2010—2011年蚌埠市手足口病的病原學檢測分析

【摘要】 目的 對2010——2011年蚌埠市哨點醫院手足口病病原進行檢測分析，以調查本地區手足口病流行情況。為手足口病的綜合防治提供參考資料。方法 收集哨點醫院2010——2011年送檢的手足口病病例咽拭子標本，應用實時熒光定量PCR技術檢測手足口病病原（腸道病毒7l型、柯薩奇病毒A組16型）。結果 2010年共檢測332份咽拭子標本，陽性101份，陽性率30.42%，分別是腸道病毒71型55份，柯薩奇A組16型46份；2011年檢測447份咽拭子標本，陽性215份，陽性率48.08.%，腸道病毒71型200份，柯薩奇A組16型15份。結論 腸道病毒71型是2011年蚌埠市手足口病流行的主要病原。

【關鍵詞】 手足口病；實時熒光定量PCR；腸道病毒71型；柯薩奇病毒A組16型

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2014.04.603

文章編號：1004-7484（2014）-04-2289-02

【Abstract】Objective To investigate the pathogen of hand-foot-mouth disease（HFMD）in Bengbu city.Methods Specimen of throat swabs of HFMD cases were collected from the sentinel hospital from 2010 to 2011.Nucleic acids In three type，which were enterovirus71（EV71），enterovirus coxasckie virus A16（CA16）and universal enterovirus（EV）were detected by real-time-PCR.Result Among 332 cases in 2010，101 were positive including 55 strains of EV71 and 46 strains of CVAl6 respectively.positive rate is 30.42%；Among 447 cases in 2011，all 215 were positive including 200 strains of EV71 and 15 strains of CVAl6 respectively.positive rate is 48.08%.Conclusion s EV71 was the major pathogens for the epidemic of HFMD in the sentinel hospital in Bengbu city.

【Key words】 Hand-foot-mouth disease（HFMD）；Real-time-PCR；Enterovirus71（EV71）；Enterovirus coxasckie virus A16（CA16）

手足口病（HFMD）是一種常見于5歲以下的兒童急性傳染病，其臨床癥狀主要表現為發熱和手、足、口等部位的皮疹、皰疹，伴或不伴口腔潰瘍，病情嚴重者可引起心肌炎、肺水腫、無菌性腦膜腦炎等致命性并發癥。手足口病病原為小RNA科、腸道病毒屬的一些不同血清學腸道病毒，包括柯薩基病毒A組4、5、7、9、10、16型以及B組2、5型，埃可病毒和腸道病毒71型，其中以柯薩基病毒A組16型和腸道病毒71型最為常見[1]。其傳染性強，常引起爆發性流行。2008年3月安徽阜陽市發生手足口病大規模流行[2]，使本病得到空前的重視，為了解2010——2011年蚌埠市HFMD的流行病學和病原學特征，本研究對轄區內哨點醫院采集的HFMD患兒的咽拭子標本應用實時熒光定量PCR進行了病原學檢測，現將檢測結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源 2010——2011年，蚌埠市市轄三縣四區各哨點醫院每月送檢的手足口病患兒咽拭子標本，2010年332份；2011年447份。具體哨點醫院分別是：龍子湖區為蚌埠醫學院第一附屬醫院；蚌山區為蚌埠市第三人民醫院；禹會區、淮上區為蚌埠市第一人民醫院；懷遠縣為懷遠縣一院和懷遠縣二院；五河縣為五河縣醫院；固鎮縣為固鎮縣醫院。診斷標準參照《手足口病診療指南（2010年版）》，樣本采集運送及儲存均按《手足口病診療指南（2010年版）》的要求操作。

1.2 儀器和試劑 ABI7300型實時熒光定量PCR基因擴增儀（ABI公司美國）。RNA提取試劑盒（Rneasy Mini Kit，Cat No.74104）購自QIAGEN公司；腸道病毒（EV）通用型、柯薩基病毒A組16型和腸道病毒71型核酸檢測試劑盒購自北京金豪公司；嚴格按試劑說明書操作，效期內使用。

1.3 方法

1.3.1 病毒RNA的提取 采用QIAGEN公司的Rneasy mini Kit，按照試劑盒說明書操作。最終收集RNA提取液40微升。

1.3.2 實時熒光定量PCR反應 在ABI7300型實時熒光定量PCR基因擴增儀上進行PCR擴增，反應總體積為25微升，反應程序為；逆轉錄及變性50℃30分鐘，95℃1分鐘；預擴增95℃15秒，50℃30秒，72℃1分鐘，5個循環；擴增及熒光收集95℃10秒，55℃40秒，40個循環。同時設置陽性梯度模板和陰性對照。結果判定嚴格按照ABI7300儀器操作說明書和PCR檢測試劑盒說明書進行。

1.3.3 統計學方法 應用SPSS13.0統計學軟件進行數據處理。

2 結 果

檢測結果見表1、表2、表3。

3 討 論

HFMD在全球范圍內廣泛流行，是嬰幼兒時期的常見傳染病，1958年最先發現CA16為HFMD病原體，1969年首次分離出EV71。此后CA16和EV71一直作為HFMD的主要病原出現于報道之中。在我國，1981年上海市首次報道HFMD，此后各地報道逐漸增多。2008年5月衛生部將本病列入我國法定丙類傳染病，嚴格了HFMD的報告與管理。據2010年衛生部統計數據，在丙類傳染病中，2009年HFMD報告發病數和報告死亡數均躍居首位，HFMD業已成為危害我國兒童健康的重要公共衛生問題。

實時熒光定量PCR技術是新興的針對病原體核酸的快速檢測技術，該方法具有定量檢測、快速、靈敏度高、特異性強以及自動化程度高的特點，使基因擴增和產物分析全過程都在封閉條件下進行，實現了實時監測和自動分析，從根本上解決了傳統PCR檢測過程中產物易受污染和不能定量的問題。

本研究結果顯示，蚌埠市HFMD病原2010年為EV71和CA16交替出現，而2011年則EV71為占絕對優勢流行株（93.02%）。EV71感染性強，除引發和CoxAl6相似的手足口癥狀外，還可引起嚴重的神經系統并發癥，如腦膜炎、腦炎、弛緩性癱瘓等。2008年全國監測數據顯示，96%以上的實驗室確診死亡病例由EV71感染引起[3]。本研究EV71高檢出率的結果與國內北京、上海、浙江、湖南等地的報道結果一致[4-7]，提示EV71是國內近年來HFMD流行的主要病原體。

參考文獻

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