茶多酚有效成分對淋巴細胞增殖的抑制和抗氧化作用

茶多酚有效成分對淋巴細胞增殖的抑制和抗氧化作用

李偉，王遂泉，吳辛剛，洪為松，傅麗芳，盧良君，許愛娥

(杭州市第三人民醫(yī)院，浙江 杭州310009)

Effects of active ingredients of tea polyphenol on inhibiting lymphocyte proliferation and antioxidation

LI Wei, WANG Sui-quan, WU Xin-gang, HONG Wei-song, FU Li-fang, LU Liang-jun, XU Ai-e

(theThirdPeople′sHospitalofHangzhou，Hangzhou310009,China)

研究表明，茶多酚具有很強的消除有害自由基、抗衰老等多種藥理作用[1]，茶多酚臨床治療白癜風具有較明顯的效果，但其各類組分在臨床治療白癜風所發(fā)揮的作用還未見報道。

1材料與方法

1.1動物C57BL/6(B6)小鼠，體質量(20±2)g，由浙江中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供。

1.2主要藥品與試劑H2O2、EGCG均購自美國Sigma公司，槲皮苷、山奈苷均購自中國藥品生物制品檢定所，沒食子酸(中國食品藥品檢定研究院)，CD8+T細胞分離抗體(Miltenyi，德國) ，MTS細胞增殖試劑盒(Promega，美國),CD3單抗、CD28單抗(eBioscience，美國)

1.3實驗方法

1.3.1CD8+T淋巴細胞分離培養(yǎng)及藥物成分干預小鼠脾臟制成單細胞懸液，經(jīng)CD8+T細胞Biotin-Antibody Cocktail、MicroBead Cocktail孵育分離出CD8+T細胞。調整細胞密度為1×109·L-1，除空白及陰性對照孔，各孔均預先用5 mg·L-1的CD3抗體、CD28抗體包被。藥物成分干預孔分別加入不同濃度的4種組分，各樣品作3個復孔。

1.3.2MTS法檢測CD8+T淋巴細胞增殖各藥物成分處理96 h后測A490。

1.3.3IFN-γ測定IFN-γ抗體和CD3及CD28活化抗體鋪板，4℃過夜，按每孔5×104細胞加入CD8+T細胞、藥物處理48 h，最后加入IFN-γ結合抗體和顯色劑，計數(shù)。

1.3.4MTS法測黑素細胞活性鼠永生化黑素細胞(B10BR細胞)常規(guī)培養(yǎng)，調整細胞為5×103/孔，除空白對照組僅加入培養(yǎng)液，其余各孔加入藥液培養(yǎng)24 h。加入H2O224 h后測A490。

2結果

2.14種成分對CD8+T細胞增殖能力的影響槲皮苷有輕微的抑制作用，山奈苷顯示較明顯促進作用，沒食子酸和EGCG均有明顯的抑制效果(P<0.05)。

2.2EGCG、沒食子酸對CD8+T細胞分泌IFN-γ的影響EGCG在0.3 mg·L-1時，IFN-γ分泌量較陽性對照無明顯變化，1、3、10 mg·L-1時，分泌量明顯減少；沒食子酸隨著其作用濃度的不斷升高，IFN-γ分泌逐漸減少。

2.3藥物預處理對H2O2損傷細胞的保護作用H2O2單獨處理后黑素細胞活性為57.3%±4.2%，明顯低于空白對照組(P<0.05)；4種成分預處理均能提高黑素細胞的活性 (P<0.05)。

3討論

機制研究表明，茶多酚可對抗CD8+T細胞對黑色素細胞的殺傷，對黑素細胞有一定的保護作用[2]。我們的結果發(fā)現(xiàn)，同樣濃度下沒食子酸對CD8+T細胞分泌IFN-γ的抑制比EGCG更強，由于CD8+T細胞只有在活化狀態(tài)下才分泌IFN-γ，此表明EGCG和沒食子酸能有效抑制CD8+T細胞的活化。EGCG、槲皮苷、沒食子酸均在10 mg·L-1時達到最大抗氧化作用，但隨著濃度升高，EGCG抗氧化能力變化不大，后二者處理的細胞活性明顯下降，提示槲皮苷與沒食子酸在大于10 mg·L-1會對黑素細胞產(chǎn)生毒性作用，而EGCG安全范圍較大。鑒于EGCG在茶多酚中含量較高，又有較強的抗氧化與抑制CD8+T細胞活化增殖的作用，可以認為其是茶多酚治療白癜風的主要有效成分。以上研究結果可為今后應用茶多酚以及EGCG在臨床治療白癜風提供依據(jù)和參考。

參考文獻:

[1]陳旭, 胡園, 李青山, 等. 表沒食子兒茶素沒食子酸酯對H2O2誘導的SH-SY5Y神經(jīng)細胞損傷的保護作用[J]. 中國藥理學通報, 2011,27(3):320-4.

[1]Chen X, Hu Y, Li Q S, et al. The protective effect of EGCG on hydrogen peroxide induced SH-SY5Y cell injury[J].ChinPharmacolBull, 2011,27(3):320-4.

[2]歐陽杰，吳紀龍，周妙妮，等.茶多酚對CD8+T細胞殺傷白癜風患者黑素細胞的保護作用研究[J].中華皮膚科雜志，2013，46(1)：20-3．

[2]Ou Y J, Wu J L, Zhou M N, et al．Protective effects of tea polyphenols against the destruction of melanocytes by CD8+T cells from vitiligo patients[J].ChinJDermatol, 2013，46(1)：20-3．

網(wǎng)絡出版時間：2015-1-9 13:37網(wǎng)絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/doi/10.3969/j.issn.1001-1978.2015.02.029.html

◇研究簡報◇

中國圖書分類號：R-332;R284.1;R331.125;R392.11;R392.12;R758.41

關鍵詞:茶多酚；抑制；黑素細胞；抗氧化；CD8+T淋巴細胞；細胞增殖

Key words:tea polyphenol；inhibit; melanocytes；antioxidant；CD8+T lymphocytes；cell proliferation

通訊作者許愛娥(1945-)，女，教授，博士生導師，研究方向：色素性皮膚病，，Tel:0571-87827535，E-mail:xuaiehz@msn.com

作者簡介：李偉(1987-)，男，碩士生，研究方向：色素性皮膚病，E-mail: liwei1586@126.com；

基金項目：國家自然科學基金資助項目(No 81271758)；杭州市重大科技創(chuàng)新專項(No 20122513A02)；浙江省公益性技術應用研究計劃項目(No 2011C23134)；杭州市科技局項目(No 20110733Q03)

收稿日期：2014-11-04，修回日期：2014-11-28

文獻標志碼：A

文章編號：1001-1978(2015)02-0294-02

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2015.02.029