血細(xì)胞分析儀（SysmexXN－2000）計數(shù)低值血小板樣本方法學(xué)比較

劉　洋，段美慶，張　蕾，薛　杰，韓艷秋（內(nèi)蒙古醫(yī)科大附屬醫(yī)院檢驗科，內(nèi)蒙古　呼和浩特　010059）

血細(xì)胞分析儀（SysmexXN－2000）計數(shù)低值血小板樣本方法學(xué)比較

劉洋，段美慶，張蕾，薛杰，韓艷秋
（內(nèi)蒙古醫(yī)科大附屬醫(yī)院檢驗科，內(nèi)蒙古呼和浩特010059）

摘要：目的：研究血細(xì)胞分析儀（Sysmex XN-2000）的熒光法檢測低值血小板對臨床的應(yīng)用價值.方法：將180例血液樣本分成3組，PLT＜50×109/L組、100×109/L≤PLT≤300×109/L組和PLT＞300×109/L組.用手工法、熒光法(PLT-F)、電阻抗法(PLT-I)同時計數(shù)血小板，參考方法為手工法計數(shù).將手工法與熒光法、手工法與電阻抗法的PLT計數(shù)結(jié)果進(jìn)行配對t檢驗.結(jié)果：SYSMEX XN-2000儀器上，100×109/L≤PLT≤300×109/L組和PLT＞300×109/L組，三種方法PLT計數(shù)結(jié)果無顯著性差異(P＞0.05).PLT＜50×109/L組，熒光法(PLT-F)和參考方法無顯著性差異(P＞0.05)，電阻抗法(PLT-I)和參考方法則有顯著性差異(P＜0.05).結(jié)論：SYSMEX XN-2000熒光法用于檢測低值血小板準(zhǔn)確性較高，對于異常血液樣本計數(shù)血小板能夠提供一個準(zhǔn)確而客觀的手段，為臨床提供可靠的診療依據(jù).

關(guān)鍵詞：XN-2000血細(xì)胞分析儀；血小板；熒光法；電阻抗法

隨著血細(xì)胞分析儀的飛速發(fā)展，進(jìn)入21世紀(jì)以來，在臨床常規(guī)檢測大規(guī)模使用各種血細(xì)胞分析儀后，關(guān)于血小板計數(shù)準(zhǔn)確性的問題不斷地引起關(guān)注和討論.導(dǎo)致血小板計數(shù)不準(zhǔn)確的原因主要是許多儀器檢測紅細(xì)胞和血小板在一個通道，不能準(zhǔn)確地將血小板與非血小板顆粒分開，如小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片、白細(xì)胞碎片以及血小板和紅細(xì)胞的大小分布出現(xiàn)交迭[1，2，3，4].Sysmex XN－2000血細(xì)胞分析儀可以采用兩種方法檢測血小板，分別是電阻抗法（PLT-I)和熒光法（PLT-F).本研究著重探討比較在出現(xiàn)患者血小板低時，電阻抗法和熒光法兩種方法與手工顯微鏡法血小板計數(shù)結(jié)果的比較.

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1血液分析系統(tǒng)日本全自動血細(xì)胞分析儀（Sysmex XN－2000）、全自動制片染色儀（Sysmex SP－1000i）組成的全自動血液分析系統(tǒng).三人共攬顯微鏡，德國萊卡公司提供.

1.1.2試劑日本Sysmex提供的XN－2000原裝進(jìn)口試劑和e-check質(zhì)控品（level1、2)；由中國科華醫(yī)療有限公司提供的EDTA－K2抗凝管.按照“全國臨床檢驗操作規(guī)程”第3版的要求配制血小板稀釋液[5].

1.1.3樣本來源180例樣本為本院住院患者，樣本均用EDTA－K2抗凝管真空采血.

1.2方法

1.2.1樣本分組將180例血液樣本按血小板數(shù)量分3組，即血小板數(shù)量減少組（PLT＜50×109/L)、血小板數(shù)量正常組（100×109/L≤PLT≤300×109/L)和血小板數(shù)量增高組（PLT＞300×109/L).

1.2.2檢測方法

（1）手工法為血小板計數(shù)參考方法：世界衛(wèi)生組織（WHO)推薦的血小板計數(shù)方法，按照“全國臨床檢驗操作規(guī)程”（第3版）的要求配制溶血稀釋劑，成分為1g/dl的草酸銨液.由兩名有經(jīng)驗的檢驗員在顯微鏡下用血細(xì)胞計數(shù)板按照雙盲法人工計數(shù)，取兩次計數(shù)結(jié)果的均值，兩次誤差控制在5%以內(nèi).[6]

（2）儀器法：由經(jīng)培訓(xùn)的人員操作血細(xì)胞分析儀（Sysmex XN－2000），用熒光通道、電阻抗通道對同一樣本進(jìn)行測定，2h內(nèi)計數(shù)完成.

1.2.3重復(fù)性實驗用熒光法和電阻抗法對同一樣本連續(xù)測定10次，計算其變異系數(shù)（CV)和標(biāo)準(zhǔn)差（SD).

