多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統在臨床中的應用分析

張培良?張煥珍

【摘要】 目的 探討多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統在臨床應用中的價值。方法 100例臨床常見的惡性腫瘤患者應用多腫瘤標志物蛋白芯片技術對患者的血清進行檢測， 100例良性腫瘤患者的血清進行檢測， 分析其靈敏度和特異性并對其進行比較兩組的差異。結果 多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統對常見腫瘤患者100例進行檢測， 呈陽性85例， 陽性率85%；對照組100例呈陽性9例， 陽性率9%。結論 多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統適宜于健康體檢及腫瘤普查， 是臨床檢測腫瘤的有效手段。

【關鍵詞】 惡性腫瘤；蛋白芯片；腫瘤標志物；應用分析

蛋白芯片檢測技術是新研究領域的一種高靈敏度、高通量、高特異性且微型化的蛋白質分析技術[1]。本研究采用上海數康公司的HD2001A型生物芯片， 對已經確診的100例惡性腫瘤患者和100例良性患者進行相關分析， 探討在腫瘤臨床診斷檢測腫瘤標記物（TM）的聯合應用價值， 為腫瘤患者的早期診斷和治療提供精準的依據。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 惡性腫瘤患者為本院2012年8月～2013年10月住院患者100例， 其中男62例， 女38例， 年齡34～79， 平均年齡（53.2±7.8）歲， 其中胃癌25例， 胰腺癌15例， 乳腺癌10例， 肺癌11例， 肝癌21例， 直腸癌8例， 結腸癌10例。對照組100例， 其中肝臟疾病32例， 肺部疾病20例， 消化道疾病26例， 婦科疾病14例， 前列腺疾病8例， 兩組患者的一般資料差異無統計學意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 在患者空腹時采集外周血2 ml 對其離心分離血清， 分離后在4℃冰箱保存， 4 d左右取出檢測。檢測時將芯片的小方格內放入待測血清或標準品100 μl；恒溫37 ℃， 30 min， 100 rpm 搖床振蕩， 振蕩后取出芯片棄去孔內液體；清洗后將芯片放入洗盒， 繼續洗液， 37℃搖床， 250 rpm， 10 min振蕩洗滌， 將棄去盒內液體；重復洗滌4次；芯片小方格內加 100 μl 反應液， 同樣重復洗滌 4次；等體積將檢測液 A 和 B 混合， 加入 20 μl 混合的檢測液在膜表面， 通過蛋白芯片檢測儀進行檢測， 60 s后拍攝圖像， 進行反應數據分析。

1. 3 結果判定[2] 根據C-12 檢測系統12種腫瘤標志物的參考范圍：神經元特異性烯醇化酶（NSE）<13.0 ng/ml， 癌胚抗原（CEA）<5.0 ng/ml， 糖類抗原125（CA125）<35.0 U/ml， 糖類抗原242（CA242）<20.0 U/ml， 鐵蛋白（ferritin）<219.0 ng/ml（女）、<322.0 ng/ml（男）， 糖類抗原199（CA199）<35.0 U/ml， 糖類抗原153（CA153）<35.0 U/ml， 前列腺特異性抗原（PSA）<5.0 ng/ml， 甲胎蛋白（AFP）<20.0 ng/ml， 人絨毛膜促性腺激素（β-HCG）<3.0 ng/ml， 游離性前列腺特異性抗原（F-PSA）<1.0 ng/ml， 生長激素（HGH）<7.5 ng/ml。實驗排除溶血、脂血標本。其他具體步驟要嚴格按照C-12上的使用說明書進行操作。

1. 4 統計學方法 采用統計學軟件SPSS16.0對實驗數據進行總結、處理， 計數資料采用χ2檢驗， P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

良性疾病組與惡性腫瘤組的陽性率比較， 惡性腫瘤組的陽性率明顯比良性疾病組高（P<0.05）。C-12 蛋白芯片對惡性腫瘤檢測的陽性率85%， 靈敏度為82%。見表1。

