不同免疫分析法檢測(cè)甲胎蛋白在原發(fā)性肝癌診斷中的價(jià)值研究

趙晨暉，趙 霞，陸巖平，潘萬(wàn)俊，毛菊秀（甘肅省金昌市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 737100）

肝癌在我國(guó)發(fā)病率較高，在早期能夠發(fā)現(xiàn)肝癌可以明顯提高患者的存活率。對(duì)甲胎蛋白（AFP）進(jìn)行定量檢測(cè)能夠在早期發(fā)現(xiàn)患者患有肝癌，為后續(xù)的臨床治療提供依據(jù)。時(shí)間分辨熒光分析法（TRFIA）是近十年發(fā)展起來(lái)的非同位素免疫分析技術(shù)，是目前最靈敏的微量分析技術(shù)［1］。本文主要采用TRFFIA以及電光學(xué)發(fā)光免疫（ECLIA）兩種方法來(lái)檢測(cè)原發(fā)性肝癌（PHC）患者血清AFP濃度，研究?jī)煞N方法的相關(guān)性，通過(guò)ROC曲線(xiàn)來(lái)進(jìn)行細(xì)致的分析，最后確定采用上述兩種方法測(cè)定AFP在進(jìn)行原發(fā)性肝癌診斷過(guò)程中具有的價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2009年11月至2012年11月228例原發(fā)性肝癌患者以及252例發(fā)生肝良性病變（包含118例肝硬化和134例慢性肝炎）的患者。228例原發(fā)性肝癌患者中，男148例，女84例；平均年齡（49.2±3.5）歲。118例肝硬化患者中，男64例，女54例；平均年齡（52.2±1.8）歲。134例慢性肝炎患者中男114例，女20例；平均年齡（54.2±1.6）歲。所有患者血清標(biāo)本全部由本院的腫瘤科進(jìn)行提供，并且全部患者全部通過(guò)手術(shù)以及具體的診斷最終確診。另外選擇同期在本院健康體檢的健康者596例作為對(duì)照組，其中男370例，女226例；平均年齡（51.1±5.2）歲；對(duì)照組經(jīng)過(guò)檢查最終結(jié)果顯示均沒(méi)有出現(xiàn)良惡性腫瘤的情況。

1.2 方法 采用TRFIA以及ECLIA在同一時(shí)間對(duì)每組患者的血清AFP水平進(jìn)行檢測(cè)。在ECLIA測(cè)定過(guò)程中，采用美國(guó)雅培AXSYM化學(xué)發(fā)光免疫分析儀對(duì)AFP進(jìn)行有效測(cè)定。取被檢驗(yàn)患者的肘部靜脈血，在分離血清的基礎(chǔ)上，將其保存于合適的溫度（－20℃）中，其余步驟均按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行嚴(yán)格操作。在利用TRFIA進(jìn)行測(cè)定的過(guò)程中，選擇Auto Delfia－12 345 以及相關(guān)的配套試劑來(lái)對(duì)AFP進(jìn)行有效測(cè)定［2］，選擇TRFIA檢測(cè)儀作為本次測(cè)定的測(cè)量?jī)x，在進(jìn)行具體操作的過(guò)程中全部按照試劑盒的相關(guān)說(shuō)明來(lái)完成具體的操作［3］。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SAS6.12來(lái)對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行準(zhǔn)確分析，計(jì)量資料以表示［4］。利用 Wilcoxon秩和檢驗(yàn)來(lái)表示每組數(shù)據(jù)間的比較，采用Kruska－Wallis秩和檢驗(yàn)來(lái)進(jìn)行相關(guān)的比較［5］。利用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件MedCal針對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行ROC曲線(xiàn)分析。將健康患者的95%區(qū)間作為醫(yī)學(xué)正常取值的范圍，通過(guò)Cut off值來(lái)找到方法的不同點(diǎn)。利用ROC曲線(xiàn)最大診斷準(zhǔn)確率對(duì)臨床界限值進(jìn)行有效確定。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 血清AFP的濃度 TRFIA以及ECLIA檢測(cè)各組患者血清AFP的濃度見(jiàn)表1。結(jié)果可見(jiàn)不論采用何種方法檢測(cè)方法，原發(fā)性肝癌組AFP濃度明顯高于對(duì)照組、肝炎組以及肝硬化組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；肝良性病變患者中，肝炎組患者AFP濃度與肝硬化組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 兩種檢測(cè)方法所測(cè)得每組患者以及對(duì)照組血清AFP濃度（，ng／mL）