1.2.4日間精密度監(jiān)測在相同時間使用e-check低值（批號：18470801)和中值（批號：18470802)質(zhì)控品測量1次，連續(xù)測量20天，分別計算熒光法和電阻抗法的變異系數(shù)（CV)和標(biāo)準(zhǔn)差（SD).

1.2.5統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)用SPSS18.0和Excel統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行處理[7]，計量資料用X±SD表示，兩組比較用t檢驗，以P＜0.05為有差異，具有統(tǒng)計學(xué)意義.

2　結(jié)果

2.1電阻抗法和熒光法測定的重復(fù)性結(jié)果.

熒光法SD=4.2，CV為2.6%，電阻抗法SD=4.9，CV為3.0%.

2.2儀器日間精密度監(jiān)測結(jié)果見表1.

表1血細(xì)胞分析儀（SysmexXN-2000）質(zhì)控品e-check監(jiān)測結(jié)果

2.3將手工法與熒光法、手工法與電阻抗法的PLT計數(shù)結(jié)果進(jìn)行配對t檢驗.結(jié)果見表2，從表中可知，100×109/L≤PLT≤300×109/L組（B組）和PLT＞300×109/L組（C組）三種方法所測結(jié)果無顯著性差異（P＞0.05)，而PLT＜50×109/L組（A組）中電阻抗法和手工法血小板檢測結(jié)果有顯著性差異（P＜0.05)，結(jié)果無顯著差異（P＞0.05)的為熒光法和手工法檢測值.

表2 3種方法對180例全血樣本血小板檢測結(jié)果

3　討論

從實驗結(jié)果可以看出，當(dāng)樣本中血小板數(shù)量PLT＜50×109/L時，用熒光法（PLT－F)與手工法計數(shù)血小板比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05)，電阻抗法與手工法計數(shù)血小板比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05)；當(dāng)血小板數(shù)量PLT＞300×109/L，熒光法、電阻抗法計數(shù)和手工法計數(shù)血小板均無顯著性差異（P＞0.05)，同時在提示血小板值較高時，儀器計數(shù)結(jié)果準(zhǔn)確性較高.這表明，當(dāng)儀器檢測低值血小板數(shù)量的樣本時，血小板計數(shù)的準(zhǔn)確性可能受到多種因素的影響[8，9].當(dāng)一些體積較大或巨大血小板、畸形血小板、血小板聚集、血小板衛(wèi)星現(xiàn)象[10]出現(xiàn)時，電阻抗法都可能未正常計數(shù)，造成血小板假性減少[11，12].所以當(dāng)面對PLT減少，如再生障礙性貧血、急性心肌梗死、糖尿病、急性白血病、原發(fā)性血小板減少性紫癜等的患者，大血小板會增多，造成血小板檢測結(jié)果偏低，出現(xiàn)這種情況，最好使用熒光法檢測血小板.

參考文獻(xiàn)：

〔1〕Tatsumi N，Tsuda I，F(xiàn)unaharaY.Assessment of hematological data obtained by the aperture impedance method in blood from patients with thalassemia or hemoglobinpoathy [J]. ICMR Annals，1998，8(1)：49-60.

〔2〕Nakagoshi R. Abnomal cases of platelet distribution[J]. Med Tech，1991，40(1)：41-48.

〔3〕孫克，王威.電阻抗法血小板計數(shù)的影響因素及對策[J].醫(yī)學(xué)綜述，2012，18(15)：2470-2472.

〔4〕張黎蕾，張葵.Sysmex XE-2100全自動血細(xì)胞分析儀血小板聚集報警信息可靠性分析[J].臨床輸血與檢驗，2012，14(1)：60-61.

〔5〕Turgeon ML.檢驗醫(yī)學(xué)：基礎(chǔ)理論與常規(guī)檢驗技術(shù)[M].西安：世界圖書出版西安有限公司，2012.83.

〔6〕葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].南京：東南大學(xué)出版，2006.122.

〔7〕顏虹，徐勇勇.醫(yī)學(xué)統(tǒng)計學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2005.214.

〔8〕車軼群，沈迪，董瑩瑩，等.3種方法檢測血小板的對比分析[J].北京醫(yī)學(xué)，2011（7）：61-63.

〔9〕孫啟國.血細(xì)胞分析儀檢測血小板偏低的臨床分析[C].中華醫(yī)學(xué)會第7次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編，2012.223.

〔10〕薛飛平，孫瑞雪，吳理鋒.3種方法對巨大血小板的檢測分析[J].檢驗醫(yī)學(xué)，2010（5）：30-31.

〔11〕張琴，廖揚.Sysmex XN-3000全自動血細(xì)胞分析儀血小板計數(shù)性能評價分析[J].生物技術(shù)通訊，2014，4(25)：550-553.

〔12〕叢玉隆，樂家新.現(xiàn)代血細(xì)胞分析技術(shù)與臨床[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2005.10-15.

中圖分類號：R735.35

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-260X（2015）09-0033-02