芩雙顆粒中甘草酸銨含量測定方法研究

李　鎖，蘇　明，王光函，鄒桂欣，尤獻民（.遼寧中醫藥大學，遼寧　沈陽　00；.大連大學，遼寧　大連　6000；.遼寧省中醫研究院，遼寧　沈陽　004）

芩雙顆粒中甘草酸銨含量測定方法研究

李鎖1，蘇明2，王光函3，鄒桂欣3，尤獻民3
（1.遼寧中醫藥大學，遼寧沈陽110032；2.大連大學，遼寧大連116000；3.遼寧省中醫研究院，遼寧沈陽110034）

摘要：目的：建立芩雙顆粒中甘草酸銨含量的測定方法.方法：采用ZORBAX SB-Aq色譜柱(4.6 mm×250mm，5μm)，流動相為乙腈（B）-0.1%磷酸水溶液（A）梯度洗脫，檢測波長為237nm，流速為1.0mL?min-1，柱溫為30℃.結果：甘草酸銨在0.240～1.440μg(r=0.9996)范圍內線性關系良好.精密度、重現性、穩定性的RSD均小于2%，甘草酸銨的平均加樣回收率分別為95.10%.結論：所采用方法可靠、準確、重現性好，可用于該制劑的含量測定及質量控制.

關鍵詞：芩雙顆粒；甘草酸銨；含量測定

芩雙顆粒是中藥復方制劑，是由黃芩、甘草、金銀花等9種中藥組成，具有清熱宣肺、止咳化痰、佐以平喘之功效，主要用于治療肺熱壅肺型咳嗽、喘證.甘草為方中主藥，來源于豆科（Leguminosae甘草屬（Glycyrrhizin）植物烏拉爾甘草（Glycyrrhiza uralensis Fisch.）、脹果甘草（Glycyrrhiza inflate Bat.）或光果甘草（Glycyrrhiza glabra L.）的干燥根及根莖，具有補脾益氣、祛痰止咳、清熱解毒、緩急止痛、調和諸藥之功效[1].甘草的主要化學成分包括甘草酸、甘草次酸、甘草黃酮、甘草甜素（亦甘草酸銨）、甘草多糖等等[2-3].現代研究表明，甘草的活性成分甘草酸銨對許多疾病有預防和治療作用[4]，如具有腎上腺皮質激素樣作用而無其副作用，抗炎抗變態明顯，并有抗病毒、抗潰瘍、免疫調節、保護膜結構和解痙作用[5].本文采用了HPLC法測定了芩雙顆粒中甘草酸銨的含量，從而建立該制劑的質量控制標準.采用的該方法能準確測定甘草酸銨的含量，可作為作為中藥復方制劑芩雙顆粒的質量控制.

1　儀器和試藥

Agilent 1100高效液相色譜儀（Chemstation色譜工作站，美國Agilent公司)，SK250LH超聲波發生器（上海科導超聲儀器有限公司)，芩雙顆粒（遼寧省中醫研究院自制），甘草酸銨對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110731-201013），乙腈、磷酸均為色譜純，乙酸乙酯（沈陽禹王化波儀器有限公司），水為娃哈哈純凈水（杭州娃哈哈集團公司），其余試劑為分析純，所購藥材經遼寧中醫藥大學李峰教授鑒定.

2　方法與結果

2.1溶液的制備

2.1.1對照品溶液的制備

精密稱取甘草酸銨對照品0.9911g，置50mL容量瓶中，加乙醇制成每1mL含0.811mg的溶液，作為對照品溶液. 2.1.2供試品溶液的制備

取樣品約1g（2份)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密量取70%乙醇25mL，稱重，超聲處理30min，放冷，稱重，70%乙醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續濾液即得.

2.1.3陰性對照溶液

按芩雙顆粒處方比例稱取除甘草的其余藥味各一份，按芩雙顆粒顆粒的生產工藝分別制成甘草空白樣品，按照上述供試品溶液的配制方法制成陰性樣品溶液.

2.2色譜條件

采用ZORBAX SB-Aq色譜柱（4.6×250mm，5μm），流動相為乙腈（B）-0.1%磷酸水溶液（A）梯度洗脫，檢測波長為237nm，流速為1.0mL?min-1，柱溫為30℃.

