人工牛黃甲硝唑膠囊微生物限度檢查方法驗證

蔣曉蘭，張 濤，馬 哲，李 彥，馬力軍，鄭國棟，王朋恩

(1.石藥集團歐意藥業有限公司，河北 石家莊 050000;2.奧星制藥設備(石家莊)有限公司，河北 石家莊 050000;3.輝瑞投資有限公司，河北 石家莊 050000;4.神威藥業集團有限公司，河北 石家莊 051430)

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人工牛黃甲硝唑膠囊微生物限度檢查方法驗證

蔣曉蘭1，張 濤2，馬 哲1，李 彥3，馬力軍4，鄭國棟1，王朋恩1

(1.石藥集團歐意藥業有限公司，河北 石家莊 050000;2.奧星制藥設備(石家莊)有限公司，河北 石家莊 050000;3.輝瑞投資有限公司，河北 石家莊 050000;4.神威藥業集團有限公司，河北 石家莊 051430)

目的：確認所采用的檢驗方法適合于人工牛黃甲硝唑膠囊的微生物限度檢查計數檢驗。方法：采用加入乳化劑的方法制備該藥供試液，制成1∶20的供試液，細菌、霉菌及酵母菌計數方法為平皿法。結果：各組實驗回收率均大于70%。結論：人工牛黃甲硝唑膠囊的微生物限度檢查計數方法可采用平皿法。

人工牛黃甲硝唑膠囊；微生物限度檢查；平皿法；回收率

人工牛黃甲硝唑膠囊為復方制劑，用于治療急性智齒冠周炎、局部牙槽膿腫、牙髓炎、根尖周炎等癥狀[1]。本文旨在驗證《中國藥典》2010年版二部附錄XI J中微生物檢驗方法是否適用于人工牛黃甲硝唑膠囊的微生物測定。此法為通用方法，未必適用于每個藥品。通過該檢驗方法對人工牛黃甲硝唑膠囊中枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉菌進行回收率試驗。

1 材料

1.1 儀器設備

MG0.6型壓力蒸汽滅菌柜(河北省邢臺醫療器械廠)；LRH-150B型生化培養箱(廣東省醫療器械廠)；101-2A電熱鼓風干燥箱(上海滬南科學儀器聯營廠)；SHJ-SZP超凈工作臺(蘇州安泰空氣技術有限公司)。

1.2 培養基及試劑

改良馬丁培養基、改良馬丁瓊脂培養基、營養瓊脂培養基、玫瑰紅鈉瓊脂培養基、營養肉湯培養基、曙紅亞甲藍瓊脂培養基、膽鹽乳糖培養基、4-甲基傘形酮葡糖苷酸培養基。培養基均為本公司自制。人工牛黃甲硝唑膠囊(石藥集團有限公司)，批號1205051、1207061、1209071，規格：甲硝唑0.2g，人工牛黃5mg。

1.3 驗證菌種

金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、大腸埃希菌[CMCC(B)44102]、枯草芽孢桿菌[CMCC(B)63501]、黑曲霉菌[CMCC(F)98003]、白色念珠菌[CMCC(F)98001]均購自中國食品藥品檢定研究院。

2 菌液制備

將金黃色葡萄球、枯草芽孢桿菌、大腸埃希菌、白色念珠菌和黑曲霉菌按《中國藥典》2010年版二部附錄XI J 細菌、霉菌及酵母菌計數項下的菌液制備方法制成濃度約為50～100cfu/mL的菌懸液，備用。[2]

3 供試液制備

用非水溶性藥品處理方法試驗，取5g司盤80、3g單硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80于燒杯中溶化混勻,加入供試品5g，用無菌玻棒攪拌成團后，緩慢加入45℃左右的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100mL，邊加邊攪拌使之溶化，即為供試液。

4 回收率實驗

4.1 結果判定：回收率應不低于70%

稀釋劑對照組的菌回收率(%)=稀釋劑對照組的平均菌落數/菌液組的平均菌落數×100%

試驗組的菌回收率(%)=(試驗組的平均菌落數-供試品對照組的平均菌落數)/菌液組的平均菌落數×100%

4.2 供試品對照組

分別取上述供試液1mL，用平皿法制板，制成2個營養瓊脂培養基平板、2個玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板。細菌在33℃下培養72h，霉菌或酵母菌置25℃下培養120h，計數。

4.3 試驗組

取上述供試液1mL和5種菌液各1mL，同法制成營養瓊脂培養基和玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板各2份，并依法培養，計數。

4.4 菌液組

取5種相同的菌液各1mL，同法制成營養瓊脂培養基平板和玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板各2份，并依法培養，計數。結果見表1-3。

4.5 稀釋劑對照組

取供試品制備所用稀釋劑1mL和上述5種菌液各1mL，制成營養瓊脂培養基平板和玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板各2份。細菌置33℃培養箱中培養72h，霉菌(酵母菌)置25℃培養120h計數[3]。結果見表4。

5 討論

本研究結果表明：各組試驗回收率均大于70.0%，符合法定要求，本法所用稀釋劑對結果無影響；采用平皿法檢驗供試品，采用加入對照法試驗，各組試驗的回收率均高于70.0%，無明顯抑菌作用。所以人工牛黃甲硝唑膠囊在進行微生物限度檢查檢驗金黃色葡萄球、枯草芽孢桿菌、大腸埃希菌、白色念珠菌和黑曲霉菌時可以采用非水溶性藥品處理方法和平皿法進行檢驗。

表1 各菌株菌數及回收率 (批號：1205051)

表2 各菌株菌數及回收率 (批號：1207061)

表3 各菌株菌數及回收率 (批號：1209071)

表4 各菌株菌數及回收率

[1] 國家藥典委員會. 國家藥品標準·化學藥品地方標準上升國家標準 (第三冊)[S].北京：化學工業出版社，2008.

[2] 潘有文. 現代醫藥工業微生物實驗室質量管理與驗證技術[M].北京：中國協和醫科大學出版社，2004:179-185.

[3] 馬緒榮，蘇德模. 藥品微生物學檢驗手冊[M].北京：科學出版社，2006:67.

(責任編輯：魏 曉)

Validation of Test for Specified Micro-organism of Galcus Bovis and Metronidazole Capsules

Jiang Xiaolan1，Zhang Tao2，Ma Zhe1，Li Yan3，Ma Lijun4，Zheng Guodong1，Wang Peng’en1

(1. CSPC Ouyi Pharmaceutical CO,Ltd, Shijiazhuang 050000, China;2. Austar Pharmaceutical Equipment(Shijiazhuang)Ltd., Shijiazhuang 050000，China;3. Pfizer Investment Co.Ltd., Shijiazhuang 050000, China;4.Shineway Pharmaceutical Co.Ltd., Shijiazhuang 051430, China)

Objective:A test for specified micro-organisms of Galcus Bovis and Metronidazole Capsules was established.Methods:To make a one in twenty dilution of original product with suitable sterile surface-active agent .The plate-count method is reserved for bacteria , fungi and microzyme.Results:The ratio of recovery is more than 70 percent.Conclusion:The plate-count method is suit for test for specified micro-organisms of Galcus Bovis and Metronidazole Capsules.

Galcus Bovis and Metronidazole Capsules；Plate-count Method；Ratio of Recovery

2014-05-19

蔣曉蘭(1982-)，女，石藥集團歐意藥業有限公司助理工程師，研究方向為藥物分析。

R284

A

1673-2197(2014)17-0031-02