表1 C-12蛋白芯片對各組的檢測陽性率（n， %）

分組 例數 陽性 陽性率

惡性腫瘤組 100 85 85

胃癌 25 20

肺癌 11 9

肝癌 21 19

胰腺癌 15 12

乳腺癌 10 10

直腸癌 8 7

結腸癌 10 8

良性疾病組 100 9 9

肝臟疾病 32 3

肺部疾病 20 2

婦科疾病 14 1

消化道疾病 26 3

前列腺疾病 8 0

3 討論

生物芯片是近年來醫學界一個備受矚目的醫療成果， 可以將人體的各項檢測變得非常集中化， 而且可對人體內的細胞進行簡單快速地解讀。生物芯片主要就是采用了微細加工[3， 4]。雙抗體夾心法的化學發光檢測方法是多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統是基礎， 12種腫瘤標志物的抗體被固相基質上包被， 將血清中對應的腫瘤標志物進行捕捉， 與第二抗體結合， 對其催化使其產生化學反應的光信號， 將芯片采取專門的芯片閱讀儀對腫瘤標志物進行定量檢測。

本研究對卵巢癌使用多腫瘤標志物蛋白芯片進行分析和檢測， 蛋白芯片是一種應用較為廣泛生物芯片， 蛋白芯之所以發光主要就是利用了抗體和抗原特異性的結合通過催化化學反應來進行檢測的。然后利用計算機來判斷熒光的強弱結果。蛋白芯片技術避免了過去分析方法的弱點， 具有快速讀取、高通量和樣本量少的優勢， 對于原始蛋白的提取物和血液中的蛋白質快速進行分析， 而且可以對于血液， 提取多種組織和細胞中的蛋白質信息， 所以廣泛的運用于檢測癌癥， 經過醫學研究， 該技術對于檢測腫瘤蛋白質水平的變化已經成熟， 比起其他的檢測能夠對腫瘤特征進行反映。雖然生物芯片已經成熟但是不可能達到百分百的效果， 仍會有一些患者由于病情原因被誤診。畢竟腫瘤患者在不斷地變化之中， 很難預測。蛋白芯片檢測技術的特異性和敏感性在所有目前存在的檢測手段中相對較高， 盡管達不到百分百的成功率， 但是對腫瘤做出合理而科學的檢測成功率相對還是很高的。

目前在醫學界倡導腫瘤標志物聯合檢驗的方法的人占的比率還是較大的， 因為腫瘤診斷這種方法可以提高敏感度和特異性， 在適合腫瘤臨床檢測的同時， 在臨床上對腫瘤高危患者的體檢篩查也具有顯著的意義， 在臨床診斷上C-12芯片法的基本價值也是顯著的。對陽性血清腫瘤標志物的檢驗因為有了12 項指標的聯合所以更加精確。目前所有腫瘤的標志物的指標會有所顯示。而對于單項腫瘤標志物如肺癌、 乳腺癌、 胃癌陽性比例不高的， 通過C-12芯片法的聯合檢測可以發現多項腫瘤標志物呈陽性， 這不僅為臨床治療提供有效的監測指標還有助于提高臨床診斷的靈敏度。多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統在臨床中的應用具有一定價值。

參考文獻

[1] 程建平， 張建明， 金躍.多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統在腫瘤診斷與篩查中的應用研究.中國實驗診斷學， 2008， 1（3）： 1370-1371.

[2] 陳莉彭， 劍雄， 周細國.多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統在臨床中的應用.中國醫藥導報， 2006， 3（29）：29-30.

[3] 胡興榮， 徐先早， 崔顯念， 等.多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統的應用分析.檢驗醫學與臨床， 2007， 4（10）：929-930.

[4] 潘振華.多腫瘤標志物蛋白芯片檢測技術在卵巢癌臨床應用中的評價.現代預防醫學， 2012， 39（24）：6399-6340.