表1梯度洗脫時間

2.3方法學考察

2.3.1專屬性考察

分別精密吸取供試品溶液、陰性對照品溶液各10μL，在“2.2”項下色譜條件下測定.結果表明：陰性對照溶液在甘草酸銨對照品相應的保留時間處無干擾，該方法專屬性良好.色譜圖見圖1.（甘草酸銨保留時間為29.860min）

圖1 A為對照品溶液、B為芩雙顆粒供試液、C為陰性供試液

2.3.2線性關系考察

分別精密吸取2.0、4.0、6.0、8.0、10、15及20μL，分別注入高效液相色譜儀，測定；以甘草酸銨峰面積（y）為縱坐標、進樣量（x）為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程y=568.4x-6.260（r=0.9996），結果表明，甘草酸銨在0.240～1.44μg范圍內，線性關系良好.

2.3.3精密度試驗

取芩雙顆粒（批號1），研細，精密稱取4g，按“2.1.2”項下制備供試品溶液，按“2.2”項下色譜條件連續進樣6次，測得峰面積.計算，甘草酸銨面積的RSD為1.83%（n=6)，表明精密度良好.

2.3.4重現性試驗

取同一批芩雙顆粒，研細，精密稱取4g，平行6份，按“2.1.2”項下制備供試品溶液并進行測定，計算樣品中甘草酸銨含量分別為0.9217mg?g-1，RSD為1.69%.

2.3.5穩定性試驗

取上述同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10、12h進樣測定，計算，甘草酸銨RSD為1.9%.結果表明供試品溶液在12小時內穩定.

2.3.6加樣回收率試驗

精密稱定已知含量芩雙顆粒顆粒細粉約2g，平行9份，精密加入對照品溶液各1mL，按“2.1.2”項下制備供試液，按“2.2”項下的色譜條件進行測定，計算回收率.結果見表2.

結果表明芩雙顆粒中甘草酸銨平均回收率為95.10%，

RSD為2.39%，說明此方法的準確性良好.

表2加樣回收率實驗結果

2.4樣品測定

取不同芩雙顆粒細粉約4g，精密稱定，平行3份，按“2.1.2”項下制備供試品溶液，在“2.2”項下色譜條件測定，結果見表3.

表3甘草酸銨含量測定結果（n=3，mg?g-1）

3　討論

3.1流動相的選擇

參考《中華人民共和國藥典：一部》（2010年版）甘草含量測定項下的流動相為乙腈-0.05%磷酸溶液，本實驗通過調整流動相比例，選用乙腈-0.1%磷酸水為流動相，結果表明甘草酸銨色譜峰與相鄰雜質峰分離較好，保留時間適宜，故選用乙腈-0.1%磷酸水作為流動相.

3.2提取方法的選擇

研究過程中比較了回流提取和超聲提取方法，結果表明兩種方法結果差別不大，超聲提取法操作更為簡便，因此確定使用超聲法提取，同時對提取時間進行選擇，超聲30min可將甘草酸銨充分提取，確定提取時間為30min.

3.3測定結果分析

實驗數據表明，采用HPLC法檢測檢測甘草酸銨含量，回收率、重現性及穩定性良好，結果準確可靠，可用于芩雙顆粒的質量控制和分析.

參考文獻：

〔1〕李薇，宋新波，張麗娟，等甘草中化學成分研究進展[J].遼寧中醫藥大學學報，2012，7(14)：40-43.

〔2〕張利.甘草的藥理作用及現代研究進展[J].Clinical Journal of ChineseMedicine，2014，6(10)：148-149.

〔3〕于輝，李春香，宮凌濤，等.甘草的藥理作用概述[J].現代生物醫學發展，2006，6(4)：77-79.

〔4〕黃惠蓮，周燕雙，宋麗莉，等.不同提取工藝下甘草提取物中甘草酸銨含量測定研究[J].中國現代醫藥，2011，33(18)：47-50.

〔5〕余會元.甘利欣治療病毒性肺炎的治療觀察[J].中西醫結合肝病雜志，1994，17(8)：40-41.

基金項目：國家科技重大專項（2010ZX09401-304）

中圖分類號：R927.2

文獻標識碼：A

文章編號：1673-260X（2015）09-0039-02