核因子-κB在BN大鼠脈絡膜新生血管中的表達△

高小燕 何守志

核因子-κB(nuclear factor-kappa B，NF-κB)是1986年首先從B細胞核中提取到，近年在腫瘤中研究較熱的一個核轉錄因子，參與多種炎癥細胞因子、趨化因子及免疫基因表達的轉錄和調節。一般情況下，NF-κB 與其抑制蛋白 IκB(inhibitory кB，IκB)結合呈非活性狀態，但受刺激后可以和IκB解離，進入細胞核內，參與細胞因子、黏附分子、生長因子和急性蛋白等因子的轉錄調控，在疾病的調節，尤其是炎癥性疾病的啟動中起重要作用［1］。近年來研究的焦點在于NF-κB在新生血管形成中的作用［2-3］。本實驗僅就NF-κB在脈絡膜新生血管(choroidal neovascularization，CNV)中的表達作一研究。

1 材料與方法

1.1 儀器設備與主要藥品試劑 氪激光機(美國Coherent公司，型號為Novua 2000);FFA攝像機(德國Heideberg公司);Image-Pro Plus 5.1圖像分析系統(美國Media Cybernetics公司)。小鼠抗大鼠NF-κB單克隆抗體0.1 mL、AEC顯色試劑盒(北京中杉金橋生物技術有限公司);兔抗大鼠單核細胞趨化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)多克隆抗體、血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)原位雜交檢測試劑盒、即用型SABC 試劑盒、0.01 mol·L－1枸櫞酸鹽緩沖液、SP-9002免疫組織化學染色試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 BN大鼠CNV模型的建立 48只健康雄性棕色BN大鼠由中國醫學科學院實驗動物中心提供，系清潔級動物，體質量200～220 g，隨機選取一眼作為實驗眼。0.5 g·L－1復方托品酰胺滴眼液滴雙眼散瞳，左下腹腔內注射100 g·L－1水合氯醛溶液(3.0 mL·kg－1)麻醉，檢查雙眼前節和眼底均正常。依照趙世紅等［4］的方法建立CNV動物模型，實驗眼前放置－53 D的接觸鏡，氪激光(647 nm)距視盤等距離圍繞視盤視網膜光凝20點。激光參數:功率360 mW，光斑直徑 100 μm，曝光時間 0.05 s。

1.2.2 FFA檢查 分別于視網膜光凝后 1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周，各選取 6只大鼠進行全身麻醉、散瞳，腹腔內注射100 g·L－1熒光素鈉0.3 mL，行FFA檢查。……