雙黃連水提醇沉、干燥工藝的研究

摘要：目的 通過實驗，對雙黃連中金銀花和連翹水提液醇沉工藝及干燥工藝進行研究，優選出最佳精制方法和干燥條件。方法 黃芩的提取精制方法按照藥典方法進行，本實驗考察比較金銀花和連翹提取液一次醇沉和二次醇沉后所測得的浸膏得量和有效成分的含量，從而確定最優的提取精制工藝。在此基礎上，對減壓干燥法和微波干燥法進行了比較，優選出最佳干燥條件。結果 通過兩種方法的比較顯示：二次醇沉的提取精制方法出膏率更低且含量高；微波干燥大大減少了干燥時間。結論 優選所得醇沉工藝和干燥工藝科學合理。

關鍵詞：雙黃連，水提醇沉，干燥工藝

雙黃連是治療感冒的常用藥物，它是由金銀花、黃芩、連翹組成。由銀翹散（《溫病條辨》）精簡而得。金銀花有清熱解毒的作用，用于溫病初起的解表、清熱、解毒、止痢；黃芩為常用清熱燥濕、解毒、涼血、瀉肺火藥；連翹有清心、肺、胃之熱，散溫邪、解 毒瘡等作用。三藥共奏清熱解毒、利尿涼血之功效。因此可用于風熱感冒所致的發熱、 咳嗽、咽痛[1]。本實驗主要是指藥典雙黃連片的基礎上對其金銀花和連翹水提液醇沉工藝及干燥工藝進行改進，減少服用量，為雙黃連新型制劑的研究打基礎。

1 儀器與試藥

1.1儀器 微波真空干燥機（WBZ-2型，貴陽新奇微波工業有限責任公司）；十萬分之一電子天平（AE/240型，上海梅特勒儀器有限公司）；千分之一電子天平（JA2003型，上海良平儀器儀表有限公司）；高效液相色譜儀（檢測器：Waters 2487，泵：515 HPLC PUMP）。

1.2試藥 綠原酸對照品（批號：110753-201314，中國藥品生物制品檢定所），黃芩苷對照品（批號：110715-201016，中國藥品生物制品檢定所），色譜乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑為分析純，水為娃哈哈純凈水。

黃芩飲片（批號：130401，北京同仁堂）、金銀花飲品（批號：130101，阜安堂藥房）、連翹飲品（批號：30901，阜安堂藥房），按照《中國藥典》2010版一部，對其進行含量測定，黃芩、金銀花、連翹均符合藥典標準。

2 方法與結果

2.1色譜條件 綠原酸以甲醇-1%冰醋酸水溶液（50：50）為流動相，檢測波長為274nm，流速1.0mL·min-1，進樣量10μL，色譜柱為DIKMA（250mm×4.6mm，5μm，產品系列號：8136519），柱溫為25℃。

2.2對照品溶液的制備 精密稱取精密稱取綠原酸對照品4.07mg，置10mL棕色容量瓶中，用50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得0.407mg·mL-1的綠原酸對照品母溶液。

2.3供試品溶液的制備

2.3.1連翹、金銀花供試品的制備[2-4] 稱取1d處方量的金銀花和連翹，即金銀花22.5g，連翹45.0g，加溫水適量浸30min，煎煮2次，1h/次，合并水煮液，濾過，并濃縮至（80℃）比重為1.20～1.25，濃縮液冷卻至40℃加95%乙醇至溶液含醇量為85%，充分攪拌，靜置12h。取上清液，殘渣加85%乙醇適量，攪拌，靜置12h。濾過，合并2次濾液并濃縮至（80℃）比重為1.20～1.25，濃縮液加95%乙醇至含醇量為75%，充分攪拌，靜置12h。濾過，濾液濃縮成相對密度為1.34～1.40（60℃）的稠膏，微波干燥，得金銀花、連翹提取物的干浸膏。精密稱取干浸膏適量至10mL棕色容量瓶中，加適量50%甲醇超聲處理溶解，再用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3.2陰性供試品的制備 處方除去金銀花后按\"2.3.1\"項下制備，即得陰性供試品。

2.3.3空白對照的制備 配置50%甲醇溶液，并用0.45μm微孔濾膜過濾，即得空白對照品溶液。

2.4方法學考察

2.4.1線性關系的考察 精密吸取綠原酸對照品，配置濃度3.256、4.070、4.884、5.698、6.512μg·mL-1吸取上述溶液10μL，注入高效液相色譜儀，按\"2.1\"項下色譜測定條件測定峰面積，以對照品的進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，線性回歸，結果表明黃芩苷在3.256～6.512μg·mL-1范圍內與峰面積呈良好線性。

2.4.2精密度實驗精密吸取綠原酸10μL，分別按照\"2.1\"項下色譜條件連續進樣6次，以峰面積計算RSD值，黃芩苷RSD為2.22%，綠原酸RSD為2.43%，表明儀器的精密度良好。

2.4.3穩定性實驗 分別精密吸取\"2.3\"項下制備成的供試品溶液，按照\"2.1\"項下的色譜條件在0h、1h、3h、6h、9h、12h進樣，測得峰面積，12h內黃芩苷和綠原酸峰面積的RSD值分別為2.03%，2.62%，表明供試品溶液至少在12h內含量穩定。

2.4.4重復性實驗 稱取金銀花飲品2.25g、連翹飲品4.50g，精密稱定。按\"2.3\"項下供試品溶液制備方法制備6份，按照\"2.1\"項下的色譜條件進樣，以峰面積計算RSD值黃芩苷為2.67%、綠原酸為1.62%，結果表明重復性良好。

