組蛋白去乙酰酶抑制劑MS—275抑制肝癌的實驗研究

摘要：目的 組蛋白去乙酰酶抑制劑（HDACIs）通過抑制HDACs而抗腫瘤。本文研究該類藥物Ms-275對人肝癌HepG2細胞的抑制作用。方法 將不同濃度的MS-275作用于HepG2細胞，用CCK-8法檢測生長抑制作用。結果 Ms-275對HepG2細胞的生長抑制作用存在明顯的劑量、時間依賴關系。結論 組蛋白去乙酰酶抑制劑類藥物可以抑制肝癌細胞增殖。

關鍵詞：原發性肝癌；組蛋白去乙酰酶抑制劑；細胞增殖

原發性肝細胞性肝癌（HCC），是世界上致死率前三的惡性腫瘤，臨床常用的化療或生物制劑療法尚不滿意，尋找療效好、副作用小的藥物是目前面臨的重要課題[1]。

組蛋白去乙酰酶抑制劑（histone deacetylase inhibitors，HDACIs）作為新一代的抗腫瘤藥物，在國外已成為研究熱點[2]。

本實驗將MS-275作用于人肝癌細胞HepG2系，為其臨床應用于肝癌的治療提供理論依據。

1資料與方法

1.1一般材料 HepG2細胞由中國科學院上海生命科學院生物化學與細胞生物學研究所提供，MS-275購于德國Merck公司，DMEM培養液和二甲亞砜（DMSO）購于美國GIBCO公司，胎牛血清購于美國Hyclone公司。

1.2方法

1.2.1細胞培養及藥物配制 用含10%胎牛血清的DMEM培養液培養，在37℃、5%CO2，生長傳代。MS-275用DMSO溶解，在培養液中的濃度控制在1%以內。

1.2.2 CCK-8實驗 將HepG2細胞濃度調至4×104/ml，每孔100μl接種于96孔培養板內，加入終濃度為0.5、1、2、4μmol/L的MS-275作為實驗組，另以加入與實驗組等量的DMSO作為陰性對照。

1.2.3平板克隆形成試驗 將HepG2細胞懸液按每皿200個細胞的密度，接種于10 cm培養皿，懸液中分別含有1、2、4μmol/L MS-275者作為實驗組，含等量DMSO者作為陰性對照組，同時靜置培養2w。

1.3統計學方法 采用SPSS16.0統計軟件分析，實驗數據以均數±標準差表示，數據比較采用方差分析。

2結果

2.1 MS-275顯著抑制HepG2細胞的生長 檢測結果顯示，MS-275對HepG2細胞的抑制率隨濃度和作用時間的增加而呈明顯上升趨勢，與陰性對照組相比有顯著性差異，見表1。

2.2 MS-275降低HepG2細胞的克隆形成率 平板克隆形成試驗結果顯示，單個HepG2細胞的克隆形成率隨MS-275作用濃度的增加而呈下降趨勢，從陰性對照組的（75.84±5.78）%逐漸降至4μmol/L組的（27.42±3.26）%，見圖1。

3討論

組蛋白去乙酰化酶作為調控基因的關鍵蛋白酶，其功能異常被證實與腫瘤的發生和發展密切相關[3]。HepG2細胞是人肝母細胞瘤細胞株，增殖旺盛，以CCK-8法檢測發現MS-275在較低濃度下（1μmol/L）即對該細胞有明顯的生長抑制作用。通過研究，顯示MS-275的作用時間越長對HepG2細胞的抑制越明顯，4μmol/L作用至第5d接近于完全抑制，說明MS-275對HepG2的生長可產生持久而強有力的抑制效應。

本實驗從不同水平和角度對MS-275作用于HepG2細胞的過程和結果進行了檢測和觀察。實驗結果表明，MS-275在較低劑量下對HepG2細胞即有強有力的生長抑制作用，為其臨床應用于膀胱腫瘤的治療提供了可靠的實驗依據。

參考文獻：

[1]P.A.Farazi，R.A.DePinho，Hepatocellular carcinoma pathogenesis：from genes to environment.Nature reviews[J].Cancer ，2006，6：674-687.

[2]Marks PA，Richon VM，Miller T，et al.Histone deacetyhse inhibitors[J].Adv Cancer Res，2004，91：137-168.

[3]Timmermann S，Lehrmann H，Polesskaya A，et al.Histone acetylation and disease[J].Cell Mol life Sci，2001，58（545）：728-736.

編輯/孫杰