HPLC法測定乳痛寧糖漿中芍藥苷的含量

【摘要】 目的 建立以高效液相色譜法測定乳痛寧糖漿中芍藥苷的含量。方法 HPLC法，以C18化學鍵合硅膠（4.6mm×150mm，5μm）為色譜柱，流動相為甲醇：水（30：70），流速：1.0ml·min-1，柱溫：25℃；檢測波長為230nm。結果 芍藥苷檢測濃度在16.68-122.32μg·ml-1范圍內與峰面積值呈系良好線性關系，（r=0.998）；平均加樣回收率為99.30%，RSD=0.88%（n=9）。結論 本方法簡便快捷、靈明度高、重現性好，可以作為該制劑的質量控制之一。

【關鍵詞】 HPLC法；芍藥苷；乳痛寧糖漿；含量測定

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2014.04.017

文章編號：1004-7484（2014）-04-1817-02

【Abstract】Objective To establish a method of determination of paeoniflorin in Rutongning syrup by HPLC.Methods The contents of paeoniflorin in Rutongning syrup were determination by HPLC.Results The calibration curre is linear in the range 16.68-122.32μg/mL（r=0.9998，n=7） for Rutongning syrup.The average recovery was 99.30﹪.RSD=0.88﹪（n=9）.Conclusion The method is sample、quick、accurate and with a reproducibility and can be used for the quality control of the preparation.

【Key words】 Rutongning syrup；paeoniflorin；HPLC；determination

乳痛寧糖漿是新疆醫科大學第一附屬醫院自制制劑，由赤芍（芍藥）、柴胡、香附、鎖陽、當歸、川芎等13味中藥制成，具有疏肝益腎、行氣活血、消痹止痛的功效，主要用于治療婦女乳腺小葉增生、乳房腫塊及乳房腫痛，我院臨床廣泛適用，療效確定。本文采用HPLC法對乳痛寧糖漿中芍藥苷進行含量測定，方法簡便、快捷、準確、重現性好、干擾少，符合醫院制劑的檢測要求。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Peseries200高效液相測譜儀（美國PE公司）；BS-224S電子分析天平（北京賽多利斯儀器系數有限公司）；UC-1000型超聲波清洗機（寧波科生儀器廠）；紫外分光光度儀1700UV島津（日本島津公司）。

1.2 試藥 芍藥苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號110796-200423）；甲醇（色譜純），超純水；乳痛寧糖漿（新疆醫科大學第一附屬醫院藥學部，批號080303，080324，080325）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：以C18化學鍵合硅膠（4.6mm×150mm，5μm）；流動相：甲醇-水|（30：70）；流速：1.0ml·min-1；柱溫：25℃；檢測波長：230nm；進樣量：10μl。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對照品13.90mg，置于25ml棕色容量瓶中，加甲醇溶液稀釋至刻度，定容。即配成每ml含556.00μg芍藥苷對照品濃貯備溶液。

2.3 供試品溶液的制備 精密吸取樣品10ml，置50ml棕色量瓶中，用甲醇溶液稀釋至刻度，定容，超聲處理40min，用0.45μm微孔濾膜器過濾，即得。

2.4 干擾試驗 按處方配置卻赤芍的乳痛寧糖漿陰性樣品，按照“2.3”項下方法制備成陰性對照品溶液，與“2.2”、“2.3”項下溶液分別進樣。結果，供試品色譜柱中在與對照品色譜柱相同保留時間處有相同色譜峰；陰性對照品在此無干擾。色譜見圖1。

2.5 線性關系考察 精密吸取芍藥苷對照品溶液0.75、1.0、2.5、3.0、3.5、5.0、5.5ml分別置于25ml棕色量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜器過濾，分別進樣，記錄色譜圖。以芍藥苷的濃度（X）為橫坐標，峰面積積分值（Y）為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為Y=13975X-29298.01（r=0.9998）。結果表明，芍藥苷濃度在16.68-122.32μg·ml-1范圍內線性關系良好。

2.6 精密度試驗 精密吸取濃度為180.00μg·ml的對照品溶液。按“2.1”項下色譜條件連續進樣共5次。記錄峰面積。結果，峰面積的平均值為414797.944，RSD=1.79%（n=5），表明儀器精密度良好。

2.7 重現性試驗 取樣品（批號：080325），按“2.3”項下方法制備6份供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定峰面積，計算芍藥苷的含量，結果，平均含量為74.01μg·ml-1，RSD=0.84%（n=6）表明該方法重現性良好。

2.8 穩定性試驗 精密吸取供試品溶液（080325）在室溫下放置，過045μg微孔濾膜，分別于0、2、4、6、8、24h測定含量，結果，RSD為1.84%（n=6），表明供試品溶液在24h內基本穩定。

2.9 加樣回收率試驗 精密吸取已知含量樣品（批號：080325）1mL，置10mL棕色容量瓶中，分別精密加入芍藥苷對照品（180.00μg·mL-1）1.5，2.0，2.5mL，按“2.4.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.4.1”項下色譜條件測定峰面積。計算加樣回收率，結果見表1。

3 討 論

3.1 通過紫外檢測波長（190-350nm），發現芍藥苷對照品溶液在229.5nm處有最大吸收波長，故實驗中的檢測波長選為230nm。

3.2 采用HPLC法測定芍藥苷含量的文獻[1-6]曾報道過多種流動相。通過大量的初期試驗發現不同配比的流動相出峰時間不同，用甲醇-水（30：70）作為流動相時，出峰時間適宜，峰形也較好，即節省了時間，也節省了流動相的用量，經濟適用。

3.3 本文采用HPLC法測定乳痛寧糖漿中芍藥苷的含量，回收率和含量測定的結果表明，此方法操作簡便，重現性好，準確快速，較符合醫院制劑快檢的要求。

參考文獻

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