育90 min。待抗原抗體特異性結(jié)合反應(yīng)完畢后，使用自動洗板機(jī)將酶標(biāo)板中的液體吸收出去。

在反應(yīng)板的每個孔中加入100 μL事先配制好的已被生物素標(biāo)記的胎盤蛋白13抗體工作液。封閉酶標(biāo)板，在37 ℃的環(huán)境中孵育1 h。使用實現(xiàn)配制好的PBS洗滌液對酶標(biāo)板各個孔洗滌3次，每次加入PBS洗滌液需浸泡30 s。在反應(yīng)板的每個孔中加入100 μL事先配制好的已和過氧化物酶結(jié)合的親和素溶液。封閉酶標(biāo)板，在37 ℃的環(huán)境中孵育半個小時。使用實現(xiàn)配制好的PBS洗滌液對酶標(biāo)板各個孔洗滌5次，每次加入PBS洗滌液需浸泡1 min。

將顯色劑四甲基聯(lián)苯胺（TMB）加入酶標(biāo)板的各個孔中，每孔90 μL，讓反應(yīng)體系在37 ℃的環(huán)境中反應(yīng)15 min。顯色劑四甲基聯(lián)苯胺（TMB）加入之前要在37 ℃的環(huán)境中實現(xiàn)平衡半個小時。最后加入100 μL顯色劑四甲基聯(lián)苯胺（TMB）終止液。

按照上述步驟測定標(biāo)準(zhǔn)曲線上各個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品的OD值，用以繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)，各個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo)。再在450 nm處測定待測樣品的OD值，然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出相應(yīng)的待測樣品MMP-3的濃度。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計量資料以（±s）表示，比較采用t檢驗，計數(shù)資料采用 字2檢驗進(jìn)行分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組妊娠期胎盤蛋白13含量的比較 正常孕婦組血清中胎盤蛋白13的含量為（62.24±16.81）pg/mL，輕度子癇前期組（137.92±23.46）pg/mL，重度子癇前期組為（186.74±29.82）pg/mL。輕、重度子癇前期組血清中胎盤蛋白13的含量顯著高于正常孕婦組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；且重度子癇前期組高于輕度子癇前期組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。2.2 同組內(nèi)妊娠中晚期血清中胎盤蛋白13含量的比較 同組內(nèi)妊娠晚期血清中胎盤蛋白13的含量顯著高于妊娠中期，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；相對于妊娠中期，子癇前期組妊娠晚期孕婦血清中胎盤蛋白13含量的增加值顯著高于正常孕婦組（P<0.05），見表1。

表1 同組內(nèi)妊娠中晚期血清中胎盤蛋白13含量的比較（±s） pg/mL

表1 同組內(nèi)妊娠中晚期血清中胎盤蛋白13含量的比較（±s） pg/mL

組別 孕28~32周 孕33~36周 P值正常孕婦組（n=30） 57.61±2.47 75.32±4.82 <0.05輕度子癇前期組（n=16） 136.57±12.92 162.35±21.22 <0.05重度子癇前期組（n=28） 153.33±17.62 191.14±26.53 <0.05

3 討論

近年來，子癇前期成為了導(dǎo)致圍產(chǎn)兒死亡，孕婦不良預(yù)后的臨床高危因素之一[5]。因此，子癇前期是婦產(chǎn)科病理學(xué)研究的重點(diǎn)研究內(nèi)容[6-7]。目前，醫(yī)學(xué)研究人員還無法完全清楚的闡釋子癇前期的發(fā)病機(jī)制與確切的病因，關(guān)于子癇前期發(fā)病機(jī)制目前學(xué)術(shù)界比較認(rèn)同的幾種觀點(diǎn)有，遺傳學(xué)說、免疫機(jī)制、異常滋養(yǎng)細(xì)胞侵入肌肉層、血管內(nèi)皮細(xì)胞受到損傷等等[8-9]。

胎盤蛋白13的主要生物學(xué)功能包括以下幾點(diǎn)：（1）糖結(jié)合活性：有研究表明胎盤蛋白13和多種糖類的結(jié)合性較好，因此胎盤蛋白可以較為有力的凝集血紅細(xì)胞。（2）磷酸化：胎盤蛋白13可以磷酸化，其磷酸化生物學(xué)過程可能與酪氨酸激酶有關(guān)。（3）溶血磷脂酶活性，胎盤蛋白13的該性質(zhì)的具體生物學(xué)作用尚未明確，可能參與了種植，維持孕婦妊娠。（4）與β/γ肌動蛋白以及膜聯(lián)蛋白相結(jié)合：目前認(rèn)為膜聯(lián)蛋白在成熟微絨毛以及胎盤分化的過程中起到了一定的作用[10]。

對于胎盤蛋白13在子癇前期患者血清中含量的變化，可能是由于子癇前期患者孕中期胎盤蛋白13的mRNA水平的下降，以及子癇前期中滋養(yǎng)層的細(xì)胞壞死，刷狀緣膜顯著減少。目前醫(yī)學(xué)研究工作者普遍認(rèn)為，胎盤蛋白13在胎兒發(fā)育過程中的幾個方面都發(fā)揮了作用。有研究表明，胎盤蛋白13可以誘發(fā)鈣離子介導(dǎo)的去極化過程，從而引起滋養(yǎng)層膜釋放花生四烯酸以及亞油酸，以此作為底物加速前列環(huán)素以及血栓素的合成。子癇前期患者血清中的胎盤蛋白13提取物對于脂肪酸、促凝血素以及前列腺素的促進(jìn)釋放作用并不明顯，從而引起胎盤中舒血管因子和縮血管因子的比例改變，最終導(dǎo)致胎盤病理的出現(xiàn)[11-12]。

本研究結(jié)果表明，重度子癇前期孕婦血清中的胎盤蛋白13的含量高于輕度子癇前期孕婦，子癇前期患者血清中的胎盤蛋白13的含量高于正常孕婦血清中蛋白13含量，隨著妊娠時間的延長，孕婦血清內(nèi)胎盤蛋白13的含量有所增高。

綜上所述，孕婦血清中胎盤蛋白13的含量是隨著孕周的增加而上升的，這與國外的研究結(jié)果保持一致。這也從另一個角度說明隨著胎盤面積的不斷增大，滋養(yǎng)細(xì)胞的凋亡數(shù)量也隨著孕婦孕周時長增加而不斷上升，滋養(yǎng)細(xì)胞由于不斷的增殖和凋亡，周而復(fù)始，使得組織結(jié)構(gòu)得以重鑄，功能得到完善，妊娠可以正常的繼續(xù)進(jìn)行。同時本研究結(jié)果也說明了，胎盤蛋白13的異常表達(dá)，是造成孕婦子癇前期的重要關(guān)鍵因素。其在促進(jìn)血管生成以及滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤的進(jìn)程起著關(guān)鍵的作用。

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