由腸炎沙門菌引起的食物中毒的病原檢測與同源性分析

黃 冰，周 勇，龍佳麗，侯水平，張欣強，吳新偉△

(1.廣東省廣州市疾病預防控制中心 510440；2.南方醫科大學公共衛生與熱帶醫學學院,廣州 510440)

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·案例分析·

由腸炎沙門菌引起的食物中毒的病原檢測與同源性分析

黃 冰1，周 勇1，龍佳麗2，侯水平1，張欣強1，吳新偉1△

(1.廣東省廣州市疾病預防控制中心 510440；2.南方醫科大學公共衛生與熱帶醫學學院,廣州 510440)

沙門菌； 食物中毒； 病原檢測

據統計，國內報道的細菌性食物中毒事件中，沙門菌引起的占70%～80%[1-2]，其中引起沙門氏菌食物中毒的食品中，超過90%是肉類等動物性產品。2014 年8月，廣州市發生一起因為食用蛋糕店被污染的蛋糕而引發的食物中毒事件，經流行病學調查、實驗室檢測，并結合臨床癥狀，確認這是由腸炎沙門菌引起的食物中毒，現對有關標本的病原檢測與同源性分析結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2014年8月下午10點廣州市疾控中心接到報告，市某小區數人出現腹痛、腹瀉并伴有發熱癥狀到醫院就診，經調查，患者均食用過小區附近某蛋糕店出售的蛋糕。5例患者中最短潛伏期為4 h，最長18 h，發病大多集中在食用蛋糕后4～10 h。患者的主要臨床癥狀為急性胃腸道中毒癥狀，腹痛，腹瀉，黃色水樣便、有惡臭，發熱、最高體溫達39.9 ℃，經使用抗菌藥物及對癥治療3 d后，病情全部好轉，無死亡患者。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 自動生化檢定儀(美國貝克曼庫爾特Unicel Dxc 800 Synchron),脈沖凝膠電泳儀(德國耶拿Rotaphor 6.0)和凝膠成像系統BioRad Gel Doc Imaging system檢測所用增菌液、分離培養基均為廣東環凱生物科技有限公司產品；API 20E鑒定試劑條、VITEK 2鑒定卡(GN卡)均為法國生物梅里埃公司產品；沙門菌屬診斷血清由寧波天潤生物藥業有限公司生產，均在有效期內使用。

1.2.2 樣品采集 患者肛拭子5份，蛋糕店廚師肛拭子、手拭子各1份保存于Cary-Blair運送培養基中送檢，2份糕點原料樣品、3份剩余食品樣品，低溫送檢。

1.2.3 病原菌篩查與鑒定 病原菌篩查與鑒定按照中華人民共和國衛生部頒發的《食品衛生微生物檢驗方法》GB/T 4789.4-2010操作。針對沙門菌、金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌、志賀菌、致瀉性大腸埃希菌、蠟樣芽孢桿菌先増菌，接種選擇性平板，三糖鐵生化后使用全自動生化鑒定系統進行鑒定[3]。

1.2.4 抗菌藥物敏感性實驗 采用瓊脂擴散法(K-B法)按照美國國家臨床實驗室標準化委員會(CLSI 2013)的標準對抑菌圈進行判定。14種藥敏紙片包括氨芐西林、氨芐西林/舒巴坦、頭孢唑啉、頭孢他啶、頭孢吡肟、頭孢噻肟、環丙沙星、氯霉素、鏈霉素、磺胺復合物、四環素、萘啶酸、慶大霉素、甲氧芐氨嘧啶[4]。

1.2.5 脈沖場凝膠電泳 脈沖場凝膠電泳參照美國Pulsenet推薦的沙門菌脈沖場電泳標準方法進行操作。PFGE 后的電泳圖譜用BioNumerics 6.6軟件進行分析。PFGE分型的相對分子質量參考標準菌株為沙門菌H9812。

2 結 果

2.1 細菌菌型鑒定結果分析 從5份患者肛拭樣品、廚師肛拭子1份、手拭子1份、3份剩余食品樣品均檢出生物學形狀一致的沙門菌，而2份食品樣品中未檢出致病菌，所有樣品未檢出金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌、志賀菌、致瀉性大腸埃希菌、蠟樣芽孢桿菌。10株可疑菌株的沙門菌血清學分型實驗結果：O-F多價、O9和Hg,m呈強凝集,其抗原結構式為9:g,m:-,對照White-Kauffmann-Le Minor抗原表，符合腸炎沙門抗原結構。根據生化和血清學結果判定病原菌為腸炎沙門菌。

2.2 抗菌藥物敏感性分析 對10株腸炎沙門菌進行了14種抗菌藥物的藥敏試驗，10株腸炎沙門菌具有相同的耐藥譜，除對頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢吡肟等第3代和第4代頭孢類抗菌藥物以及環丙沙星、慶大霉素敏感外，對氯霉素、萘啶酸、磺胺復合物、鏈霉素、四環素以及甲氧芐氨嘧啶等均為耐藥。見表1。