表1 兩種檢測(cè)方法所測(cè)得每組患者以及對(duì)照組血清AFP濃度（，ng／mL）

組別 n AFP TRFIA法 ECLIA法228 164.19±476.92 109.18±213.48肝硬化組 118 5.29±81.16 6.15±52.91肝炎組 134 7.27±29.36 11.78±26.45對(duì)照組原發(fā)性肝癌組596 3.59±2.02 3.98±5.19

表2 通過(guò)對(duì)照組的95%可信區(qū)間所得出的Cut off值對(duì)比TRFIA與ECLIA的診斷特性

2.2 利用ROC曲線(xiàn)分析患者血清AFP濃度的情況 利用ROC曲線(xiàn)分析TRFIA以及ECLIA完成檢測(cè)后獲得的數(shù)據(jù)，結(jié)果顯示兩種方法診斷的靈敏度、特異性以及準(zhǔn)確率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并且TRFIA較為突出，見(jiàn)表2、3。

表3 利用ROC曲線(xiàn)最終得到的Cut off值比較TRFIA與ECLIA診斷的不同特性

3 討 論

AFP屬于一種癌胚糖蛋白，其主要由卵黃囊以及胎兒的肝細(xì)胞合成，一旦出生后就會(huì)立刻消失［6］。AFP與原發(fā)性肝癌、胃腫瘤、肺癌以及膽管癌等諸多的疾病有關(guān)。在部分患有肝炎以及肝硬化的患者中，都存在升高的情況［7］。

原發(fā)性肝癌患者在病發(fā)的過(guò)程中，已經(jīng)受損的肝細(xì)胞正在不斷地進(jìn)行再生，并且逐漸幼稚化，在這個(gè)過(guò)程之后便會(huì)逐漸演變成癌細(xì)胞，進(jìn)而也會(huì)逐漸產(chǎn)生AFP，并且這種能力在不斷增強(qiáng)。當(dāng)前，在進(jìn)行肝癌的篩查工作以及肝癌的診斷等一系列工作中，AFP被廣泛的應(yīng)用，并且在逐漸發(fā)展［8］。

采用有效的方法對(duì)AFP進(jìn)行相關(guān)性分析顯得至關(guān)重要［9］。能進(jìn)行AFP檢測(cè)的方法很多，例如RIA以及TRFIA等，其都能夠獲得良好的檢測(cè)結(jié)果。TRFIA屬于一種非放射免疫標(biāo)記技術(shù)，主要采用鑭系金屬離子來(lái)當(dāng)作示蹤物，有效采用時(shí)間分辨熒光測(cè)定法將不屬于特異熒光進(jìn)行排除，能達(dá)到超靈敏檢測(cè)。此種金屬離子能夠?qū)χT多蛋白質(zhì)或者激素等進(jìn)行有效標(biāo)記，最終應(yīng)用于免疫學(xué)檢測(cè)以及測(cè)定細(xì)胞活性等一系列的工作中。ECLIA法原理分析：夾心復(fù)合物（AFP、生物素包被、特異抗體）聯(lián)合鏈合素，最終生物、鏈合素二者結(jié)合衍生復(fù)合物（固體），吸附于電極的基礎(chǔ)上后洗去存在的游離物。比較所有檢測(cè)方法具有的靈敏度、穩(wěn)定性以及線(xiàn)性范圍發(fā)現(xiàn)，TRFIA具有明顯的優(yōu)勢(shì)，因此被廣泛的應(yīng)用于醫(yī)學(xué)臨床中。

