大腸癌中CIP2A表達與預后相關性研究

黃文峰　余志金　何偉鋒　鐘選芳　張曉慧　甘愛華　許岸高

【摘要】 目的：探討CIP2A的表達率與患者預后的關系。方法：收集245例臨床預后資料完整的大腸癌的標本，采用免疫組化染色CIP2A多克隆抗體，觀察CIP2A表達情況。采用 字2和Spearman等級相關檢驗的統計方法研究結大腸癌表達率與臨床病理特征的關系。生存數據采用Kaplan-Meier法分析并繪制生存曲線，應用Log-rank test檢驗差異性。結果：245例大腸癌組織中CIP2A表達陽性的有152例。CIP2A表達水平與性別、年齡、腫瘤分化程度、腫瘤部位及腫瘤大小無明顯相關性（P>0.05）；CIP2A的表達與大腸癌TNM分期直接相關（P<0.05）。CIP2A表達與TNM分期有Spearman相關（P<0.05）。CIP2A高表達者的生存曲線較低表達組低；且5年明顯低于低表達組，差異有統計學意義（ 字2=20.624，P=0.000）。結論：本研究顯示CIP2A可能是大癌預后的預測指標，有可作為臨床醫師判斷大腸癌患者預后預測指標。

【關鍵詞】 大腸癌； CIP2A； 免疫組織化學染色

世界范圍內大腸癌發病率僅次于肺癌和乳腺癌居第3位，近二三十年來大腸癌發病率和死亡率明顯上升[1]。本文應用免疫組化的方法檢測大癌中CIP2A（cancerous inhibitor of PP2A，蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子）的表達情況，結合患者臨床病理學資料分析其與術后生存期的關系，旨在探討CIP2A與大腸癌預后的關系，為大癌的病理診斷、預后判斷以及治療提供客觀的參考指標。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2004年1月-2006年1月在惠州市中心人民醫院行根治性切除術的有預后結果的大腸癌患者245例。所有病例組織切片經1名病理學醫師核實，所有患者術前均未經任何系統的放療和化療，均有5年以上隨訪資料，且用于分析的各項指標記錄完整。本研究經醫院倫理委員會同意。245例大腸癌患者中男134例（54.7%），女111例（45.3%）；發病部位：直腸癌165例（67.3%）、結腸癌80例（32.7%）；腫瘤大小：直徑≤5 cm 149例（60.8%），直徑>5 cm 96例（39.2%）；腫瘤TNM分期：Ⅰ期46例（18.8%），Ⅱ期112例（45.7%），Ⅲ期42例（17.1%），Ⅳ期45例（18.4%）。其中高分化124例（50.6%），中分化93例（38.0%），低分化28例（11.4%）。

1.2 試劑及免疫組化染色方法 染色采用免疫組合SP法，一抗為兔抗人CIP2A多克隆抗體（工作濃度1∶200），購自abcam公司；HRP標記羊抗兔多聚體（產品編號：PV6001）、DAB顯色液試劑盒、I抗稀釋液、枸櫞酸鹽緩沖液（pH 6.0），均購自北京中衫金橋公司。

1.3 結果判斷 用PBS液代替一抗作為每次染色的空白對照；陽性對照，采用多次預實驗時均陽性的切片作為陽性對照。根據陽性細胞染色強度以及陽性細胞在全部癌細胞中所占比例判定實驗結果：（1）按細胞染色強度記分，無陽性反應細胞為0分，淺黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。（2）按顯色細胞數記分，陽性細胞數<1/3為l分，陽性細胞數1/3～2/3為2分，陽性細胞數>2/3為3分。積分數=A×B。A×B=0判斷為（-），A×B=l～2判斷為（+），A×B=3～4判斷為（++），A×B=6～9判斷為（+++）。

1.4 統計學處理 使用SPSS 13.0統計學軟件對臨床病理參數及各蛋白表達進行 字2檢驗，應用Spearman等級相關分析統計各指標間的相關性。對單因素分析有意義的變量應用COX模型進行多因素分析。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CIP2A在大腸癌組織中的表達情況 CIP2A蛋白在大腸癌組織中主要定位于細胞質中，部分細胞核有點狀表達，在正常腺體增生部位，亦可見少量的上皮細胞中有CIP2A蛋白的點狀表達。245例大腸癌組織中有152例（62.0%）可檢測到陽性表達（包括弱陽性、陽性、強陽性），而93例CIP2A表達陰性（38.0%）。91例表達陽性或者強陽性的組織，分類為高表達；154例陰性或弱陽性組織，分類為低表達。

2.2 大腸癌中CIP2A表達水平與臨床病理學特征的關系 CIP2A表達水平與性別（P=0.838）、年齡（P=0.789）、腫瘤分化程度（P=0.024）、腫瘤部位（P=0.136）及腫瘤大小（P=0.859）無明顯相關性；CIP2A的表達與大腸癌TNM分期直接相關（P=0.024）；Spearman分析CIP2A表達率與TNM分期正相關（P=0.004）。見表1、表2。