表1 10株腸炎沙門菌藥敏實驗結果

注：R為耐藥；S為敏感。

2.3 病原菌溯源分析 分離到的10株腸炎沙門菌經XbaI 酶切得到PFGE 圖譜，圖譜結果用BioNumerics6.6軟件分析，結果顯示：5份患者肛拭子與1份廚師肛拭子、1份手拭子、3份剩余食品樣品的腸炎沙門菌的PFGE 相同帶型，其PFGE 圖譜完全一致，同源性達100%，說明所有菌株均來自同一克隆株。

3 討 論

細菌性食物中毒是指由于進食被細菌或細菌毒素所污染的食物而引起的急性感染中毒性疾病。細菌性食物中毒是最常見的食物中毒，占各類食物中毒的60%～80%，引起細菌性食物中毒的細菌主要有沙門菌、副溶血性弧菌、大腸埃希菌、變形桿菌、蠟樣芽胞桿菌、金黃色葡萄球菌、肉毒毒素等，沙門菌引起的細菌性食物中毒多年來在廣州地區引起食物中毒的病原菌中一直占前3位[5-6]。該菌在自然界中的分布十分廣泛，多種家禽、家畜、魚類、飛鳥、鼠類及野生動物的腸腔及內臟中能查到此類細菌。細菌由糞便排出，污染飲水、食物、餐具，尤以新鮮肉類、蛋品、乳類較易受污染，人進食后造成感染。本次食物中毒事件經流行病學調查、實驗室病原學檢測及同源性分析，依據WS/T13-1996《沙門菌食物中毒診斷標準及處理原則》和GB14938-1994《食物中毒診斷標準及技術處理原則》初步判定為這是一起因為食用被腸炎沙門菌污染的蛋糕而引起的食物中毒事件。

本事件中，詢問蛋糕店廚師最近無發燒、腹瀉等癥狀，也沒有進食過當日制作的糕點，可疑蛋糕所用的2份糕點原料中未均檢出腸炎沙門菌，可排除原料污染的因素。而廚師肛拭子和手拭子中均檢出腸炎沙門菌，3份剩余食物樣品也檢出腸炎沙門菌，且PFGE圖譜與5例患者的分離株PFGE圖譜同源性為100%，說明廚師為腸炎沙門菌的帶菌者。此次食物中毒的發生過程可能是廚師將所帶的腸炎沙門菌污染了由其制作的糕點，患者進食糕點后被感染從而引起食物中毒。

在食物中毒事件的處理中，首先要注意標本采集的完整性和合理性，其次如果能確定為感染來源的物料種類，要進一步溯源到其最初的污染源及污染途徑，才能通過對發生于某一點的事件處置實現更大范圍的溯源和相關疾病的有效防控[7]。本次食物中毒事件中及時采集到廚師的肛拭子和手拭子是成功追溯到病原菌的源頭和傳播途徑的基礎，說明在此類事件中樣品采集的重要性。因此若要從根本上控制食源性疾病的發生，就要對不同來源的菌株進行溯源研究，追溯致病食品的來源所在，查明污染源頭，切斷傳播途徑。同時為預防類似食物中毒事件的再次發生，各地衛生監督部門應加強對餐飲行業從業人員的健康檢查，加強食物中毒事件的檢測和風險評估，以減少食物中毒事件的發生。

[1]王兵．沙門氏菌引起的食物中毒[J]．當代醫學，2012，18(23)：160．

[2]曹霞.一起沙門氏菌食物中毒的病原檢測分析[J].公共衛生與預防醫學,2012,23(6)：84-85.

[3]陳玉紅.一起沙門菌引起食物中毒的檢驗結果分析[J].檢驗醫學與臨床,2013,10(2)：206-207.

[4]張金華，王桂紅.一起由都伯沙門氏菌引起食物中毒的調查分析[J].東南大學學報:醫學版,2013,32(1):29-31.

[5]Tenover FC,Arbeit RD,Goering RV,et al． Interpreting chromosomal DNA restriction patterns produced by pulsed-field gel electrophoresis:criteria for bacterial strain typing[J].J Clin Microbiol,1995,33(9):2233-2239．

[6]景欽隆,毛新武,何潔儀,等.2006～2008年廣州市食源性疾病暴發監測分析[J].中國食品衛生雜志，2010,22(2):160-164.

[7]周勇,張欣強,侯水平,等.廣州市76株沙門菌的血清型分布及耐藥性分析[J].現代預防醫學,2014,41(2):349-352.

廣東省廣州市醫學重點學科建設項目(2013-2015-07)；廣東省廣州市醫藥衛生科技項目重點項目(20121A021019)

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.14.071

B

1672-9455(2015)14-2135-02

2015-02-25

2015-04-15)

△通訊作者，E-mail：Yangbo76@126.com。