[收稿日期：2014-03-11]endprint

【摘要】 目的 探討多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統在臨床應用中的價值。方法 100例臨床常見的惡性腫瘤患者應用多腫瘤標志物蛋白芯片技術對患者的血清進行檢測， 100例良性腫瘤患者的血清進行檢測， 分析其靈敏度和特異性并對其進行比較兩組的差異。結果 多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統對常見腫瘤患者100例進行檢測， 呈陽性85例， 陽性率85%；對照組100例呈陽性9例， 陽性率9%。結論 多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統適宜于健康體檢及腫瘤普查， 是臨床檢測腫瘤的有效手段。

【關鍵詞】 惡性腫瘤；蛋白芯片；腫瘤標志物；應用分析

蛋白芯片檢測技術是新研究領域的一種高靈敏度、高通量、高特異性且微型化的蛋白質分析技術[1]。本研究采用上海數康公司的HD2001A型生物芯片， 對已經確診的100例惡性腫瘤患者和100例良性患者進行相關分析， 探討在腫瘤臨床診斷檢測腫瘤標記物（TM）的聯合應用價值， 為腫瘤患者的早期診斷和治療提供精準的依據。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 惡性腫瘤患者為本院2012年8月～2013年10月住院患者100例， 其中男62例， 女38例， 年齡34～79， 平均年齡（53.2±7.8）歲， 其中胃癌25例， 胰腺癌15例， 乳腺癌10例， 肺癌11例， 肝癌21例， 直腸癌8例， 結腸癌10例。對照組100例， 其中肝臟疾病32例， 肺部疾病20例， 消化道疾病26例， 婦科疾病14例， 前列腺疾病8例， 兩組患者的一般資料差異無統計學意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 在患者空腹時采集外周血2 ml 對其離心分離血清， 分離后在4℃冰箱保存， 4 d左右取出檢測。檢測時將芯片的小方格內放入待測血清或標準品100 μl；恒溫37 ℃， 30 min， 100 rpm 搖床振蕩， 振蕩后取出芯片棄去孔內液體；清洗后將芯片放入洗盒， 繼續洗液， 37℃搖床， 250 rpm， 10 min振蕩洗滌， 將棄去盒內液體；重復洗滌4次；芯片小方格內加 100 μl 反應液， 同樣重復洗滌 4次；等體積將檢測液 A 和 B 混合， 加入 20 μl 混合的檢測液在膜表面， 通過蛋白芯片檢測儀進行檢測， 60 s后拍攝圖像， 進行反應數據分析。

1. 3 結果判定[2] 根據C-12 檢測系統12種腫瘤標志物的參考范圍：神經元特異性烯醇化酶（NSE）<13.0 ng/ml， 癌胚抗原（CEA）<5.0 ng/ml， 糖類抗原125（CA125）<35.0 U/ml， 糖類抗原242（CA242）<20.0 U/ml， 鐵蛋白（ferritin）<219.0 ng/ml（女）、<322.0 ng/ml（男）， 糖類抗原199（CA199）<35.0 U/ml， 糖類抗原153（CA153）<35.0 U/ml， 前列腺特異性抗原（PSA）<5.0 ng/ml， 甲胎蛋白（AFP）<20.0 ng/ml， 人絨毛膜促性腺激素（β-HCG）<3.0 ng/ml， 游離性前列腺特異性抗原（F-PSA）<1.0 ng/ml， 生長激素（HGH）<7.5 ng/ml。實驗排除溶血、脂血標本。其他具體步驟要嚴格按照C-12上的使用說明書進行操作。

1. 4 統計學方法 采用統計學軟件SPSS16.0對實驗數據進行總結、處理， 計數資料采用χ2檢驗， P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

良性疾病組與惡性腫瘤組的陽性率比較， 惡性腫瘤組的陽性率明顯比良性疾病組高（P<0.05）。C-12 蛋白芯片對惡性腫瘤檢測的陽性率85%， 靈敏度為82%。見表1。

