IL—1B基因多態性及幽門螺旋桿菌感染與胃癌的關系研究

張軍喜　段廣才　郭愛葉　柴健　馬穎輝　董瑋

【摘要】 目的：探討IL-1B基因多態性與胃癌易感性的關系。方法：以聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性（PCR-RFLP）分析法檢測65例胃癌患者和130例非胃癌患者的IL-1B基因位點多態性。結果：IL-1B-31及IL-1B-511均有3種基因型，分別是C/C、C/T和T/T；病例組Hp陽性感染率（70.8%）高于對照組（55.4%），差異有統計學意義（字2=5.6，P<0.05）。Hp感染時，IL-1B-511和IL-1B-31的T/T均能增加胃癌發病的風險，OR分別為8.1（95%CI： 2.4-10.1）和11.5（95%CI： 1.9-13.1）。結論：IL-lB-31和-511 TT基因多態性與河南地區胃癌的發生有關。

【關鍵詞】 白細胞介素-1； 基因多態性； 胃癌

胃癌（Gastric cancer，GC）是我國常見的惡性腫瘤之一，嚴重危害著人們的身體健康。多數研究表明，胃癌的發生是由遺傳、環境和幽門螺桿菌感染等因素相互作用的結果。近年來，有學者認為幽門螺桿菌感染可致慢性胃炎、消化性潰瘍等疾病的發生[1-2]。人體感染幽門螺桿菌是否是胃癌發病獨立危險因素尚未定論[3-4]。白細胞介素-1是一種重要的炎癥介質，有研究表明：IL-1B和IL-1RN基因多態性可能與胃癌易感性有關[5-6]。本研通過對河南漢族人群中HP及IL-1B基因的檢測和分析，初步探討了感染幽門螺桿菌（Hp）后IL-1基因多態性與胃癌的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 病例組來河南省腫瘤醫院、鄭州大學一附院、河南省第一人民醫院就診并確診為非賁門胃癌的患者，診斷由縣級以上醫院胃鏡和手術病理切片（組織蠟塊）確診，臨床癥狀、體征或其他檢查符合胃癌診斷標準。對照組要求與病例組同地區、同民族、同性別，年齡相差不超過5歲，能清楚回答問題并排除胃癌家族史和消化系統疾病及免疫系統疾病的非胃癌患者。病例組65例，男49例，女16例，平均年齡（59.00±13.64）歲；對照組130例，男94例，女36例，平均年齡（60.00±12.15）歲。兩組患者的年齡比較差異無統計學意義（t=-0.88， P=0.38），性別、吸煙、飲酒等因素比較差異均無統計學意義（P>0.05），具有可比性。兩組患者的年齡、性別等一般資料比較差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 實驗方法

1.2.1 基因組DNA的提取 采用改良的NaCl-酚/氯仿抽提法提取基因組DNA。抽取200 μL血細胞混懸液于1.5 mL EP管中，經過消化、裂解、酚/氯仿抽、無水乙醇沉淀提等步驟提取基因組DNA。

1.2.2 目的片段擴增 應用Primer 5.0軟件自行設計引物：IL-1B-31 F：5' -AGAAGCTTCCA CCAA TACTC-3和R：5'-AGCACCTAGTTGTAAGGAAG-3；IL-1B-511 F：5'-CACTTTG CTGGTGTC TCGGT-3和R：5'-GTGGGACAA AGTGGA AGACA-3（北京賽百盛基因技術有限公司）；擴增反應體系（50 μL）：5μL 10×PCR緩沖液，2 μL引物（10 μmol/L），1 μL dNTP（10 mmol/L），0.5 μL TaqDNA聚合酶（北京天為時代科技有限公司，2.5 U/μL），4μL模板DNA，35.5μL去離子水；PCR擴增反應條件：95 ℃變性5 min；退火溫度依次為51 ℃和54 ℃，各1 min；72 ℃延伸1 min，35個循環后72 ℃延伸10 min。

