細胞角蛋白19的表達對原發性肝癌術后的預后價值＊

楊李軍，徐土炳（．重慶市公共衛生醫療救治中心 400036；．中國人民解放軍第一六醫院普通外科，新疆烏魯木齊 836500）

腫瘤的治療策略主要是基于腫瘤進展階段的引導。對肝癌（HCC）的臨床分期所采用的巴塞羅那臨床肝癌分期系統（BCLC）已經被廣泛認可［1］。盡管考慮到了HCC患者的腫瘤分期、肝功能以及整體身體狀況，對于相同的治療手段，患者可能會出現非常不同的結果。曾有學者建議，肝癌在分子和形態學特征上的異質性，可能與治療效果密切相關［2－4］。本文旨在觀察細胞角蛋白（CK）19對原發性肝細胞癌肝切除術治療預后的價值。

1 材料與方法

1．1 一般資料 所有病例均選自重慶市公共衛生醫療救治中心2005年1月至2009年4月手術切除的肝臟標本。所有患者標本具有病理檢查證實為原發性肝細胞癌，共152例，其中男117例，女35例，平均年齡（56．0±12．3）歲。這些患者經過Child－Pugh分級計分制顯示均保存完好的肝功能。所有患者均未經歷術前的癌癥相關治療，包括肝動脈栓塞化療。

1．2 臨床特點 CK19陽性HCC和CK19陰性HCC患者的臨床資料的比較見表1。

1．3 肝癌的診斷標準 根據世界衛生組織定義的形態學標準，根據蘇木精伊紅（HE）染色結果來診斷肝癌。埃德蒙森和Steiner分級系統（ES，Ⅰ－Ⅳ）被用來評估肝癌分化的程度。

1．4 CK19陽性檢測 CK19抗體（單克隆抗體，DAKO，Glostrup，丹麥，1∶50），以檢測在肝癌組織中CK19陽性。CK19陽性被定義為大于或等于5%的中度以上的腫瘤細胞膜和（或）胞質中的表達。

表1 CK19＋HCC和CK19－HCC患者的臨床資料的比較［n（%）］

1．5 隨訪 患者進行定期隨訪。收集患者肝功能和腫瘤標志物的數據。每6個月定期進行肝臟CT的檢查。所有患者隨訪直至死亡或至少12個月的時間。復發定義為術后出現新的病變。早期復發定義為任何12個月內復發。所有復發病例均進行腫瘤病理組織學分析。

1．6 統計學方法 使用SPSS15．0軟件進行統計分析。臨床病理特征之間的比較采用χ2檢驗。采用Kaplan－Meier法計算總生存期（OS），并使用Log－rank檢驗生存率的差異。原發性肝癌根治性切除術后預后影響因素的單因素分析采用logrank檢驗評估。多因素分析采用Cox比例風險模型。

2 結 果

2．1 病理評估 肝癌的診斷是根據HE染色結果。152例中109例為CK19陽性HCC患者，43例為CK19陰性HCC患者（圖1）。

圖1 原發性肝癌的病理特征（HE×200）

2．2 臨床預后的比較 自2005年7月1日起隨訪至2013年5月31日，所有患者中共失訪6例，共有146例具有完整資料。其中CK19陰性41例，CK19陽性105例。隨訪成功率為94．1%。CK19陰性的患者術后1年和5年總生存率分別為90．7%和80．4%；CK19陽性組術后1年和5年總生存率分別為66．7%和32．2%，差異具有統計學意義。

2．3 原發性肝癌根治性切除后的預后因素分析 影響肝切除術后的因素包括年齡、性別、肝硬化、腫瘤大小、腫瘤數目、衛星結節共存、血管侵犯、淋巴結轉移等。本研究在調整了這些危險因素的干擾后，CK19陽性仍是影響患者預后的獨立危險因素（表2）。

表2 原發性肝癌肝切除術的預后影響因素

3 討 論

雖然目前世界衛生組織對于原發性肝癌的分類仍是指導治療的標準，但是隨著研究的進展，現代醫學更加注重形態表型類別與病理遺傳的影響［5］。幾項臨床研究支持在肝癌患者的分類中存在多種亞群，而其中CK19陽性表達就是一種重要的表型［6］。已經有研究表明，盡管在形態上類似肝癌的治療效果也會存在著截然不同的結果，但正如本研究中所證實，CK19陽性的原發性肝癌患者臨床預后明顯較差。