表1 C-12蛋白芯片對各組的檢測陽性率（n， %）

分組 例數 陽性 陽性率

惡性腫瘤組 100 85 85

胃癌 25 20

肺癌 11 9

肝癌 21 19

胰腺癌 15 12

乳腺癌 10 10

直腸癌 8 7

結腸癌 10 8

良性疾病組 100 9 9

肝臟疾病 32 3

肺部疾病 20 2

婦科疾病 14 1

消化道疾病 26 3

前列腺疾病 8 0

3 討論

生物芯片是近年來醫學界一個備受矚目的醫療成果， 可以將人體的各項檢測變得非常集中化， 而且可對人體內的細胞進行簡單快速地解讀。生物芯片主要就是采用了微細加工[3， 4]。雙抗體夾心法的化學發光檢測方法是多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統是基礎， 12種腫瘤標志物的抗體被固相基質上包被， 將血清中對應的腫瘤標志物進行捕捉， 與第二抗體結合， 對其催化使其產生化學反應的光信號， 將芯片采取專門的芯片閱讀儀對腫瘤標志物進行定量檢測。

本研究對卵巢癌使用多腫瘤標志物蛋白芯片進行分析和檢測， 蛋白芯片是一種應用較為廣泛生物芯片， 蛋白芯之所以發光主要就是利用了抗體和抗原特異性的結合通過催化化學反應來進行檢測的。然后利用計算機來判斷熒光的強弱結果。蛋白芯片技術避免了過去分析方法的弱點， 具有快速讀取、高通量和樣本量少的優勢， 對于原始蛋白的提取物和血液中的蛋白質快速進行分析， 而且可以對于血液， 提取多種組織和細胞中的蛋白質信息， 所以廣泛的運用于檢測癌癥， 經過醫學研究， 該技術對于檢測腫瘤蛋白質水平的變化已經成熟， 比起其他的檢測能夠對腫瘤特征進行反映。雖然生物芯片已經成熟但是不可能達到百分百的效果， 仍會有一些患者由于病情原因被誤診。畢竟腫瘤患者在不斷地變化之中， 很難預測。蛋白芯片檢測技術的特異性和敏感性在所有目前存在的檢測手段中相對較高， 盡管達不到百分百的成功率， 但是對腫瘤做出合理而科學的檢測成功率相對還是很高的。

目前在醫學界倡導腫瘤標志物聯合檢驗的方法的人占的比率還是較大的， 因為腫瘤診斷這種方法可以提高敏感度和特異性， 在適合腫瘤臨床檢測的同時， 在臨床上對腫瘤高危患者的體檢篩查也具有顯著的意義， 在臨床診斷上C-12芯片法的基本價值也是顯著的。對陽性血清腫瘤標志物的檢驗因為有了12 項指標的聯合所以更加精確。目前所有腫瘤的標志物的指標會有所顯示。而對于單項腫瘤標志物如肺癌、 乳腺癌、 胃癌陽性比例不高的， 通過C-12芯片法的聯合檢測可以發現多項腫瘤標志物呈陽性， 這不僅為臨床治療提供有效的監測指標還有助于提高臨床診斷的靈敏度。多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統在臨床中的應用具有一定價值。

參考文獻

[1] 程建平， 張建明， 金躍.多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統在腫瘤診斷與篩查中的應用研究.中國實驗診斷學， 2008， 1（3）： 1370-1371.

[2] 陳莉彭， 劍雄， 周細國.多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統在臨床中的應用.中國醫藥導報， 2006， 3（29）：29-30.

[3] 胡興榮， 徐先早， 崔顯念， 等.多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統的應用分析.檢驗醫學與臨床， 2007， 4（10）：929-930.

[4] 潘振華.多腫瘤標志物蛋白芯片檢測技術在卵巢癌臨床應用中的評價.現代預防醫學， 2012， 39（24）：6399-6340.