2.4.5加樣回收率實驗精密稱取已測定綠原酸含量的同批樣品6份各約0.00012g，分別加50%甲醇定容至10mL，再精密吸取2.50mL，分別精密加入綠原酸對照品溶液（40.7μg·mL-1）0.80mL，加50%甲醇定容至10mL后，混勻，按\"2.1\"項下的色譜條件測定，依次進樣10μL，測定峰面積，計算出回收率1010.1%，RSD值為1.91。

2.4.6陰性對照實驗 取陰性供試品溶液、空白對照溶液和對照品溶液，分別按照\"2.1\"項下色譜條件進行進樣，結果陰性供試品溶液和空白對照溶液在45.10min附近都無峰，說明有效成分的測定無干擾。

通過以上方法學考察的試驗結果說明，黃芩浸膏中黃芩苷及連翹、金銀花浸膏中綠原酸的含量測定方法可行。

3 連翹、金銀花提取精制及干燥工藝的考察

3.1一次醇沉、二次醇沉的考察

3.1.1一次醇沉的考察 稱取1d處方量的金銀花和連翹，即金銀花22.5g，連翹45.0g，平行制備3份。加溫水適量浸30min，煎煮2次，1h/次，合并水煮液，濾過，并濃縮至（80℃）比重為1.20～1.25，濃縮液冷卻至40℃加95%乙醇至溶液含醇量為85%，充分攪拌，靜置12h。取上清液，殘渣加85%乙醇適量，攪拌，靜置12h。濾過，合并2次濾液并濃縮至相對密度為1.34～1.40（60℃）的稠膏，減壓干燥，即得一次醇沉金銀花、連翹提取物。得干浸膏10.13g，按\"2.1\"項下色譜條件進樣測定，綠原酸平均含量為1.96%。見表1。

3.1.2二次醇沉的考察 稱取一日處方量的金銀花和連翹，及金銀花22.5g，連翹45.0g，平行制備3份。加溫水適量浸30min，煎煮2次，1h/次，合并水煮液，濾過，并濃縮至（80℃）比重為1.20～1.25，濃縮液冷卻至40℃加95%乙醇至溶液含醇量為85%，充分攪拌，靜置12h。取上清液，殘渣加85%乙醇適量，攪拌，靜置12h。濾過，合并2次濾液并濃縮至（80℃）比重為1.20～1.25，濃縮液加95%乙醇至含醇量為75%，充分攪拌，靜置12h。濾過，濾液濃縮成相對密度為1.34～1.40（60℃）的稠膏，減壓干燥，即得二次醇沉金銀花、連翹提取物。得干浸膏3.35g，按\"2.1\"項下的色譜條件進樣測定，得綠原酸含量3.9%。見表2。

3.1.3結果分析 由以上結果可知：二次醇沉平均得到綠原酸的干浸膏量3.35g，且平均含量達到3.9%，而一次醇沉平均得到干浸膏量10.13g，平均含量只有1.96%。兩個結果表明二次醇沉的浸膏量大大減少，而有效成分的含量沒有顯著降低，因此我們選擇用二次醇沉來精制連翹、金銀花提取物。

3.2干燥工藝的考察

3.2.1減壓真空干燥 按照\"3.1.2\"的提取精制方法，平行制備3份提取物，將所得的稠膏放入溫度為80℃，壓力為-0.06MPa的真空干燥箱中，見表3。

3.2.2微波真空干燥 按照\"3.1.2\"的提取精制方法，平行制備3份提取物，將所得的稠膏放入微波真空干燥機中，溫度控制在30℃內，壓力為-0.08MPa，見表4。

4 結論

數據表明，雖然兩種干燥方法所得的干浸膏量相差不大，但微波真空干燥大大節省了時間，而且指標性成分（綠原酸）含量也相對減壓真空干燥高，所以選擇用微波真空干燥來干燥連翹、金銀花提取物。

5 工藝驗證實驗

采用\"3.1.2\"項下制備連翹、金銀花稠浸膏三份，采用\"3.2.2\"項下微波提取條件進行提取，制備三批干浸膏樣品，記錄浸膏得量，并按\"2.1\"項下的色譜條件，測定綠原酸的含量，結果顯示，浸膏得量平均值為3.33g，黃芩苷含量平均值為4.0%，結果證明該工藝穩定可行。

6 討論

6.1雙黃連主要由三味藥組成，藥味雖不多，但按藥典中的提取純化制備出的金銀花與連翹的浸膏量大，達不到新劑型研制的要求。本實驗在藥典一次醇沉的基礎上進行二次醇沉，以減少浸膏量。結果表明二次醇沉后出膏量為3.35g，與一次醇沉10.13g相比大大的減少了出膏量，而在二次醇沉的過程中綠原酸的含量并沒有損失。因此證明了二次醇沉的可行性。

6.2在此基礎上，干燥工藝也是一個考察要點，傳統的減壓干燥法干燥時間過長，會影響到浸膏有效成分的含量。因此，我們考察了減壓干燥與微波干燥兩種工藝，微波工藝大大降低了干燥時間，并且含量更高，證明了微波干燥方法可行。

參考文獻：

[1]董文剛.鄒儀雙黃連制劑研究及其臨床應用[J].中國民族民間醫藥，2010，06：144-145.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：159-160.

[3]李力群，黃金龍，施存元.雙黃連滴丸中金銀花、黃芩、連翹提取工藝研究[J].中藥材，2007，30（4）：481-482.

[4]張文清，夏偉，等.雙黃連的提取精制工藝研究[J].世界科學技術-中醫藥現代化，2008，10（3）：66-70.

編輯/哈濤