1.2.3 IL-1B基因多態性檢測 IL-1B基因多態性檢測用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性。酶切反應體系為20μL，包括10μL PCR產物，0.5 μL限制性內切酶（10 U/μL，MBI公司），2 μL 10×buffer，

7.5 μL去離子水。混勻后37 ℃恒溫消化6 h。3%的瓊脂糖凝膠電泳分析基因酶切產物。

1.2.4 HP檢測 采用ELISA法檢測血清中Hp IgG抗體，試劑盒購自深圳賽爾生物公司。

1.3 統計學處理 應用SPSS 13.0統計學軟件對數據進行處理，計量資料以（x±s）表示，計數資料比較和基因型Hardy-Weinberg平衡檢驗采用 字2檢驗，α=0.05，風險因素OR值及95%的可信區間采用Logistic回歸分析，以P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 IL-1B基因多態性檢測結果 IL-1B-31及IL-1B-511各有3種基因型，均為C/C、C/T和T/T，如圖1～圖2。

圖1 IL-1B-31基因擴增產物酶切電泳圖

圖2 IL-1B-511基因擴增產物酶切電泳圖

2.2 兩組IL-1B基因型的分布 IL-1B-31、IL-1B-511基因型頻率符合Hardy-Weinberg平衡（ 字2=0.04、0.32，P>0.05），見表1。

2.3 兩組HP感染情況的比較 病例組Hp陽性感染率為70.8%（46/65），高于對照組的55.4%（72/130），差異有統計學意義（ 字2=5.6，P<0.05）。

2.4 基因多態性與胃癌關系 Hp感染時，IL-1B-511T/T能增加胃癌發病的風險，OR=8.1（95%CI：2.4-10.1）；IL-1B-31T/T能增加胃癌發病的風險，OR=11.5（95%CI：1.9-13.1），見表2。

3 討論

IL-1B是IL-1基因族在430 kb區域內的3個基因之一，其功能是編碼和調控IL-1β，IL-1β不僅在炎癥的免疫損傷過程中起著重要作用，而且還有較強抑制胃酸分泌功能[7]。研究發現，IL-1B基因多態性會影響IL-1β的表達水平[8]。2001年，El-Omar等[9]發現IL-1B-511 T/IL-1B-31C基因型（OR值分別為7.5和2.1）和IL-1RNII/II等位基因（OR值為2.9）是低胃酸分泌的胃癌患的獨立危險因素。隨后，Machado等[10]在上述研究的基礎上發現：IL-1B-511 T基因攜帶者和IL-1RNII/II基因型增加腸型胃癌的發病風險；Kudo等[11]報道IL-1B-511 TT基因型與Hp感染后發生胃癌的高危險有關；然而，最近有學者報道IL-1B-511、IL-1B-31 T/T基因型與胃癌無關[12-13]。考慮與研究樣本量和種族有關，本研究以患有非幽門螺桿菌感染疾病的同期住院患者作對照，研究發現患者感染幽門螺桿菌后攜帶IL-1B-31和IL-1B-511 T/T基因型者較非T/T型攜帶者發生胃癌機會增高，OR值分別為11.5和8.1。提示：感染幽門螺桿菌后，患者IL-1B-31和IL-1B-511兩位點T/T基因型可能與胃癌發生密切有關。推測可能的機制是：IL-1B-31和511基因位點突變后，白細胞介素-1β因子分泌增加，抑制胃酸分泌，使胃內長期處于低胃酸狀態，從而引發慢性胃炎的發生，再者胃內酸度降低也可導致某些細菌在胃內生長繁殖，進一步造成胃內亞硝胺類致癌物質物質合成增加，造成胃黏膜的損害、黏膜上皮化生，最終演化為胃癌，因此，如果患者檢測到攜帶有IL-1B-31和511 T/T突變基因型，且合并有幽門螺桿菌感染，應引起臨床醫生足夠的重視。endprint