[收稿日期：2014-03-11]endprint

【摘要】 目的 探討多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統在臨床應用中的價值。方法 100例臨床常見的惡性腫瘤患者應用多腫瘤標志物蛋白芯片技術對患者的血清進行檢測， 100例良性腫瘤患者的血清進行檢測， 分析其靈敏度和特異性并對其進行比較兩組的差異。結果 多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統對常見腫瘤患者100例進行檢測， 呈陽性85例， 陽性率85%；對照組100例呈陽性9例， 陽性率9%。結論 多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統適宜于健康體檢及腫瘤普查， 是臨床檢測腫瘤的有效手段。

【關鍵詞】 惡性腫瘤；蛋白芯片；腫瘤標志物；應用分析

蛋白芯片檢測技術是新研究領域的一種高靈敏度、高通量、高特異性且微型化的蛋白質分析技術[1]。本研究采用上海數康公司的HD2001A型生物芯片， 對已經確診的100例惡性腫瘤患者和100例良性患者進行相關分析， 探討在腫瘤臨床診斷檢測腫瘤標記物（TM）的聯合應用價值， 為腫瘤患者的早期診斷和治療提供精準的依據。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 惡性腫瘤患者為本院2012年8月～2013年10月住院患者100例， 其中男62例， 女38例， 年齡34～79， 平均年齡（53.2±7.8）歲， 其中胃癌25例， 胰腺癌15例， 乳腺癌10例， 肺癌11例， 肝癌21例， 直腸癌8例， 結腸癌10例。對照組100例， 其中肝臟疾病32例， 肺部疾病20例， 消化道疾病26例， 婦科疾病14例， 前列腺疾病8例， 兩組患者的一般資料差異無統計學意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 在患者空腹時采集外周血2 ml 對其離心分離血清， 分離后在4℃冰箱保存， 4 d左右取出檢測。檢測時將芯片的小方格內放入待測血清或標準品100 μl；恒溫37 ℃， 30 min， 100 rpm 搖床振蕩， 振蕩后取出芯片棄去孔內液體；清洗后將芯片放入洗盒， 繼續洗液， 37℃搖床， 250 rpm， 10 min振蕩洗滌， 將棄去盒內液體；重復洗滌4次；芯片小方格內加 100 μl 反應液， 同樣重復洗滌 4次；等體積將檢測液 A 和 B 混合， 加入 20 μl 混合的檢測液在膜表面， 通過蛋白芯片檢測儀進行檢測， 60 s后拍攝圖像， 進行反應數據分析。

1. 3 結果判定[2] 根據C-12 檢測系統12種腫瘤標志物的參考范圍：神經元特異性烯醇化酶（NSE）<13.0 ng/ml， 癌胚抗原（CEA）<5.0 ng/ml， 糖類抗原125（CA125）<35.0 U/ml， 糖類抗原242（CA242）<20.0 U/ml， 鐵蛋白（ferritin）<219.0 ng/ml（女）、<322.0 ng/ml（男）， 糖類抗原199（CA199）<35.0 U/ml， 糖類抗原153（CA153）<35.0 U/ml， 前列腺特異性抗原（PSA）<5.0 ng/ml， 甲胎蛋白（AFP）<20.0 ng/ml， 人絨毛膜促性腺激素（β-HCG）<3.0 ng/ml， 游離性前列腺特異性抗原（F-PSA）<1.0 ng/ml， 生長激素（HGH）<7.5 ng/ml。實驗排除溶血、脂血標本。其他具體步驟要嚴格按照C-12上的使用說明書進行操作。

1. 4 統計學方法 采用統計學軟件SPSS16.0對實驗數據進行總結、處理， 計數資料采用χ2檢驗， P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

良性疾病組與惡性腫瘤組的陽性率比較， 惡性腫瘤組的陽性率明顯比良性疾病組高（P<0.05）。C-12 蛋白芯片對惡性腫瘤檢測的陽性率85%， 靈敏度為82%。見表1。