本研究中，選擇對(duì)照組健康者可信區(qū)間95%的范圍來(lái)作為醫(yī)學(xué)中正常的取值范圍，TRFIA與ECLIA方法診斷原發(fā)性肝癌的臨床界限值分別為7.32、24.18ng／mL。TRFIA診斷原發(fā)性肝癌的靈敏度為46.8%，特異性為93.2%，診斷準(zhǔn)確率非常高；與ECLIA相比，兩種方法診斷的靈敏度、特異性以及準(zhǔn)確率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。采用ROC曲線(xiàn)來(lái)有效確定臨床的界限值。因?yàn)槭軝z人群的不同，因此需要設(shè)定不同的臨床界限值，對(duì)于AFP而言，其均存在較大的特異性以及敏感性。對(duì)于一些出現(xiàn)肝良性病變的患者，通常也會(huì)見(jiàn)到患者的AFP出現(xiàn)了增高的情況，血清AFP的水平都不符合具體標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)而導(dǎo)致利用AFP在對(duì)肝癌患者進(jìn)行診斷的過(guò)程中，沒(méi)有足夠的特異性。即使通過(guò)將臨床界限值提高能將特異性提高，但是同樣會(huì)在很大程度上將其檢測(cè)具有的靈敏度降低［10］。

在本次的研究中，通過(guò)TRFIA來(lái)測(cè)定原發(fā)性肝癌患者，靈敏度、特異性以及準(zhǔn)確率等均高于ECLIA。TRFIA對(duì)人們的身體也不會(huì)造成任何傷害，不會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染，可以滿(mǎn)足患者在臨床上的諸多需求，并且其組成系統(tǒng)具有最優(yōu)化的特點(diǎn)，并且操作非常精準(zhǔn)，是臨床上首選的一種方法，值得推廣。

［1］黃彩云，韓素桂，賈紅蓮，等.聯(lián)合檢測(cè)血清甲胎蛋白異質(zhì)體濃度與甲胎蛋白異質(zhì)體百分含量在原發(fā)性肝癌診斷中的價(jià)值［J］.華西醫(yī)學(xué)，2013，5（5）：199－202.

［2］花海洋.聯(lián)合檢測(cè)血清AFP與PHCA、CA19－9等對(duì)肝癌診斷價(jià)值的研究［D］.承德：承德醫(yī)學(xué)院，2012：332－339.

［3］高文峰，鄭加生，孫斌.甲胎蛋白在原發(fā)性肝癌診斷中的臨床價(jià)值［J］.當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2010，11（32）：19－20.

［4］張志華.甲胎蛋白異質(zhì)體在原發(fā)性肝癌診斷中的臨床應(yīng)用［J］.中國(guó)保健營(yíng)養(yǎng)：下旬刊，2012，22（10）：4140－4141.

［5］許成新，褚邦勇，徐玖飛，等.甲胎蛋白、甲胎蛋白異質(zhì)體、鐵蛋白和腫瘤相關(guān)因子聯(lián)合檢測(cè)在原發(fā)性肝癌診斷中的價(jià)值［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2012，22（2）：308－309.

［6］徐偉松，劉玉峰，范輝，等.聯(lián)合檢測(cè)AFP、C反應(yīng)蛋白在原發(fā)性肝癌診斷中的臨床意義［J］.臨床肝膽病雜志，2011，10（10）：1055－1057.

［7］王雪梅，蘇琴，熊茜，等.甲胎蛋白異質(zhì)體的檢測(cè)在肝癌中的臨床應(yīng)用［J］.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，11（21）：2881－2882.

［8］韓朝輝，張余川，吳清艷.甲胎蛋白、癌胚抗原和糖類(lèi)抗原199聯(lián)合檢測(cè)在原發(fā)性肝癌診斷中的應(yīng)用研究［J］.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，10（4）：92－93.

［9］周澤云.甲胎蛋白、甲胎蛋白異質(zhì)體3和高爾基體蛋白73聯(lián)合檢測(cè)在原發(fā)性肝癌診斷中的臨床意義［J］.中國(guó)民康醫(yī)學(xué)，2013，25（6）：26.

［10］鐘安軍.聯(lián)合檢測(cè)甲胎蛋白與癌胚抗原在原發(fā)性肝癌與轉(zhuǎn)移性肝癌鑒別診斷中的應(yīng)用［J］.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2011，30（23）：77－78.