CK19為細胞骨架蛋白的一種亞型，通常表達于膽管上皮細胞，成熟肝細胞及原發性肝癌細胞不表達［7］。研究發現，即使生長特性和組織形態典型的原發性肝癌也能表達CK19。表達于肝癌細胞質和細胞膜的CK19可分泌至細胞外，與細胞外基質互相作用，將后者的信號傳遞到胞膜的整聯蛋白，激活細胞內信號通路，誘導各種基質降解酶的釋放，破壞基質，最終引起細胞形態的改變。同時，CK19可誘導產生自身抗體，通過免疫反應破壞細胞外基質，利于腫瘤細胞轉移、遷徙，可發生更具侵襲性的生物學行為，從而降低總體生存率。

CK19作為一種已知的干細胞標記物，其陽性反應了其細胞的起源（祖細胞）。研究原發性肝癌的祖細胞來源常常使用CK19的肝干細胞進行標記［8－11］。此外，最近的一項研究報告指出，CK19與腫瘤的侵襲性密切相關［12］。另外研究還證實，CK19的表達常與表皮生長因子相關，從而提高HCC的增長能力。

大多數研究肝癌CK19表達采用免疫組化分析。有研究認為，評估CK19基因與蛋白的表達是研究CK19較好的方法。但在本研究中，筆者采用免疫組化的方法進行研究，也得到了預期的結果。盡管在本研究中已經證實CK19陽性的患者預后較差，甚至在調整了其他危險因素的干擾后，CK19陽性仍然是嚴重影響HCC患者術后不良預后的獨立指標，但是研究的樣本量相對較小，對于結果的穩定性上需要進一步的研究來證實。

［1］ Forner A，Reig ME，de Lope CR，et al．Current strategy for staging and treatment：the BCLC update and future prospects［J］．Semin Liver Dis，2010，30（1）：61－74．

［2］ Boyault S，Rickman DS，de Reyniès A，et al．Transcriptome classification of HCC is related to gene alterations and to new therapeutic targets［J］．Hepatology，2007，45（1）：42－52．

［3］ Katoh H，Ojima H，Kokubu A，et al．Genetically distinct and clinically relevant classification of hepatocellular carcinoma：putative therapeutic targets［J］．Gastroenterology，2007，133（9）：1475－1486．

［4］ Lu XY，Xi T，Lau WY，et al．Hepatocellular carcinoma expressing cholangiocyte phenotype is a novel subtype with highly aggressive behavior［J］．Ann Surg Oncol，2011，18（10）：2210－2217．

［5］ 劉振虹，閆石，王明娟，等．大鼠肝癌發生過程中超微結構、c－myc和 HER－2表達變化及意義［J］．重慶醫學，2013，42（20）：2401－2403．

［6］ Durnez A，Verslype C，Nevens F，et al．The clinicopathological and prognostic relevance of cytokeratin 7and 19 expression in hepatocellular carcinoma［J］．Histopathology，2006，49（1）：138－151．

［7］ 馬洪波，黃濤，韓風，等．3種腫瘤標志物聯合檢測對膽管癌診斷的臨床意義［J］．重慶醫學，2012，41（25）：2603－2604．

［8］ Kim H，Choi GH，Na DC，et al．Human hepatocellular carcinomas with"Stemness"－related marker expression：keratin 19expression and a poor prognosis［J］．Hepatology，2011，54（8）：1707－1717．

［9］ Ariizumi S，Kotera Y，Katagiri S，et al．Combined hepatocellular－cholangiocarcinoma had poor outcomes after hepatectomy regardless of Allen and Lisa class or the predominance of intrahepatic cholangiocarcinoma cells within the tumor［J］．Ann Surg Oncol，2012，19（9）：1628－1636．

［10］Andersen JB，Loi R，Perra A，et al．Progenitor－derived hepatocellular carcinoma model in the rat［J］．Hepatology，2010，51（8）：1401－1409．

［11］Van Hul NK，Abarca－Quinones J，Sempoux C，et al．Relation between liver progenitor cell expansion and extracellular matrix deposition in a CDE－induced murine model of chronic liver injury［J］．Hepatology，2009，49（8）：1625－1635．

［12］郝文勝，周俊平，付貴峰．血清中癌胚抗原和細胞角蛋白片段19對局部中晚期肺癌療效的評價［J］．重慶醫學，2013，42（11）：1216－1217．