表1 C-12蛋白芯片對各組的檢測陽性率（n， %）

分組 例數 陽性 陽性率

惡性腫瘤組 100 85 85

胃癌 25 20

肺癌 11 9

肝癌 21 19

胰腺癌 15 12

乳腺癌 10 10

直腸癌 8 7

結腸癌 10 8

良性疾病組 100 9 9

肝臟疾病 32 3

肺部疾病 20 2

婦科疾病 14 1

消化道疾病 26 3

前列腺疾病 8 0

3 討論

生物芯片是近年來醫學界一個備受矚目的醫療成果， 可以將人體的各項檢測變得非常集中化， 而且可對人體內的細胞進行簡單快速地解讀。生物芯片主要就是采用了微細加工[3， 4]。雙抗體夾心法的化學發光檢測方法是多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統是基礎， 12種腫瘤標志物的抗體被固相基質上包被， 將血清中對應的腫瘤標志物進行捕捉， 與第二抗體結合， 對其催化使其產生化學反應的光信號， 將芯片采取專門的芯片閱讀儀對腫瘤標志物進行定量檢測。

本研究對卵巢癌使用多腫瘤標志物蛋白芯片進行分析和檢測， 蛋白芯片是一種應用較為廣泛生物芯片， 蛋白芯之所以發光主要就是利用了抗體和抗原特異性的結合通過催化化學反應來進行檢測的。然后利用計算機來判斷熒光的強弱結果。蛋白芯片技術避免了過去分析方法的弱點， 具有快速讀取、高通量和樣本量少的優勢， 對于原始蛋白的提取物和血液中的蛋白質快速進行分析， 而且可以對于血液， 提取多種組織和細胞中的蛋白質信息， 所以廣泛的運用于檢測癌癥， 經過醫學研究， 該技術對于檢測腫瘤蛋白質水平的變化已經成熟， 比起其他的檢測能夠對腫瘤特征進行反映。雖然生物芯片已經成熟但是不可能達到百分百的效果， 仍會有一些患者由于病情原因被誤診。畢竟腫瘤患者在不斷地變化之中， 很難預測。蛋白芯片檢測技術的特異性和敏感性在所有目前存在的檢測手段中相對較高， 盡管達不到百分百的成功率， 但是對腫瘤做出合理而科學的檢測成功率相對還是很高的。

目前在醫學界倡導腫瘤標志物聯合檢驗的方法的人占的比率還是較大的， 因為腫瘤診斷這種方法可以提高敏感度和特異性， 在適合腫瘤臨床檢測的同時， 在臨床上對腫瘤高危患者的體檢篩查也具有顯著的意義， 在臨床診斷上C-12芯片法的基本價值也是顯著的。對陽性血清腫瘤標志物的檢驗因為有了12 項指標的聯合所以更加精確。目前所有腫瘤的標志物的指標會有所顯示。而對于單項腫瘤標志物如肺癌、 乳腺癌、 胃癌陽性比例不高的， 通過C-12芯片法的聯合檢測可以發現多項腫瘤標志物呈陽性， 這不僅為臨床治療提供有效的監測指標還有助于提高臨床診斷的靈敏度。多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統在臨床中的應用具有一定價值。

參考文獻

[1] 程建平， 張建明， 金躍.多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統在腫瘤診斷與篩查中的應用研究.中國實驗診斷學， 2008， 1（3）： 1370-1371.

[2] 陳莉彭， 劍雄， 周細國.多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統在臨床中的應用.中國醫藥導報， 2006， 3（29）：29-30.

[3] 胡興榮， 徐先早， 崔顯念， 等.多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統的應用分析.檢驗醫學與臨床， 2007， 4（10）：929-930.

[4] 潘振華.多腫瘤標志物蛋白芯片檢測技術在卵巢癌臨床應用中的評價.現代預防醫學， 2012， 39（24）：6399-6340.

[收稿日期：2014-03-11]endprint