2.3 大腸癌CIP2A陽性表達與患者5年生存率的關系 用Kaplan-Meier法繪制CIP2A表達與患者5年生存率關系的生存曲線，直觀生存曲線可見CIP2A高表達組的生存曲線較低表達組低（圖1）。CIP2A低表達組5年生存率66.9%，明顯高于高表達組的37.4%，兩組Log-rank檢驗差異有統計學意義（ 字2=20.624，P=0.000）。

表1 CIP2A表達水平與臨床病理學特征的關系 例

臨床病理特征 CIP2A表達 P值

低 高

性別 男（n=134） 85 49 0.838

女（n=111） 69 42

年齡 ≤65歲（n=140） 89 51 0.789

>65歲（n=105） 65 40

TNM分期 Ⅰ（n=46） 33 13 0.024

Ⅱ（n=112） 77 35

Ⅲ（n=42） 23 19

Ⅳ（n=45） 21 24

組織分化 高（n=124） 84 40 0.240endprint

中（n=93） 55 38

低（n=28） 15 13

腫瘤部位 直腸（n=165） 109 56 0.136

結腸（n=80） 45 35

腫瘤大小 ≤5 cm（n=149） 93 56 0.859

>5 cm（n=96） 61 35

表2 CIP2A表達水平與臨床病理學特征的Spearman分析

臨床病理特征 CIP2A表達

Spearman相關系數 P值

性別 0.013 0.838

年齡 0.017 0.790

TNM分期 0.186 0.004

分化程度 0.108 0.092

腫瘤部位 0.095 0.137

腫瘤大小 -0.011 0.859

圖1 CIP2A表達與5年生存率關系的生存曲線

3 討論

CIP2A又名KIAA1524或P90。CIP2A可以通過抑制PP2A與致癌轉錄因子c-Myc相互作用，抑制PP2A對c-Myc基因第62位絲氨酸的去磷酸，因而抑制了c-Myc蛋白的水解和增加c-Myc穩定性[2]。而c-Myc是體內重要的原癌基因，在細胞的增殖和分化過程中具有重要作用，c-Myc過度表達又會導致正常細胞的惡性轉化[3]。大量研究表明腫瘤中CIP2A的增強可穩定MYC基因表達，MYC亦可直接調節CIP2A基因的表達；而分別下調這兩種癌基因均會使對方蛋白表達受到抑制；基于這些結果，表明CIP2A與MYC之間可能存在一個正反饋調節[4-5]。

Katz等[6]對口腔鱗癌和不典型增生中CIP2A的表達和定位進行了研究，證實CIP2A在口腔鱗癌中高表達。同時該研究進一步表明CIP2A可能在口腔細胞惡性轉化起重要作用，預示它可能是一個潛在的口腔鱗癌化療靶點。相關研究表明，CIP2A在結腸癌、胃癌、肝癌和前列腺癌等過表達，但其機制及其與臨床的預后關系尚不明確[7-8]。但有研究表明，在大多數食管癌中CIP2A與c-MYC均有表達，但CIP2A與c-myc對生存率沒有影響[9-15]。

Xu等[10]通過研究非小細胞肺癌中和正常肺組織中的表達情況，結果提示具有顯著性差異，CIP2A在非小細胞癌中的表達和TNM分期有關，且CIP2A是非小細胞肺癌患者獨立的預后因素。周等[11]研究表明CIP2A、c-myc蛋白在BLBC中的表達明顯高于正常乳腺組織，且與BLBC淋巴結轉移及臨床分期有關。也進一步支持CIP2A與c-myc之間的正反饋調節作用。Wang等[12]通過多因素分析表明CIP2A的表達是胰腺導管腺癌患者的獨立預后因素，與筆者研究結果相似。在245例大腸癌患者標本中，陽性表達152例（62.0%），提示CIP2A在結直腸腫瘤細胞中表達增強。通過分析大腸癌CIP2A表達率與臨床病理學特征之間的關系，提示CIP2A表達率與大腸癌TNM分級之間差異有統計學意義（P=0.024），經過Spearman相關分析表明表達率與大腸癌TNM分級正相關（相關系數為0.186，P=0.004）。CIP2A高表達提示腫瘤惡性程度高；該結果提示CIP2A可能與大腸癌進展有關，有可能作為一個生物標記判斷大腸癌患者的預后因素。進一步通過Kaplan-Meier法分析生存因素，表明大腸癌患者生存率與CIP2A表達水平及腫瘤TNM分期顯著相關，CIP2A高表達患者5年生存率比低表達患者低，腫瘤分期越高，患者生存率越低；而與患者年齡、性別及分化程度等并無明顯相關。

通過統計分析CIP2A表達率與臨床病理參數之間的關系，提示CIP2A表達率與大腸癌TNM分級密切相關，有可能與大腸癌進展有關，有可能作為一個生物標記判斷大腸癌患者的預后因素。

參考文獻

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（收稿日期：2014-02-21） （本文編輯：蔡元元）endprint

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