我國正常人群中Hp感染率在50%～60%之間，研究發現河南漢族人群中Hp-IgG陽性率高達55.4%，與國內田淑梅等[14]研究結果基本相符。另一項國外研究發現，一般人群中Hp感染雖然較高，但胃炎、胃癌等與HP感染高度相關的消化道疾病發病率則處于相對較低水平，分析認為可能與Hp菌株毒力基因分布及宿主炎癥因子某些基因位點突變相關[15]。因此，筆者在研究宿主炎癥因子某些突變熱點的同時，也要充分考慮人群中感染HP毒力基因的分子特征，運用分子流行病學研究方法分析二者在普通人群和患病人群中交互作用，這對揭示胃癌患者中HP感染、炎癥因子基因位點突變在疾病發生機制中的作用有著重要的價值。

綜上所述，Hp感染后，攜帶IL-1B-31和IL-1B-511 T/T基因型與胃癌發病密切有關。目前IL-1B-31和511基因位點突變與胃癌發生仍存在爭議。在今后研究中，應充分考慮研究的樣本量大小、研究人群的種族、Hp感染情況及Hp菌株毒力基因分子特征等因素。

參考文獻

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（收稿日期：2014-04-01） （本文編輯：蔡元元）endprint

我國正常人群中Hp感染率在50%～60%之間，研究發現河南漢族人群中Hp-IgG陽性率高達55.4%，與國內田淑梅等[14]研究結果基本相符。另一項國外研究發現，一般人群中Hp感染雖然較高，但胃炎、胃癌等與HP感染高度相關的消化道疾病發病率則處于相對較低水平，分析認為可能與Hp菌株毒力基因分布及宿主炎癥因子某些基因位點突變相關[15]。因此，筆者在研究宿主炎癥因子某些突變熱點的同時，也要充分考慮人群中感染HP毒力基因的分子特征，運用分子流行病學研究方法分析二者在普通人群和患病人群中交互作用，這對揭示胃癌患者中HP感染、炎癥因子基因位點突變在疾病發生機制中的作用有著重要的價值。

綜上所述，Hp感染后，攜帶IL-1B-31和IL-1B-511 T/T基因型與胃癌發病密切有關。目前IL-1B-31和511基因位點突變與胃癌發生仍存在爭議。在今后研究中，應充分考慮研究的樣本量大小、研究人群的種族、Hp感染情況及Hp菌株毒力基因分子特征等因素。

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我國正常人群中Hp感染率在50%～60%之間，研究發現河南漢族人群中Hp-IgG陽性率高達55.4%，與國內田淑梅等[14]研究結果基本相符。另一項國外研究發現，一般人群中Hp感染雖然較高，但胃炎、胃癌等與HP感染高度相關的消化道疾病發病率則處于相對較低水平，分析認為可能與Hp菌株毒力基因分布及宿主炎癥因子某些基因位點突變相關[15]。因此，筆者在研究宿主炎癥因子某些突變熱點的同時，也要充分考慮人群中感染HP毒力基因的分子特征，運用分子流行病學研究方法分析二者在普通人群和患病人群中交互作用，這對揭示胃癌患者中HP感染、炎癥因子基因位點突變在疾病發生機制中的作用有著重要的價值。

綜上所述，Hp感染后，攜帶IL-1B-31和IL-1B-511 T/T基因型與胃癌發病密切有關。目前IL-1B-31和511基因位點突變與胃癌發生仍存在爭議。在今后研究中，應充分考慮研究的樣本量大小、研究人群的種族、Hp感染情況及Hp菌株毒力基因分子特征等因素。

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[14]田淑梅，張淑靜，韓爽.生物微矩陣（芯片）方法檢測100例幽門螺桿菌抗體的臨床分析[J].中國醫學創新，2011，8（17）：102-103.

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